يحدد هذا البروتوكول طريقة غير جراحية للحث على آلام الظهر المزمنة في الفئران لمدة تصل إلى 10 أسابيع ، والتي يمكن إجراؤها بسرعة وموثوقية مع الحد الأدنى من التدريب. الجانب الأكثر صعوبة في هذه التقنية هو التعرف على شعور حقن الرباط مقابل حقن العضلات. الشعور بالمقاومة عند التلامس يشير إلى حقن الرباط.
عدم وجود مقاومة يعني أن الإبرة يمكن أن تكون في تجويف العضلات أو البطن. للبدء ، خذ سطحا مستويا معقما لوضع الماوس. بعد ذلك ، ضع محطة استرداد وسادة التدفئة بجوار إعداد الجراحة لنقل الفئران على الفور بعد الحقن.
بعد ذلك ، قم بإعداد urokinase وحقنة هاملتون. ارسم المحلول مسبقا لتقليل الوقت الذي يقضيه الماوس تحت التخدير. بعد تخدير الفأر ، استخدم إصبعين لتحديد أجزاء العمود الفقري القطني في L2 و L3 أسفل القفص الصدري والتحقق من موقع الحقن.
ضع طرف حقنة هاملتون بجوار العمود الفقري. ضع المحقنة بزاوية 45 درجة تقريبا في الرباط المجاور للعظم مباشرة. أدخل طرف الإبرة برفق ، ولكن بحزم ، في الرباط ، واحقنه ببطء حتى يتم حقن جميع الميكرولترات الخمسة.
قم بإزالة الإبرة برفق وببطء. ثم ضع الماوس في محطة استرداد الحرارة حتى يستيقظ ويصبح متحركا. افحص الفئران لمدة ساعة واحدة بعد الجراحة لضمان استمرار جميع الوظائف الحركية الطبيعية.
بعد الجراحة ، تحقق من وزن وموقع حقن الفئران يوميا لمدة أسبوع لمنع أي عدوى أو مضاعفات. قبل الاختبار ، انقل كل إلى حجرة شفافة منفصلة على طاولة الاختبار مع أعلى الشاشة. بعد ذلك ، قم بتحفيز وسادة القدم بخيوط 3.61 Von Frey التي تثير أربعة جرامات من القوة.
يعتبر سحب القدم من ثلاثة إلى خمسة محفزات استجابة إيجابية. الآن ، ضع الخيط الأضعف التالي في السلسلة حتى يتوقف عن الاستجابة للتحفيز الميكانيكي. استخدم الفتيل الأعلى حتى يتم استنباط استجابة ، ثم عد إلى الفتيل السفلي.
باستخدام خوارزمية تركيب المنحنى ، احسب عتبة السحب الميكانيكية ، وهي الحد الأدنى من القوة اللازمة لاستنباط استجابة بنسبة 50٪ من الوقت. لإجراء اختبار هارجريفز ، ضع الفئران في مقصورات على سطح زجاجي يتم تسخينه من الأسفل بواسطة باعث الأشعة تحت الحمراء. قم بقياس الوقت من تطبيق محفز ضوء الأشعة تحت الحمراء على مخلب الفأر الخلفي إلى الانسحاب كمون للقدم.
لاختبار الصفيحة الباردة ، ضع الفئران على جهاز اللوحة الباردة المبرد إلى تسع درجات مئوية تحت الصفر. سجل الوقت الذي يستغرقه الماوس لرفع قدمه بعد وضعه على الجهاز كزمن انتقال لسحب القدم. لإجراء اختبار القلق ، ضع كل في مربع اختبار تفضيل المكان مع ممر بين غرفتين.
يجب أن تكون غرفة جهاز واحدة مضاءة بشكل مشرق ، بينما يجب أن يظل الجانب الآخر مظلما. باستخدام الكمبيوتر ، راقب أوقات إشغال الفاتح والداكن وانتقالاته خلال اختبار مدته 10 دقائق. بعد ذلك ، ضع القوارض النموذجية أو الساذجة على متاهة الصفر ، أو استخدم اختبار تفضيل الضوء أو الظلام المكون من غرفتين.
قم بتقييم الوقت الذي تقضيه في المناطق المغلقة والمفتوحة من المتاهة باستخدام ساعة توقيت. بالنسبة لاختبار انخفاض سكروز سبلاش ، قم برش محلول سكروز بنسبة 10 إلى 30٪ على الرمز الظهري وسجل تكرار ومدة وزمن انتقال الاستمالة لمدة 10 دقائق. لإجراء اختبارات جديدة للأشياء ، تأقلم الفئران بشكل فردي مع قفص بلاستيكي شفاف مع سطح مفتوح لمدة ساعة واحدة.
أضف شخصيتين صغيرتين متطابقتين إلى زوايا متقابلة من القفص لمدة خمس دقائق. تأقلم في يوم الاختبار لمدة ساعة واحدة ، وضع الشكلين الصغيرين المتطابقين في نفس مواضع القفص لمدة خمس دقائق قبل إعادتهما إلى القفص المنزلي. ثم استبدل أحد الأشكال الأصلية بكائن جديد مختلف تماما.
بعد أربع ساعات ، أعد الفئران إلى قفص الاختبار وسجل الوقت الذي تقضيه في استكشاف الأشياء. لتقييم الوظيفة الحركية ، قم ببناء نفق من أنبوب منشفة ورقية مقطوع بالطول على حافة واحدة. انشر النفق على قطعة نظيفة من ورق الطابعة.
امسك الفئران برفق حتى تهدأ. ضع حبر الهند غير السام على مخالب الماوس عن طريق وضعها في بئر حبر أو وسادة ختم أو باستخدام قطعة قطن. حرر الفئران عند مدخل النفق.
اسمح لهم بالركض عبر النفق والتقاطهم في النهاية. سجل مطبوعات الكفوف بناء على طول الخطوة وعرض الخطوة وانتشار إصبع القدم. أظهرت فحوصات فرط الحساسية الميكانيكية والحرارية أن الفئران المصابة بآلام الظهر المزمنة قد زادت بشكل كبير من الحساسية الميكانيكية والحرارة والبرودة مقارنة بالضوابط الساذجة.
أظهر تحليل القلق أن إجمالي الوقت الذي يقضيه في غرفة الضوء في الصندوق الفاتح والداكن وعدد أحداث التربية كان أقل بكثير في الفئران التي تعاني من آلام الظهر المزمنة ، مما يشير إلى القلق. خلال اختبار سبلاش السكروز ، أظهرت الفئران التي تعاني من آلام الظهر المزمنة وقت استمالة أقل وعدد الاستمالة. ومع ذلك ، تم زيادة مقدار الوقت قبل بدء الاستمالة بشكل كبير.
كان طول الخطوة بين الفئران المصابة بآلام الظهر المزمنة والفئران الساذجة مختلفا بشكل كبير. أهم شيء يجب تذكره عند محاولة هذا الإجراء هو أنك تستهدف الأربطة حول العمود الفقري وليس العضلات. يوفر نموذج آلام الظهر المزمنة أداة موثوقة لتقييم مجموعة متنوعة من الأبحاث الجديدة والأدوية وغيرها من العلاجات المحتملة.
