Küçük laboratuvar hayvanından tekrarlanan kan örneklemesi, farmasötik kurşun optimizasyonunun önemli bir yönüdür. Bu protokol, kalıcı bir juguler ven kanülasyon sıçan modeli oluşturmak için mikrocerrahi becerileri detaylandırmaktadır. Bu teknik, bir juguler ven kanülasyon sıçan modelini verimli bir şekilde kurabilir ve stres ve ağrıdan kaçınırken bilinçli sıçanlarda kanül yoluyla tekrar tekrar kan örnekleri toplayabilir.
Juguler veni ve kanülasyonunu bulmak önemlidir, çünkü anatomik karmaşıklığın görsel gösterimi bu model için mevcut değildir. Başlamak için, aseptik iş istasyonunu % 75tıbbi alkol ile hazırlayın, ardından tıraş edilmiş sıçanı oksijenle karıştırılmış izofluran ile uyuşturun. Subkutan olarak meloksikam solüsyonunu kilogram başına iki miligramlık bir dozda enjekte edin, daha sonra boynun orta çizgisinin sağ tarafındaki klavikula yakınındaki cildi forseps ile dikkatlice kaldırın ve bir çift cerrahi makas kullanarak göğse doğru 1.5 ila 2 santimetre uzunluğunda bir kesi yapın.
Juguler venin altını açığa çıkarmak için, ince doku kapağını künt diseke etmek için iris makası kullanın. Dış juguler venin proksimal sefalik ucu, görsel olarak tanımlanabilen iki daldan oluşur. Juguler vene, juguler vene bağlı lenf bezini görselleştirmek için bağ zarı dokusu ile birlikte juguler veni kaldırın.
Damar yönü boyunca damarı çevreleyen kas, yağ ve diğer dokulardan dikkatlice ayırın. Forsepsleri kollateral kan damarlarına zarar vermeden juguler venin altına dürtün ve kan damarının iki ucunu ayrı ayrı işaretlemek için damarın altına iki parça 6-0 dikiş geçirin. Dikişin bir parçasını sıçan kafasına doğru mümkün olduğunca çekin ve forseps kullanarak damarı kraniyal olarak iki ila üç düğümle yağlayabilirsiniz.
İkinci bağı damarın kaudal ucuna bir gevşek düğümle yerleştirin. Heparinize salin ile doldurulmuş hazırlanmış künt uç şırıngasına 11 santimetrelik bir poliüretan veya PU kateter takın ve hava kabarcıklarını önlemek için heparinize salini yavaşça kateterin içine itin. Forsepslerin uçsuz bucaksız düz tarafını juguler venin altından diğer taraftan çıkmak için dürtün.
Bir çift castroviejo mikromakas ile kraniyal bağın yakınındaki damarda küçük V şeklinde bir kesim yapın ve dirsek damarı dilatatör forsepslerinin ucuyla insizyonu yavaşça açın. Juguler ven kateterinin ön ucunun eğik açıklığını kesin. Tüpün eğik ucunu forseps ile yerleştirin ve juguler damara kaydırın.
Kateteri ilerletirken, dirsek mikrocerrahi forsepslerini yavaşça geri çekin ve damarın dış yüzeyini forseps ile sıkıştırın. Yaklaşık üç santimetre uzunluğundaki PU tüpünün ilk mavi işaretine çarptıktan sonra kateteri yerleştirmeyi bırakın. Yerleştirilen kateteri forseps kullanarak hem kaudal hem de rostral ligatürlerle damara sabitleyin.
Bir dikiş iğnesi kullanarak insizyonun sağ tarafındaki açıkta kalan dokudan 6-0'lık bir dikiş geçirin ve bağı bir hemostat ile bağlayın. Daha sonra aynı bağ ile bağlamak için kateteri ikinci mavi işarette bükün ve PU borusunu tıkamaktan kaçının. Tüm ekstra dikiş ipliğini kestikten sonra, künt uçlu şırıngayı 22 gauge paslanmaz çelik bir tapayla değiştirerek kateteri kapatın.
