بروتوكولنا هو أول طريقة موثقة للتخدير والتنبيب الرغامي لجراء الفئران قبل سن المراهقة لجراحة القلب والصدر. لقد طورنا أنظمة تخدير ومعدات متخصصة وممارسات مناولة محددة تسمح بالتنبيب الرغامي لجراء فأر C57 Black Six J البالغ من العمر 10 = يوم لجراحة القلب والصدر مع تقليل وفيات الحيوانات. نتوقع أن يتمكن المشغل المتمرس في التنبيب للبالغين من تحقيق الكفاءة في التنبيب قبل المراهقة بعد التدرب على 10 لترات من سبعة إلى ثمانية جراء ، مما يدل على الإجراء الدكتور جيانشين وو ، أحد كبار علماء الموظفين من مختبرنا.
في يوم التجربة ، قم بإعداد معدات متخصصة لتنبيب الجراء البالغة من العمر 10 أيام كما هو موضح في المخطوطة. للجراحة ، استخدم قنية تتكون من أنبوب بلاستيكي بطول 19 ملم متصل بمحول قفل إغراء بلاستيكي 21 ملم. قم بتقوية أنبوب القنية عن طريق إدخال قطعة من الأسلاك النحاسية عبر محول قفل الإغراء.
قم بتأمين جرو مخدر مستلق على منصة التنبيب. قبل التنبيب من الجرو المخدر ، تحقق من عمق التخدير عن طريق منعكس قرصة مخلب. يجب أن يكون منعكس قرصة المخلب موجودا ولكن يتم تقليله بشكل ملحوظ عن منعكس الحيوان الواعي.
أمسك لسان الجرو بملقط صغير واستخدم منظار الحنجرة المصنوع من قطعة من الأسلاك النحاسية وضوء الألياف البصرية المرن لفضح المزمار والحبال الصوتية. قم بإمالة القنية المقواة بحيث تكون نهاية قفل الإغراء أقل قليلا من الطرف ، وبمجرد فصل الحبال الصوتية ، أدخل القنية وقدمها حتى يصبح محول قفل الإغراء خارج الفم مباشرة. ثم قم بإزالة السلك على الفور.
تقييم عمق التخدير بعد التنبيب من خلال قدرة الحيوان على التنفس تلقائيا. انقل الجرو المجفف إلى وسادة تدفئة مضبوطة على 37 درجة مئوية. تأكد من التنبيب الرغامي الناجح للجرو الذي يتنفس تلقائيا عن طريق منع قسطرة التنبيب لفترة وجيزة للتحقق من أن هذا يمنع حركة الصدر.
قم بتوصيل قنية القصبة الهوائية بجهاز التنفس الصناعي ، مما يوفر الأكسجين بنسبة 100٪ بمعدل تدفق لتر واحد في الدقيقة. يجب أن يستغرق الإجراء أقل من 15 ثانية لتقليل إعادة التنفس. بعد تحريض طائرة جراحية للتخدير للجراحة ، تأكد من التنبيب الرغامي عن طريق التحقق من أن وتيرة حركة جدار الصدر تساوي وتيرة جهاز التنفس الصناعي.
ضع الجرو تحت المجهر الجراحي بأهداف 10X و 16X لجراحة احتشاء عضلة القلب. بعد تطهير الجلد ، قم بعمل شق أفقي للجلد بين الضلع الثالث والرابع في الجدار الجانبي الأيسر للصدر باستخدام مشرط. بمساعدة ملقط ناعم ، افتح الصدر عن طريق تشريح حاد للمساحة الوربية واستخدم مبعدة لإبقاء المساحة مفتوحة.
إحداث احتشاء عضلة القلب عن طريق ربط الشريان التاجي الأيسر البعيد بالزائدة الأذينية اليسرى بخياطة خيوط أحادية البولي بروبيلين 9-0. بعد 10 دقائق من جراحة الاحتشاء ، أغلق الجلد بخياطة 7-0. تنظيف الدم مع 70 ٪ من الإيثانول أو المياه المالحة وتطهير شق مع Betadine.
اسمح للحيوان بالتعافي وضمان استئناف التنفس التلقائي في غضون بضع دقائق. ثم أعد الجرو إلى غرفة التسخين المسبق المؤكسج وراقبه باستمرار أثناء التعافي. عندما يتم استعادة رد الفعل الصحيح ، قم بإخراج الجرو.
فرك بلطف الجرو مع الفراش قفص المنزل. حافظ على دفء الجرو وتأكد من أن التنفس منتظم وأن الجرو قادر على الحركة التلقائية. أعد السد إلى القفص.
