Este método puede ayudar a producir un modelo ideal que imita de cerca el progreso natural de la metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica tiene la ventaja de una metástasis ósea y representa el proceso natural de metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica beneficia la exploración de los mecanismos moleculares y la investigación de los efectos terapéuticos in vivo para la metástasis ósea del cáncer de próstata.
El día de la inyección, tome células PC3 marcadas con luciferasa confluente del 80 al 90% cultivadas en una placa de cultivo celular de 10 centímetros y comience a preparar las células para la inyección lavándolas dos veces con PBS estéril en frío. Tripsinizar las células lavadas con 1,5 mililitros de tripsina al 0,25% durante tres minutos, después de lo cual apagar la tripsina añadiendo seis mililitros de medio F12 que contiene 10% de suero y recoger las células en un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Transfiera 20 microlitros de la suspensión celular recolectada a una placa de conteo celular y calcule la concentración celular utilizando un contador automático de células.
A continuación, centrifugar las células a temperatura ambiente durante cinco minutos a 800 G.Deseche el sobrenadante con una pipeta y vuelva a suspender el pellet de la celda en medio F12 para lograr la densidad celular final deseada. Ahora lleve las células a la sala de cirugía y realice la inyección de células dentro de dos horas. Mantenga las células en hielo hasta la inyección.
Para comenzar la cirugía, coloque al ratón anestesiado en posición supina e inmovilice ambas extremidades superiores estirándolas perpendicularmente lejos de la línea media. Usando cinta adhesiva quirúrgica, inmovilice al ratón desde el abdomen hacia abajo sin presionar con fuerza y desplazando los órganos internos. Desinfecte la piel del tórax con un hisopo de etanol al 70%.
A continuación, palpe por el centro de la pared torácica anterior para localizar el proceso xifoide del ratón en la depresión en el extremo más bajo del esternón medio. Etiquete el punto más inferior del proceso xifoide. Luego, palpando hacia arriba desde el centro de la pared torácica anterior, ubique la muesca yugular del ratón en la depresión central en el borde superior del manubrio y marque el punto más inferior de la muesca yugular.
Ahora localice y marque el punto medio entre las dos marcas anteriores, ligeramente hacia la derecha y justo sobre el corazón en el tercer espacio intercostal. Este es el punto de inyección. Mezcle bien la suspensión celular antes de cargar 200 microlitros de la suspensión en una jeringa de un mililitro montada con una aguja de calibre 26.
Deje un poco de aire en la jeringa entre el émbolo y la suspensión para permitir la entrada de sangre pulsante durante la inyección. Para realizar la inyección, inserte verticalmente la aguja a través del sitio de inyección. Si la punta de la aguja se inserta correctamente en el ventrículo izquierdo, la sangre pulsante de color rojo brillante será visible en el cubo de la aguja.
Vuelva a intentar inyectarse si la pulsación sanguínea no es visible o si la sangre se coagula. Una vez que la aguja se inserta correctamente, inyecte 100 microlitros de la suspensión celular muy lentamente durante 40 a 60 segundos con una mano estable. Después de completar la inyección, retraiga la aguja mientras aplica presión en el lugar de la inyección con un hisopo de algodón seco durante 15 segundos para asegurar la hemostasia.
Devuelva el ratón a la jaula limpia y controle al animal hasta que se recupere completamente de la anestesia. Las imágenes de bioluminiscencia realizadas 24 horas después de inyectar células PC3 marcadas con luciferasa en el ratón mostraron señales de todo el cuerpo del animal que indican la presencia de células cancerosas en la circulación sistémica. Las lesiones metastásicas aparecieron en las extremidades posteriores del ratón dos semanas después de la inyección.
Las lesiones metastásicas se hicieron más grandes a medida que avanzaba el tiempo y comenzaron a aparecer en otros sitios. Las lesiones metastásicas inducidas por células de cáncer de próstata en los huesos se detectaron aún más utilizando imágenes de rayos X que mostraron destrucción ósea en la tibia proximal del animal. Lo mismo también fue confirmado por micro tomografía computarizada.
Las lesiones metastásicas se confirmaron aún más en los tejidos embebidos en parafina mediante tinción con hematina y eosina. El sitio de inyección preciso es muy importante para garantizar la tasa de éxito de este modelo. Esto se puede lograr mediante la práctica.
