우리의 프로토콜은 흉부 수술을 위해 사춘기 이전 마우스 강아지의 마취 및 기관 내 삽관에 대한 최초의 문서화 된 방법입니다. 우리는 동물 사망률을 최소화하면서 흉부 수술을 위해 10=하루 된 C57 Black Six J 마우스 강아지의 기관 내 삽관을 허용하는 마취 요법, 특수 장비 및 특정 취급 관행을 개발했습니다. 우리는 성인 삽관 경험이 있는 작업자가 7-8마리의 새끼 10리터를 연습한 후 사춘기 전 삽관에 능숙해질 수 있을 것으로 예상합니다.
실험 당일, 원고에 설명 된대로 10 일 된 강아지의 삽관을위한 특수 장비를 설치하십시오. 수술의 경우 21mm 플라스틱 암 루어 잠금 어댑터에 부착 된 19mm 길이의 플라스틱 튜브로 구성된 캐뉼러를 사용하십시오. 루어 잠금 어댑터를 통해 구리선 조각을 삽입하여 캐뉼라의 튜브를 강화합니다.
마취 된 강아지 앙와위를 삽관 플랫폼에 고정하십시오. 마취 된 강아지의 삽관 전에 발 핀치 반사에 의한 마취 깊이를 확인하십시오. 발 꼬집음 반사가 있어야하지만 의식이있는 동물의 반사에서 현저하게 줄어 듭니다.
작은 집게로 강아지의 혀를 잡고 구리선으로 만든 후두경과 유연한 광섬유 조명을 사용하여 성문과 성대를 노출시킵니다. 루어 잠금 끝이 팁보다 약간 낮도록 뻣뻣한 캐뉼러를 기울이고 성대가 분리되는 즉시 캐뉼러를 삽입하고 루어 잠금 어댑터가 입 바로 바깥에 올 때까지 전진시킵니다. 그런 다음 즉시 전선을 제거하십시오.
삽관 후 동물이 자발적으로 호흡 할 수있는 능력으로 마취의 깊이를 평가하십시오. 삽관된 강아지를 섭씨 37도로 설정된 보온 패드로 옮깁니다. 삽관 카테터를 잠시 막아 자발적으로 호흡하는 강아지의 성공적인 기관 삽관을 확인하여 가슴 움직임을 방해하는지 확인합니다.
기관 내 캐뉼러를 인공 호흡기에 연결하여 분당 1 리터의 유속으로 100 % 산소를 전달합니다. 재호흡을 최소화하기 위해 절차는 15초 미만이 소요됩니다. 수술을 위해 수술용 마취면을 유도한 후 흉벽 움직임의 빈도가 인공호흡기의 움직임과 같은지 확인하여 기관 삽관을 확인합니다.
심근 경색 수술을위한 10X 및 16X 대물 렌즈가있는 수술 현미경 아래에 강아지를 놓습니다. 피부를 소독 한 후 메스를 사용하여 가슴의 왼쪽 측벽에있는 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이에 수평 피부 절개를하십시오. 미세한 집게의 도움으로 늑간 공간의 무딘 해부로 흉부를 열고 견인기를 사용하여 공간을 열어 두십시오.
9-0 폴리 프로필렌 모노 필라멘트 봉합사로 좌심방 부속기에 대한 왼쪽 관상 동맥 원위를 결찰하여 심근 경색을 유도합니다. 경색 수술 10 분 후 7-0 봉합사로 피부를 닫습니다. 70 % 에탄올 또는 식염수로 혈액을 깨끗이하고 Betadine으로 절개 부위를 소독하십시오.
동물이 회복되도록 하고 몇 분 안에 자발적 호흡이 재개되도록 합니다. 그런 다음 강아지를 예열 된 사전 산소 챔버로 되돌리고 회복하는 동안 지속적으로 모니터링합니다. 오른쪽 반사가 회복되면 강아지를 발관하십시오.
