Notre protocole est la première méthode documentée pour l’anesthésie et l’intubation endotrachéale des chiots souris préadolescents pour la chirurgie cardiothoracique. Nous avons développé des régimes anesthésiques, des équipements spécialisés et des pratiques de manipulation spécifiques qui permettent l’intubation endotrachéale de bébés souris C57 Black Six J âgés de 10 = jours pour la chirurgie cardiothoracique tout en minimisant la mortalité animale. Nous prévoyons qu’un opérateur expérimenté dans les intubations adultes peut atteindre la compétence en intubation pré-adolescente après avoir pratiqué sur 10 portées de sept à huit chiots La démonstration de la procédure sera le Dr Jianxin Wu, un scientifique principal de notre laboratoire.
Le jour de l’expérience, installez un équipement spécialisé pour l’intubation des chiots âgés de 10 jours, comme décrit dans le manuscrit. Pour la chirurgie, utilisez une canule composée d’un tube en plastique de 19 millimètres de long attaché à un adaptateur de verrouillage de leurre femelle en plastique de 21 millimètres. Renforcez le tube de la canule en insérant un morceau de fil de cuivre via l’adaptateur de verrouillage du leurre.
Fixez le chiot anesthésié en décubitus dorsal à une plate-forme d’intubation. Avant l’intubation du chiot anesthésié, vérifiez la profondeur de l’anesthésie par le réflexe de pincement de la patte. Le réflexe de pincement de la patte doit être présent mais nettement réduit par rapport à celui d’un animal conscient.
Tenez la langue du chiot avec une petite pince et utilisez un laryngoscope fabriqué à partir d’un morceau de fil de cuivre et d’une lumière à fibre optique flexible pour exposer la glotte et les cordes vocales. Inclinez la canule raidie de sorte que l’extrémité du verrouillage du leurre soit légèrement plus basse que la pointe et, dès que les cordes vocales se séparent, insérez la canule et avancez-la jusqu’à ce que l’adaptateur de verrouillage du leurre soit juste à l’extérieur de la bouche. Ensuite, retirez immédiatement le fil.
Évaluer la profondeur de l’anesthésie après l’intubation par la capacité de l’animal à respirer spontanément. Transférer le chiot intubé dans un coussin chauffant réglé à 37 degrés Celsius. Confirmer le succès de l’intubation trachéale du chiot qui respire spontanément en bloquant brièvement le cathéter d’intubation pour vérifier que cela empêche les mouvements thoraciques.
Connectez la canule endotrachéale à un ventilateur, délivrant 100% d’oxygène à un débit d’un litre par minute. La procédure devrait prendre moins de 15 secondes pour minimiser la respiration. Après avoir induit un plan chirurgical d’anesthésie pour la chirurgie, confirmer l’intubation trachéale en vérifiant que la fréquence du mouvement de la paroi thoracique est égale à celle du ventilateur.
Placez le chiot sous un microscope chirurgical avec des objectifs 10X et 16X pour la chirurgie de l’infarctus du myocarde. Après avoir désinfecté la peau, faites une incision cutanée horizontale entre la troisième et la quatrième côte dans la paroi latérale gauche de la poitrine à l’aide d’un scalpel. À l’aide de pinces fines, ouvrez le thorax par dissection émoussée de l’espace intercostal et utilisez un rétracteur pour garder l’espace ouvert.
Induire un infarctus du myocarde en ligaturant l’artère coronaire gauche distale à l’appendice auriculaire gauche avec une suture monofilament en polypropylène 9-0. Après les 10 minutes de la chirurgie de l’infarctus, fermez la peau avec une suture 7-0. Nettoyez le sang avec de l’éthanol à 70% ou une solution saline et désinfectez l’incision avec de la bétadine.
Laissez l’animal récupérer et assurez-vous que la respiration spontanée reprend en quelques minutes. Ensuite, remettez le chiot dans la chambre pré-oxygénée chauffée et surveillez en permanence pendant la récupération. Au fur et à mesure que le réflexe de redressement est retrouvé, extuber le chiot.
