이 방법은 생체 내에서 전립선암 세포의 자연적인 골 전이 진행을 밀접하게 모방하는 이상적인 모델을 생성하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술은 생체 내에서 전립선암 세포의 자연적인 골 전이 과정을 나타내는 골 전이의 장점이 있다. 이 기술은 분자 메커니즘의 탐색과 전립선암 뼈 전이에 대한 생체 내 치료 효과의 조사에 도움이 됩니다.
주사 당일, 10cm 세포 배양 접시에서 배양된 80 내지 90%confluent luciferase-labeled PC3 세포를 취하여 차가운 멸균 PBS로 2회 세척하여 주사 준비를 시작한다. 세척된 세포를 1.5밀리리터의 0.25% 트립신으로 3분 동안 트립신화한 다음, 10% 혈청을 함유하는 F12 배지 6밀리리터를 첨가하여 트립신을 소멸시키고 세포를 15밀리리터 원심분리기 튜브에 수집합니다. 수집 된 세포 현탁액 20 마이크로 리터를 세포 계수 플레이트에 옮기고 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 농도를 계산합니다.
다음으로, 실온에서 800G에서 5분 동안 세포를 원심분리하고, 피펫을 사용하여 상층액을 버리고 F12 배지에 세포 펠릿을 재현탁하여 원하는 최종 세포 밀도를 얻습니다. 이제 세포를 수술실로 옮기고 2 시간 이내에 세포 주사를 수행하십시오. 주사 할 때까지 세포를 얼음 위에 보관하십시오.
수술을 시작하려면 마취된 마우스를 앙와위 자세로 놓고 양쪽 상지를 정중선에서 수직으로 늘려 고정시킵니다. 수술 용 접착 테이프를 사용하여 마우스를 복부에서 아래로 고정시키고 내부 장기를 세게 누르지 않고 고정시킵니다. 70 % 에탄올 면봉을 사용하여 흉부의 피부를 소독하십시오.
다음으로, 전방 흉벽의 중앙을 촉진하여 흉골 중간의 가장 낮은 끝의 함몰부에서 마우스 검상돌기를 찾습니다. xiphoid 과정의 가장 열등한 지점에 표시하십시오. 그런 다음 전방 흉벽의 중앙에서 위로 촉진하여 manubrium의 위쪽 경계에 있는 중앙 함몰부에 마우스 경정맥 노치를 찾아 경정맥 노치의 가장 아래쪽 지점을 표시합니다.
이제 세 번째 늑간 공간에서 약간 오른쪽과 심장 바로 위에 있는 이전 두 표시 사이의 중간 지점을 찾아 표시합니다. 이것이 주입 지점입니다. 200 마이크로 리터의 현탁액을 26 게이지 바늘이 장착 된 1 밀리리터 주사기에 넣기 전에 세포 현탁액을 완전히 혼합하십시오.
주입 중에 맥동하는 혈액이 들어갈 수 있도록 플런저와 서스펜션 사이의 주사기에 약간의 공기를 남겨 두십시오. 주사를 수행하려면 주사 부위를 통해 바늘을 수직으로 삽입하십시오. 바늘 끝이 좌심실에 올바르게 삽입되면 바늘 허브에 밝은 빨간색의 맥동 혈액이 보입니다.
혈액 맥동이 보이지 않거나 혈액이 응고되는 경우 주사를 다시 시도하십시오. 바늘이 제대로 삽입되면 100 마이크로 리터의 세포 현탁액을 40-60 초에 걸쳐 매우 천천히 안정된 손으로 주입합니다. 주사 완료 후 마른 면봉으로 주사 부위에 압력을 가하면서 바늘을 15초 동안 집어넣어 지혈을 합니다.
마우스를 깨끗한 케이지로 돌려 보내고 마취에서 완전히 회복 될 때까지 동물을 모니터링하십시오. 루시페라아제 표지된 PC3 세포를 마우스에 주사한 후 24시간 후에 수행된 생체발광 이미징은 전신 순환계에 암세포의 존재를 나타내는 동물의 전신으로부터의 신호를 보여주었다. 전이성 병변은 주사 2 주 후 마우스의 뒷다리에 나타났다.
전이성 병변은 시간이 지남에 따라 더 커졌고 다른 부위에 나타나기 시작했습니다. 전립선암 세포에 의해 유발된 뼈의 전이성 병변은 동물의 근위 경골에서 뼈 파괴를 보여주는 X선 영상을 사용하여 추가로 검출되었습니다. 마이크로 CT 스캐닝으로도 동일하게 확인되었습니다.
전이성 병변은 헤마틴 및 에오신 염색에 의해 파라핀 포매 조직에서 추가로 확인되었습니다. 정확한 주사 부위는 이 모델의 성공률을 보장하는 데 매우 중요합니다. 이것은 연습을 통해 달성 할 수 있습니다.
