Este método pode ajudar a produzir um modelo ideal que imita de perto o progresso natural da metástase óssea de células de câncer de próstata in vivo. Esta técnica tem a vantagem de uma metástase óssea e representa o processo natural de metástase óssea de células do câncer de próstata in vivo. Esta técnica beneficia a exploração dos mecanismos moleculares e a investigação dos efeitos terapêuticos in vivo da metástase óssea do câncer de próstata.
No dia da injeção, tome 80 a 90% de células PC3 marcadas com luciferase confluentes cultivadas em uma placa de cultura de células de 10 centímetros e comece a preparar as células para injeção lavando-as duas vezes com PBS estéril frio. Tripsinizar as células lavadas com 1,5 mililitros de tripsina a 0,25% por três minutos, após o que extinguir a tripsina adicionando seis mililitros de meio F12 contendo 10% de soro e coletar as células em um tubo de centrífuga de 15 mililitros. Transfira 20 microlitros da suspensão celular coletada para uma placa de contagem de células e calcule a concentração celular usando um contador automático de células.
Em seguida, centrifugar as células à temperatura ambiente por cinco minutos a 800 G. Descarte o sobrenadante usando uma pipeta e ressuspenda o pellet de células em meio F12 para atingir a densidade celular final desejada. Agora carregue as células para a sala de cirurgia e realize a injeção de células dentro de duas horas. Mantenha as células no gelo até a injeção.
Para iniciar a cirurgia, colocar o camundongo anestesiado em decúbito dorsal e imobilizar ambos os membros superiores, alongando-os perpendicularmente para longe da linha média. Usando fita adesiva cirúrgica, imobilize o camundongo do abdômen para baixo sem pressionar com força e deslocar os órgãos internos. Desinfete a pele do tórax usando um swab de etanol 70%.
Em seguida, palpar o meio da parede torácica anterior para localizar o processo xifoide de camundongo na depressão na extremidade inferior do esterno médio. Rotular o ponto mais inferior do processo xifoide. Em seguida, palpando a partir do meio da parede torácica anterior, localize a incisura jugular do camundongo na depressão central na borda superior do manúbrio e marque o ponto mais inferior da incisura jugular.
Agora localize e marque o ponto médio entre as duas marcas anteriores, ligeiramente para a direita e um pouco acima do coração no terceiro espaço intercostal. Este é o ponto de injeção. Misture bem a suspensão celular antes de carregar 200 microlitros da suspensão em uma seringa de um mililitro montada com uma agulha de calibre 26.
Deixe um pouco de ar na seringa entre o êmbolo e a suspensão para permitir a entrada de sangue pulsante durante a injeção. Para realizar a injeção, insira verticalmente a agulha através do local de injeção. Se a ponta da agulha for inserida corretamente no ventrículo esquerdo, o sangue pulsante vermelho vivo será visível no cubo da agulha.
Tente injetar novamente se a pulsação do sangue não for visível ou se o sangue estiver coagulando. Uma vez que a agulha é inserida corretamente, injete 100 microlitros da suspensão celular muito lentamente ao longo de 40 a 60 segundos com uma mão estável. Após a conclusão da injeção, retraia a agulha enquanto aplica pressão no local da injeção com um cotonete seco por 15 segundos para garantir a hemostasia.
Devolva o rato à gaiola limpa e monitorize o animal até que recupere completamente da anestesia. Imagens de bioluminescência realizadas 24 horas após a injeção de células PC3 marcadas com luciferase no camundongo mostraram sinais de todo o corpo do animal indicando a presença de células cancerígenas na circulação sistêmica. Lesões metastáticas apareceram nos membros posteriores do camundongo duas semanas após a injeção.
As lesões metastáticas tornaram-se maiores com o passar do tempo e começaram a aparecer em outros locais. As lesões metastáticas induzidas por células de câncer de próstata nos ossos foram detectadas por meio de radiografias que mostraram destruição óssea na tíbia proximal do animal. O mesmo também foi confirmado por microtomografia.
As lesões metastáticas foram confirmadas em tecidos embebidos em parafina pela coloração de hematina e eosina. O local de injeção preciso é muito importante para garantir a taxa de sucesso deste modelo. Isso pode ser alcançado pela prática.
