הזרקה תוך לבבית של תאי סרטן ערמונית אנושיים ליצירת גרורות עצם מודל עכבר Xenograft

שיטה זו יכולה לסייע ביצירת מודל אידיאלי המחקה באופן הדוק את ההתקדמות הטבעית של גרורות עצם של תאי סרטן הערמונית in vivo. לטכניקה זו יש את היתרון של גרורות עצם ומייצגת את תהליך גרורות העצם הטבעיות של תאי סרטן הערמונית in vivo. טכניקה זו מועילה לחקר המנגנונים המולקולריים וחקירת ההשפעות הטיפוליות in vivo עבור גרורות עצם סרטן הערמונית.

ביום ההזרקה, יש ליטול 80% עד 90% תאי PC3 עם תווית לוציפראז בתרבית בתרבית תאים בקוטר 10 ס"מ ולהתחיל להכין את התאים להזרקה על ידי שטיפתם פעמיים עם PBS סטרילי קר. טריפסין את התאים שטופים עם 1.5 מיליליטר של 0.25% טריפסין במשך שלוש דקות, ולאחר מכן להרוות את טריפסין על ידי הוספת שישה מיליליטר של מדיום F12 המכיל 10% סרום ולאסוף את התאים לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר. העבירו 20 מיקרוליטר מתרחיף התא שנאסף לצלחת ספירת תאים וחשבו את ריכוז התא באמצעות מונה תאים אוטומטי.

לאחר מכן, צנטריפוגו את התאים בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות בטמפרטורה של 800 גרם.השליכו את הסופרנאטנט באמצעות פיפטה והשהו מחדש את כדורית התא בתווך F12 כדי להשיג את צפיפות התאים הסופית הרצויה. כעת יש להעביר את התאים לחדר הניתוח ולבצע את הזרקת התאים תוך שעתיים. שמור את התאים על קרח עד ההזרקה.

כדי להתחיל את הניתוח, הניחו את העכבר המרדים במצב שכיבה ושתקו את שתי הגפיים העליונות על ידי מתיחה אנכית שלהן מקו האמצע. באמצעות סרט הדבקה כירורגי, לשתק את העכבר מהבטן למטה מבלי ללחוץ חזק ולהזיז את האיברים הפנימיים. יש לחטא את עור בית החזה באמצעות מקלון אתנול 70%.

לאחר מכן, מישוש באמצע דופן החזה הקדמית כדי לאתר את תהליך הקסיפואיד של העכבר בשקע בקצה התחתון של עצם החזה האמצעית. תייגו את הנקודה הנחותה ביותר בתהליך הקסיפואיד. לאחר מכן על ידי מישוש מאמצע דופן החזה הקדמית, אתר את החריץ הג'וגולרי של העכבר בשקע המרכזי בגבול העליון של המנובריום וסמן את הנקודה הנחותה ביותר של החריץ הג'וגולרי.

כעת אתרו וסמנו את נקודת האמצע בין שני הסימנים הקודמים, מעט ימינה וקצת מעל הלב בחלל הבין-קוסטלי השלישי. זוהי נקודת ההזרקה. ערבבו היטב את מתלה התא לפני העמסת 200 מיקרוליטר של התרחיף לתוך מזרק של מיליליטר אחד המורכב עם מחט 26 מד.

השאירו מעט אוויר במזרק שבין הבוכנה למתלה כדי לאפשר כניסת דם פועם במהלך ההזרקה. כדי לבצע את ההזרקה, הכנס אנכית את המחט דרך אתר ההזרקה. אם קצה המחט מוכנס כראוי לחדר השמאלי, דם פועם אדום בוהק יהיה גלוי במרכז המחט.

נסה שוב להזריק אם פעימת הדם אינה נראית לעין או קרישת הדם. לאחר החדרת המחט כראוי, הזריקו 100 מיקרוליטר של תרחיף התא לאט מאוד במשך 40 עד 60 שניות ביד יציבה. לאחר השלמת ההזרקה, משוך את המחט תוך הפעלת לחץ על אתר ההזרקה עם צמר גפן יבש למשך 15 שניות כדי להבטיח המוסטאזיס.

החזירו את העכבר לכלוב הנקי ועקבו אחר בעל החיים עד שיתאושש לחלוטין מההרדמה. הדמיית ביולומינסנציה שבוצעה 24 שעות לאחר הזרקת תאי PC3 המסומנים בלוציפראז לעכבר הראתה אותות מכל גוף החיה המעידים על נוכחות תאים סרטניים במחזור הדם. נגעים גרורתיים הופיעו בגפיים האחוריות של העכבר שבועיים לאחר ההזרקה.

הנגעים הגרורתיים הלכו וגדלו ככל שהתקדם הזמן והחלו להופיע באתרים אחרים. הנגעים גרורתיים הנגרמים על ידי תאי סרטן הערמונית בעצמות זוהו עוד יותר באמצעות הדמיית רנטגן שהראתה הרס עצם בשוקה הפרוקסימלית של החיה. כך גם אושר על ידי סריקת מיקרו CT.

הנגעים הגרורתיים אושרו עוד יותר ברקמות משובצות פרפין על ידי הכתמת המטין ואוזין. אתר הזרקה מדויק חשוב מאוד כדי להבטיח את שיעור ההצלחה של מודל זה. ניתן להשיג זאת על ידי תרגול.