강아지를 홈 케이지 침구로 부드럽게 문지릅니다. 강아지를 따뜻하게 유지하고 호흡이 규칙적이고 강아지가 자발적으로 움직일 수 있는지 확인하십시오. 댐을 케이지로 되돌립니다.
그런 다음 마취에서 완전히 회복되면 모든 새끼를 돌려 보내십시오. 섭씨 37도로 설정된 온난화 패드에 반쯤 놓인 새장에 댐과 새끼를 밤새 수용합니다. 수술 후 3 일째에 꼬리를 테이핑하여 온난화 패드에서 마취 된 강아지를 앙와위 자세로 고정하십시오.
앞니 위에 실을 놓고 강아지를 제자리에 테이프로 붙이고 머리를 코 원뿔로 확장하십시오. 70 % 에탄올로 피부를 소독하십시오. 가는 가위를 사용하여 기관을 따라 오른쪽 총 경동맥의 피부를 1cm 절개하고 26 게이지 바늘에 부착 된 단일 루멘 폴리에틸렌 튜브를 사용하여 노출 된 혈관을 캐뉼레이션하여 원고에 설명 된대로 심장 마비를 일으킨 후 1 분 동안 헤파린 화 식염수 0.2ml를 투여하고, 이전 절개를 통해 오른쪽 경정맥을 해부하고 횡단합니다.
0.2 밀리리터의 PBS로 심장을 관류 한 다음 0.1 밀리리터의 0.2 % Alcian Blue로 경색되지 않은 원격 심근을 염색하십시오. 경정맥을 통해 혈액, PBS 및 Alcian Blue의 세척으로 입증되는 성공적인 관류를 확인하십시오. 완료되면 흉부를 열고 주변 결합 조직과 혈관을 해부하여 심장을 절제하여 심장을 풀어줍니다.
PBS로 심장을 헹구고 심방을 제거하고 10X 주관을 사용하여 수술 현미경에 장착 된 카메라로 심장을 촬영합니다. 예비 실험에서 마취 요법은 10 일 된 새끼에게 최적화되었습니다. kg 케타민 당 50 밀리그램, kg Xylazine 당 6 밀리그램, 아트로핀 kg 당 0.18 밀리그램의 용량은 5.5-7.30 그램의 자발적으로 호흡하는 강아지의 기관 내 삽관을 허용하기에 충분한 마취 깊이를 초래했습니다.
가벼운 새끼는 더 많은 마취를 견딜 수 없었기 때문에 복용량을 케타민 kg 당 30 밀리그램, kg 자일 라진 당 4 밀리그램, 아트로핀 kg 당 0.12 밀리그램으로 줄이면 체중이 4.50-5.49 그램 인 강아지의 삽관이 가능했습니다. 이에 비해 케타민 복용량을 kg 당 20 밀리그램으로 더 줄이면 체중이 3.15-4.49g 인 강아지의 삽관이 가능해졌습니다. 이 표는 또한 수술을 진행한 삽관 된 새끼의 수와 비율을 보여줍니다.
체중이 낮은 새끼는 무거운 새끼보다 삽관하기가 더 어려웠고 더 많은 시도가 필요했기 때문에 가장 높은 체중 그룹보다 새끼의 생존율이 낮았습니다. 또한, 가장 높은 체중 그룹의 삽관 된 강아지 중 저체중 및 중간 체중 그룹보다 심근 경색 수술을 진행한 경우가 더 많았습니다. 심근 경색 수술 후 2 일 생존은 86 %에서 92 %로 다른 체중 그룹간에 일관되었습니다.마취 깊이는 삽관과 생존에 중요합니다.
마취가 너무 가벼우면 삽관이 어렵습니다. 너무 깊으면 새끼는 삽관 중 또는 삽관 후에 자발적으로 호흡을 멈 춥니 다. 우리의 마취 삽관 프로토콜은 사춘기 이전 마우스에서 심장 흉부 수술이 필요한 모델을 확립 할 수있게하여 예를 들어이 기간 동안 폐, 식도 및 심장에 대한 연구를 허용합니다.
