Questo metodo può aiutare a produrre un modello ideale che imita da vicino il naturale progresso delle metastasi ossee delle cellule tumorali della prostata in vivo. Questa tecnica ha il vantaggio di una metastasi ossea e rappresenta il processo naturale di metastasi ossea delle cellule tumorali della prostata in vivo. Questa tecnica favorisce l'esplorazione dei meccanismi molecolari e lo studio degli effetti terapeutici in vivo per le metastasi ossee del cancro alla prostata.
Il giorno dell'iniezione, prendere dall'80 al 90% di cellule PC3 confluenti marcate con luciferasi coltivate in un piatto di coltura cellulare di 10 centimetri e iniziare a preparare le cellule per l'iniezione lavandole due volte con PBS sterile a freddo. Tripsinizzare le cellule lavate con 1,5 millilitri di tripsina allo 0,25% per tre minuti, dopodiché spegnere la tripsina aggiungendo sei millilitri di mezzo F12 contenente il 10% di siero e raccogliere le cellule in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Trasferire 20 microlitri della sospensione cellulare raccolta in una piastra di conteggio delle celle e calcolare la concentrazione cellulare utilizzando un contatore automatico delle celle.
Quindi, centrifugare le celle a temperatura ambiente per cinque minuti a 800 G.Scartare il surnatante usando una pipetta e risospendere il pellet di cella in mezzo F12 per ottenere la densità finale desiderata. Ora porta le cellule nella sala operatoria ed esegui l'iniezione cellulare entro due ore. Tenere le cellule sul ghiaccio fino all'iniezione.
Per iniziare l'intervento chirurgico, posizionare il topo anestetizzato in posizione supina e immobilizzare entrambi gli arti superiori allungandoli perpendicolarmente lontano dalla linea mediana. Utilizzando del nastro adesivo chirurgico, immobilizzare il mouse dall'addome in giù senza premere forte e spostare gli organi interni. Disinfettare la pelle del torace utilizzando un tampone etanolo al 70%.
Quindi, palpare lungo il centro della parete toracica anteriore per individuare il processo xifoideo del topo nella depressione all'estremità inferiore dello sterno medio. Etichettare il punto più inferiore del processo xifoideo. Quindi, palpando dal centro della parete toracica anteriore, individuare la tacca giugulare del topo nella depressione centrale sul bordo superiore del manubrio e segnare il punto più inferiore della tacca giugulare.
Ora individua e segna il punto medio tra i due segni precedenti, leggermente verso destra e appena sopra il cuore nel terzo spazio intercostale. Questo è il punto di iniezione. Mescolare accuratamente la sospensione cellulare prima di caricare 200 microlitri della sospensione in una siringa da un millilitro montata con un ago da 26 gauge.
Lasciare un po' d'aria nella siringa tra lo stantuffo e la sospensione per consentire l'ingresso di sangue pulsante durante l'iniezione. Per eseguire l'iniezione, inserire verticalmente l'ago attraverso il sito di iniezione. Se la punta dell'ago è inserita correttamente nel ventricolo sinistro, il sangue pulsante rosso vivo sarà visibile nel mozzo dell'ago.
Riprovare a iniettare se la pulsazione del sangue non è visibile o il sangue è coagulante. Una volta inserito correttamente l'ago, iniettare 100 microlitri di sospensione cellulare molto lentamente nell'arco di 40-60 secondi con una mano stabile. Dopo il completamento dell'iniezione, ritrarre l'ago applicando pressione sul sito di iniezione con un batuffolo di cotone asciutto per 15 secondi per garantire l'emostasi.
Riportare il mouse nella gabbia pulita e monitorare l'animale fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia. L'imaging a bioluminescenza eseguito 24 ore dopo l'iniezione di cellule PC3 marcate con luciferasi nel topo ha mostrato segnali provenienti da tutto il corpo dell'animale che indicano la presenza di cellule tumorali nella circolazione sistemica. Le lesioni metastatiche sono apparse negli arti posteriori del topo due settimane dopo l'iniezione.
Le lesioni metastatiche sono diventate più grandi con il passare del tempo e hanno iniziato a comparire in altri siti. Le lesioni metastatiche indotte dalle cellule del cancro alla prostata nelle ossa sono state ulteriormente rilevate utilizzando l'imaging a raggi X che ha mostrato la distruzione ossea nella tibia prossimale dell'animale. Lo stesso è stato confermato anche dalla scansione micro CT.
Le lesioni metastatiche sono state ulteriormente confermate nei tessuti incorporati in paraffina dalla colorazione con ematina ed eosina. Un sito di iniezione accurato è molto importante per garantire il tasso di successo di questo modello. Questo può essere ottenuto con la pratica.
