يمكن أن تساعد هذه الطريقة في إنتاج نموذج مثالي يحاكي عن كثب التقدم الطبيعي لورم خبيث في العظام لخلايا سرطان البروستاتا في الجسم الحي. تتمتع هذه التقنية بميزة ورم خبيث في العظام وتمثل عملية ورم خبيث عظمي طبيعي لخلايا سرطان البروستاتا في الجسم الحي. تفيد هذه التقنية في استكشاف الآليات الجزيئية والتحقيق في الآثار العلاجية في الجسم الحي لورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا.
في يوم الحقن ، خذ 80 إلى 90٪ من خلايا PC3 المتقاربة التي تحمل علامة لوسيفيراز المزروعة في طبق زراعة الخلايا 10 سم وابدأ في تحضير الخلايا للحقن عن طريق غسلها مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني معقم بارد. التربسين الخلايا المغسولة مع 1.5 ملليلتر من 0.25 ٪ التربسين لمدة ثلاث دقائق ، وبعد ذلك إخماد التربسين عن طريق إضافة ستة ملليلتر من F12 المتوسطة التي تحتوي على 10 ٪ مصل وجمع الخلايا في أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر. انقل 20 ميكرولترا من تعليق الخلية المجمعة إلى لوحة عد الخلايا واحسب تركيز الخلية باستخدام عداد خلية أوتوماتيكي.
بعد ذلك ، قم بطرد الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق عند 800 G.تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة وأعد تعليق حبيبات الخلية في وسط F12 لتحقيق كثافة الخلية النهائية المطلوبة. الآن احمل الخلايا إلى غرفة الجراحة وقم بإجراء حقن الخلايا في غضون ساعتين. الحفاظ على الخلايا على الجليد حتى الحقن.
لبدء الجراحة ، ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف وشل حركة كلا الطرفين العلويين عن طريق تمديدهما بشكل عمودي بعيدا عن خط الوسط. باستخدام شريط لاصق جراحي ، شل حركة الماوس من البطن إلى أسفل دون الضغط بشدة وتشريد الأعضاء الداخلية. تطهير جلد الصدر باستخدام مسحة الإيثانول 70 ٪.
بعد ذلك ، قم بجس منتصف جدار الصدر الأمامي لتحديد موقع عملية خنجري الفأر في الاكتئاب عند الطرف الأدنى من منتصف القص. تسمية النقطة الأكثر أدنى من عملية الخنجري. ثم عن طريق الجس من منتصف جدار الصدر الأمامي ، حدد موقع الشق الوداجي للفأر في المنخفض المركزي عند الحد العلوي للمانوبريوم وحدد النقطة الأكثر انخفاضا في الشق الوداجي.
الآن حدد موقع نقطة المنتصف بين العلامتين السابقتين وقم بتمييزها ، باتجاه اليمين قليلا وفوق القلب مباشرة في الفضاء الوربي الثالث. هذه هي نقطة الحقن. امزج تعليق الخلية جيدا قبل تحميل 200 ميكرولتر من التعليق في حقنة سعة ملليلتر واحدة مثبتة بإبرة قياس 26.
اترك بعض الهواء في المحقنة بين المكبس والمعلق للسماح بدخول الدم النابض أثناء الحقن. لإجراء الحقن ، أدخل الإبرة عموديا من خلال موقع الحقن. إذا تم إدخال طرف الإبرة بشكل صحيح في البطين الأيسر ، فسيكون الدم النابض الأحمر الفاتح مرئيا في محور الإبرة.
أعد محاولة الحقن إذا كان نبض الدم غير مرئي أو كان الدم يتجلط. بمجرد إدخال الإبرة بشكل صحيح ، قم بحقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية ببطء شديد على مدار 40 إلى 60 ثانية بيد ثابتة. بعد الانتهاء من الحقن ، اسحب الإبرة أثناء الضغط على موقع الحقن بقطعة قطن جافة لمدة 15 ثانية لضمان الإرقاء.
أعد الماوس إلى القفص النظيف وراقب الحيوان حتى يتعافى تماما من التخدير. أظهر تصوير التلألؤ البيولوجي الذي تم إجراؤه بعد 24 ساعة من حقن خلايا PC3 التي تحمل علامة لوسيفيراز في الفأر إشارات من جسم الحيوان بأكمله تشير إلى وجود خلايا سرطانية في الدورة الدموية الجهازية. ظهرت الآفات النقيلية في الأطراف الخلفية للفأر بعد أسبوعين من الحقن.
أصبحت الآفات النقيلية أكبر مع تقدم الوقت وبدأت في الظهور في مواقع أخرى. تم الكشف عن الآفات النقيلية التي تسببها خلايا سرطان البروستاتا في العظام باستخدام التصوير بالأشعة السينية الذي أظهر تدمير العظام في الساق القريبة للحيوان. تم تأكيد الشيء نفسه أيضا من خلال التصوير المقطعي المحوسب الدقيق.
تم تأكيد الآفات النقيلية بشكل أكبر في الأنسجة المدمجة في البارافين عن طريق تلطيخ الهيماتين والإيوزين. موقع الحقن الدقيق مهم جدا لضمان معدل نجاح هذا النموذج. يمكن تحقيق ذلك بالممارسة.
