El muestreo de sangre repetido del pequeño animal de laboratorio es un aspecto importante de la optimización del plomo farmacéutico. Este protocolo detalla las habilidades microquirúrgicas para establecer un modelo de rata de canulación de vena yugular permanente. Esta técnica puede establecer de manera eficiente un modelo de rata de canulación de vena yugular y recolectar repetidamente muestras de sangre a través de la cánula en ratas conscientes mientras evita el estrés y el dolor.
Es importante localizar la vena yugular y su canulación, ya que la demostración visual de la complejidad anatómica no está disponible para este modelo. Para comenzar, prepare la estación de trabajo aséptica con alcohol medicinal al 75%, luego anestesia a la rata afeitada con isoflurano mezclado con oxígeno. Inyecte por vía subcutánea la solución de meloxicam a una dosis de dos miligramos por kilogramo, luego levante cuidadosamente la piel cerca de la clavícula en el lado derecho de la línea media del cuello con fórceps y, con un par de tijeras quirúrgicas, haga una incisión de 1,5 a 2 centímetros de largo hacia el pecho.
Para exponer la vena yugular inferior, use tijeras de iris para diseccionar la delgada cubierta de tejido. El extremo cefálico proximal de la vena yugular externa consta de dos ramas que se pueden identificar visualmente. Levante la vena yugular junto con su tejido conectivo membraneoso para visualizar el ganglio linfático unido a la vena yugular.
Separe cuidadosamente la vena a lo largo de la dirección vascular del músculo, la grasa y otros tejidos circundantes. Empuje las pinzas debajo de la vena yugular sin dañar los vasos sanguíneos colaterales y pase dos piezas de sutura 6-0 debajo de la vena para marcar los dos extremos del vaso sanguíneo individualmente. Tire de una pieza de la sutura lo más lejos posible hacia la cabeza de la rata y ligar la vena cranealmente con dos o tres nudos usando fórceps.
Coloque la segunda ligadura en el extremo caudal de la vena con un nudo suelto. Conecte un catéter de poliuretano, o PU, de 11 centímetros a la jeringa de punta roma preparada llena de solución salina heparinizada y empuje lentamente la solución salina heparinizada en el catéter para evitar burbujas de aire. Empuje el lado plano sin punta de las pinzas debajo de la vena yugular para salir por el otro lado.
Haga un pequeño corte en forma de V en la vena cerca de la corbata craneal con un par de microscisoras castroviejo, y abra suavemente la incisión con la punta de las pinzas dilatadoras del vaso del codo. Corte la abertura oblicua del extremo frontal del catéter de la vena yugular. Plante el extremo oblicuo del tubo con fórceps y deslícelo en la vena yugular.
Mientras avanza el catéter, retire lentamente las pinzas microquirúrgicas del codo y sujete la superficie externa del vaso con fórceps. Deje de insertar el catéter al golpear la primera marca azul del tubo de PU, que tiene aproximadamente tres centímetros de longitud. Asegure el catéter insertado a la vena con ligaduras caudales y rostrales con fórceps.
Enhebrar una sutura 6-0 a través del tejido expuesto en el lado derecho de la incisión con una aguja de sutura y atar la ligadura con un hemostático. Luego doble el catéter en la segunda marca azul para unirse con la misma ligadura y evitar ocluir el tubo de PU. Después de cortar todo el hilo de sutura adicional, cierre el catéter reemplazando la jeringa de punta roma con un tapón de acero inoxidable de calibre 22.
Coloque la rata en la posición dorsal y limpie suavemente el área entre la escápula con la bola de algodón empapada en alcohol medicinal al 75%. Usando las tijeras quirúrgicas, haga una incisión muy pequeña en el centro del cuello dorsal. A través de la incisión dorsal, guíe y empuje suavemente el trochar debajo de la piel hacia la incisión ventral en el lado derecho del cuello.
Coloque el catéter venoso en el trochar y luego extraiga y guíe el catéter venoso hacia la incisión dorsal. Después de asegurar el catéter exteriorizado en la capa muscular, cierre la capa de piel de las incisiones ventral y dorsal con la sutura de nylon 6-0 y la aguja de sutura e hisifique todas las incisiones quirúrgicas con yodóforo. A continuación, retire el tapón del catéter apretando el catéter con las yemas de los dedos.
Coloque una nueva jeringa de punta roma y retire lentamente la jeringa para analizar el flujo sanguíneo. Sostenga el catéter de nuevo con las yemas de los dedos. Inyecte 0,2 mililitros de solución salina heparinizada y 0,1 mililitros de solución de bloqueo en el catéter con la jeringa de punta roma y, a continuación, reemplace la jeringa con un tapón de acero inoxidable.
Desenganche el catéter y empuje ligeramente el tapón para asegurar la estanqueidad del catéter. Para recolectar muestras de sangre para pruebas hematológicas, coloque a la rata en un retenedor, abra el tapón e inserte la jeringa en el catéter venoso de PU para asegurarse de que el catéter no esté obstruido. Deseche la sangre extraída inicialmente que contenga una mezcla de sangre, solución salina heparinizada y solución de bloqueo del catéter.
Usando una jeringa nueva, recolecte 150 microlitros de muestra de sangre fresca y transfiera la muestra de sangre a un tubo de 0.5 mililitros previamente rociado con K2EDTA. Inyecte 150 microlitros de solución salina normal precalentada e infunda 0,2 mililitros de solución salina normal heparinizada estéril a través del catéter. Inyecte 100 microlitros de la solución de bloqueo en el catéter para garantizar el sellado y la esterilidad del catéter antes de la siguiente recolección de muestras.
En el estudio actual, se investigaron las condiciones fisiológicas y hematológicas durante seis días después de la operación. La mayoría de las ratas se recuperaron dentro de los cuatro a seis días posteriores a la cirugía, como lo demuestra el aumento de peso corporal de más de 10 gramos, la ingesta regular de alimentos, los componentes sanguíneos seleccionados relacionados con la infección, la deshidratación y la inflamación, incluidos los glóbulos blancos, los glóbulos rojos, la hemoglobina y el recuento de plaquetas. Por lo tanto, las ratas requirieron un mínimo de cuatro a seis días para la recuperación después del procedimiento.
La gran ingesta de agua indicó deshidratación en el primer día después de la operación. Además, se estudió la farmacocinética del ácido polifenol elágico natural en el modelo de rata de canulación de vena yugular establecido y la escasa biodisponibilidad del ácido elágico se indicó por su baja concentración plasmática durante 24 horas. El aislamiento correcto de la vena yugular es el primer paso más importante porque la vena yugular incrustada dentro de otros tejidos blandos puede no ser inmediatamente visible para el investigador.
El muestreo secuencial de sangre dentro del mismo animal se puede realizar en el modelo de rata JVC establecido. Es una herramienta útil y robusta para evaluar el rendimiento de las formulaciones de medicamentos in vivo.