Sıçanı sırt pozisyonuna yerleştirin ve% 75 tıbbi alkole batırılmış pamuk topu ile kürek kemiği arasındaki alanı nazikçe temizleyin. Cerrahi makası kullanarak, dorsal boynun merkezinde çok küçük bir kesi yapın. Dorsal insizyondan, cildin altındaki trokarı boynun sağ tarafındaki ventral insizyona doğru yönlendirin ve yavaşça itin.
Venöz kateteri trokar içine koyun ve ardından dışarı çekin ve venöz kateteri dorsal insizyona doğru yönlendirin. Dışsal kateteri kas tabakasına sabitledikten sonra ventral ve dorsal insizyonların deri tabakasını 6-0 naylon sütür ve dikiş iğnesi ile kapatın ve tüm cerrahi kesileri iyodofor ile sürün. Ardından, kateteri parmak uçlarıyla sıkıştırarak kateter tıkacını çıkarın.
Yeni bir künt uç şırıngası yerleştirin ve kan akışını test etmek için şırıngayı yavaşça geri çekin. Kateteri parmak uçlarıyla tekrar tutun. Künt uç şırıngasını kullanarak kateterin içine 0,2 mililitre heparinize salin ve 0,1 mililitre kilit çözeltisi enjekte edin ve ardından şırıngayı paslanmaz çelik bir tapayla değiştirin.
Kateteri açın ve kateterin sıkılığını sağlamak için fişi hafifçe itin. Hematolojik testler için kan örnekleri toplamak için, sıçanı bir kısıtlayıcıya yerleştirin, fişi açın ve kateterin tıkanmadığından emin olmak için şırıngayı venöz PU kateterine yerleştirin. Bir kan karışımı, heparinize salin ve kateter kilit çözeltisi içeren başlangıçta çekilmiş kanı atın.
Yeni bir şırınga kullanarak, 150 mikrolitre taze kan örneği toplayın ve kan örneğini daha önce K2EDTA ile püskürtülen 0.5 mililitrelik bir tüpe aktarın. 150 mikrolitre önceden ısıtılmış normal salin enjekte edin ve kateterden 0.2 mililitre steril heparinize normal salin enjekte edin. Bir sonraki numune toplamadan önce kateterin sızdırmazlığını ve sterilitesini sağlamak için kateterin içine 100 mikrolitre kilit çözeltisi enjekte edin.
Bu çalışmada postoperatif altı gün içindeki fizyolojik ve hematolojik durumlar araştırılmıştır. Sıçanların çoğunluğu, 10 gramdan fazla vücut ağırlığı artışı, düzenli gıda alımı, beyaz kan hücresi, kırmızı kan hücresi, hemoglobin ve trombosit sayısı dahil olmak üzere enfeksiyon, dehidrasyon ve inflamasyonla ilgili seçilmiş kan bileşenleri ile kanıtlandığı gibi, ameliyattan sonraki dört ila altı gün içinde iyileşti. Bu nedenle, sıçanlar işlemden sonra iyileşme için en az dört ila altı gün gerektirdi.
Büyük miktarda su alımı, operasyon sonrası ilk günde dehidrasyona işaret etti. Ek olarak, doğal polifenol ellajik asidin farmakokinetiği, yerleşik juguler ven kanülasyon sıçanı modelinde incelenmiş ve ellagik asidin zayıf biyoyararlanımı, 24 saat boyunca düşük plazma konsantrasyonu ile belirtilmiştir. Juguler venin doğru izolasyonu en önemli ilk adımdır, çünkü diğer yumuşak dokulara gömülü juguler ven araştırmacı tarafından hemen görülemeyebilir.
Aynı hayvan içinde sıralı kan örneklemesi yerleşik JVC sıçan modelinde gerçekleştirilebilir. İlaç formülasyonlarının performansını in vivo olarak değerlendirmek için kullanışlı ve sağlam bir araçtır.