ثم أعد جميع الجراء عندما يتعافون تماما من التخدير. ضع السد والجراء طوال الليل في قفص يوضع نصفه على وسادة تدفئة عند 37 درجة مئوية. في اليوم الثالث بعد الجراحة ، قم بتأمين الجرو المخدر في وضع ضعيف على وسادة تدفئة عن طريق لصق الذيل.
ضع خيطا فوق القواطع وقم بلصق الجرو في موضعه وحافظ على الرأس ممتدا إلى مخروط الأنف. تطهير الجلد مع 70 ٪ من الإيثانول. باستخدام مقص دقيق ، قم بعمل شق سنتيمتر واحد في الجلد فوق الشريان السباتي المشترك الأيمن على طول القصبة الهوائية وقم بقنية الوعاء المكشوف باستخدام أنبوب بولي إيثيلين أحادي التجويف متصل بإبرة قياس 26 لإعطاء 0.2 ملليلتر من محلول ملحي هيبارين لمدة دقيقة واحدة بعد التسبب في سكتة قلبية كما هو موضح في المخطوطة ، تشريح الوريد الوداجي الأيمن عبر الشق السابق ونقله.
قم بتخلل القلب ب 0.2 ملليلتر من PBS ثم مع 0.1 ملليلتر من 0.2٪ Alcian Blue لتلطيخ عضلة القلب عن بعد غير المحتشى. تحقق من التروية الناجحة ، كما يتضح من غسل الدم ، PBS ثم Alcian Blue عبر الوريد الوداجي. عند الانتهاء ، افتح الصدر واستأصل القلب عن طريق تشريح النسيج الضام المحيط والأوعية لتحرير القلب.
شطف القلب في PBS ، ثم إزالة الأذينين وتصوير القلب بكاميرا مثبتة على مجهر جراحي باستخدام 10X ذاتي. في التجارب الأولية ، تم تحسين نظام التخدير للجراء البالغة من العمر 10 أيام. أدت جرعة 50 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكيتامين ، وستة ملليغرام لكل كيلوغرام من الزيلازين ، و 0.18 ملليغرام لكل كيلوغرام من الأتروبين إلى عمق كاف من التخدير للسماح بالتنبيب الرغامي للجراء الذين يتنفسون تلقائيا ويزن 5.5 إلى 7.30 جرام.
نظرا لأن الجراء الأخف وزنا لم يتمكنوا من تحمل جرعة أعلى من التخدير ، فإن تقليل الجرعة إلى 30 ملليغرام لكل كيلوغرام من الكيتامين ، وأربعة ملليغرام لكل كيلوغرام من الزيلازين ، و 0.12 ملليغرام لكل كيلوغرام من الأتروبين مكن من تنبيب الجراء الذين يتراوح وزنهم بين 4.50 و 5.49 جرام. وبالمقارنة ، فإن المزيد من التخفيض في جرعة الكيتامين إلى 20 ملليغرام لكل كيلوغرام مكن من تنبيب الجراء الذين يتراوح وزنهم بين 3.15 و 4.49 جرام. يوضح الجدول أيضا عدد ونسبة الجراء التنبيب الذين شرعوا في الجراحة.
كان الجراء ذوو أوزان الجسم المنخفضة أكثر صعوبة في التنبيب من الجراء الأثقل وتطلب المزيد من المحاولات مما أدى إلى نسبة بقاء أقل للجراء من المجموعة الأعلى وزنا. علاوة على ذلك ، انتقل عدد أكبر من الجراء التنبيب من المجموعة الأعلى وزنا إلى جراحة احتشاء عضلة القلب مقارنة بالمجموعة منخفضة ومتوسطة الوزن. كان البقاء على قيد الحياة بعد يومين من جراحة احتشاء عضلة القلب ثابتا بين مجموعات الوزن المختلفة بنسبة 86٪ إلى 92٪ عمق التخدير أمر بالغ الأهمية للتنبيب والبقاء على قيد الحياة.
إذا كان التخدير خفيفا جدا ، فإن التنبيب صعب. إذا كان عميقا جدا ، ستتوقف الجراء عن التنفس تلقائيا إما أثناء التنبيب أو بعده. سيسمح بروتوكول التنبيب التخدير الخاص بنا بإنشاء نماذج تتطلب جراحة قلبية صدرية في الفئران قبل المراهقة ، مما يسمح ، على سبيل المثال ، بإجراء دراسات على الرئتين والمريء والقلب خلال هذه الفترة.