Frottez doucement le chiot avec la litière de la cage domestique. Gardez le chiot au chaud et vérifiez que la respiration est régulière et qu’il est capable de mouvements spontanés. Remettez le barrage dans la cage.
Ensuite, retournez tous les chiots lorsqu’ils sont complètement rétablis de l’anesthésie. Hébergez le barrage et les chiots pendant la nuit dans une cage placée à moitié sur une aire de réchauffement réglée à 37 degrés Celsius. Le troisième jour après la chirurgie, fixez le chiot anesthésié en décubitus dorsal sur un coussin chauffant en collant la queue.
Placez un fil sur les incisives et collez le chiot dans une position et maintenez la tête tendue dans un cône de nez. Désinfectez la peau avec de l’éthanol à 70%. À l’aide de ciseaux fins, faire une incision d’un centimètre dans la peau sur l’artère carotide commune droite le long de la trachée et canuler le vaisseau exposé à l’aide d’un tube en polyéthylène à lumière unique fixé à une aiguille de calibre 26 pour administrer 0,2 millilitre de solution saline héparinée pendant une minute après avoir provoqué un arrêt cardiaque comme décrit dans le manuscrit, Disséquer la veine jugulaire droite via l’incision précédente et la transecter.
Perfusez le cœur avec 0,2 millilitre de PBS, puis avec 0,1 millilitre de bleu d’Alcian à 0,2% pour colorer le myocarde à distance non infarctus. Vérifiez la perfusion réussie, mise en évidence par le lavage du sang, PBS puis bleu d’Alcian via la veine jugulaire. Lorsque cela est fait, ouvrez le thorax et excisez le cœur en disséquant le tissu conjonctif et les vaisseaux environnants pour libérer le cœur.
Rincez le cœur dans PBS, puis retirez les oreillettes et photographiez le cœur avec une caméra montée sur un microscope chirurgical à l’aide d’un 10X subjectif. Dans les expériences préliminaires, le régime d’anesthésie a été optimisé pour les chiots âgés de 10 jours. Une dose de 50 milligrammes par kg de kétamine, six milligrammes par kg de xylazine et 0,18 milligrammes par kg d’atropine a entraîné une profondeur d’anesthésie suffisante pour permettre l’intubation endotrachéale de petits respirant spontanément pesant de 5,5 à 7,30 grammes.
Comme les petits plus légers ne pouvaient pas tolérer la dose plus élevée d’anesthésie, la diminution de la dose à 30 milligrammes par kg de kétamine, quatre milligrammes par kg de xylazine et 0,12 milligramme par kg d’atropine a permis l’intubation des petits pesant de 4,50 à 5,49 grammes. En comparaison, une réduction supplémentaire de la dose de kétamine à 20 milligrammes par kg a permis l’intubation de chiots pesant de 3,15 à 4,49 grammes. Le tableau indique également le nombre et le pourcentage de chiots intubés qui ont subi une intervention chirurgicale.
Les chiots ayant un poids corporel inférieur étaient plus difficiles à intuber que les chiots plus lourds et nécessitaient plus de tentatives, ce qui entraînait un pourcentage de survie inférieur des chiots que le groupe de poids le plus élevé. De plus, un plus grand nombre de chiots intubés du groupe de poids le plus élevé ont subi la chirurgie de l’infarctus du myocarde que le groupe de poids faible et moyen. La survie deux jours après la chirurgie de l’infarctus du myocarde était constante entre les différents groupes de poids à 86% à 92%La profondeur de l’anesthésie est essentielle pour l’intubation et la survie.
Si l’anesthésie est trop légère, l’intubation est difficile. S’ils sont trop profonds, les chiots cesseront de respirer spontanément pendant ou après l’intubation. Notre protocole d’intubation en anesthésie permettra d’établir des modèles nécessitant une chirurgie thoracique cardiaque chez des souris préadolescentes, permettant par exemple des études sur les poumons, l’œsophage et le cœur pendant cette période.
