تم دعم هذه الدراسة من قبل مشروع الابتكار العلمي والتكنولوجي الرئيسي (2020CXGC010802).

ملاحظة: انتبه إلى قياسات السلامة قبل محاصرة الحشرات المهاجرة من النوع البري ، يقترح ارتداء معدات السلامة (القفازات والقمصان ذات الأكمام الطويلة والنظارات الواقية). أيضا ، قم بإيقاف تشغيل المصيدة عندما لا تكون قيد الاستخدام لتجنب مخاطر السلامة الأخرى وارتفاع درجة حرارة الضوء. من المهم اتباع بروتوكولات السلامة قبل التشريح ، مثل ارتداء القفازات والنظارات الواقية ومعطف المختبر لمنع التعرض لسوائل الجسم والمواد الكيميائية.
1. محاصرة الحشرات المهاجرة
<ol><li>ابدأ هذا البروتوكول عن طريق محاصرة الحشرات باستخدام مصباح الكشاف. في هذا البروتوكول ، مصدر حشرات الاختبار هو منطقة جييانغ ، مدينة جينان ، مقاطعة شاندونغ ، الصين (36.977088 درجة شمالا ، 116.982747 درجة شرقا).</li>
	<li>استخدم الجسم الرئيسي لمصباح الكشاف ، المصنوع من الفولاذ غير الصدأ ، والصندوق ، وهو جسم مستطيل ، ومصباح الهالوجين الأمامي من نوع GT75 ، بقوة 1000 واط. ضع المصباح الأمامي في المنتصف كمصدر للضوء.</li>
	<li>ضع قناة لجمع الحشرات على شكل قمع داخل وأسفل الضوء ، ضع صندوقا لجمع الحشرات بقطر 5 سم ، متبوعا بكيس شبكي لجمع الحشرات مكون من 60 طلبا (0.5 م × 0.5 م) ، والذي يستخدم لجمع الحشرات المحاصرة بالضوء. يبلغ الإسقاط المعروف للضوء حوالي 500 متر فوق سطح الأرض.</li>
	<li>ويركز هذا البروتوكول على ديناميات هجرة الإناث من النوع البري وتطور المبيض؛ لذلك ، جمع أنواع مختلفة من الحشرات (هنا تم جمع من أبريل إلى أغسطس ، خلال 2021 إلى 2022). تجنب جمع الحشرات الصغيرة الحجم والمصابة ، حدد الآفات الكبيرة ذات الحجم المماثل لهذه التجربة.</li>
</ol>2. تحضير الحشرات
<ol><li>نقل جميع الحشرات التي تم جمعها من كيس شبكي (0.5 م) إلى القفص الصافي (30 سم × 30 سم) ، ثم توفير طبق بتري يحتوي على محلول معقم من 10 ٪ من ماء العسل (التغذية اختيارية). ضع القفص في درجة حرارة 27 ± 2 درجة مئوية ، 65٪ ± رطوبة نسبية 12٪ ، واحتفظ به في الظلام لمدة 8-12 ساعة.</li>
	<li>حدد الإناث من النوع البري التي طارت داخل القفص في نفس اليوم ، وقم بنقلها بعناية إلى أنابيب القارورة الفردية ، وأغلق كل أنبوب بغطاء قطني. تجنب المناولة المباشرة التي قد تلحق الضرر أو تجرح الآفة بسبب الضغط المفرط. ملاحظة: تم القبض على جميع الإناث من النوع البري في الليل وتم إجراء التشريح في النهار. وهكذا ، تم إجراء كل تجربة في غضون يوم واحد.</li>
</ol>3. التحضير لطريقة شلل الحشرات (الشكل 1)
<ol><li>ضع الآفة الأنثوية المختارة بشكل فردي في أنبوب قارورة ذبابة في المنتصف وقم بتخدير الأنثى باستخدام غاز CO2 عن طريق الإمساك بإبرة مسدس النفخ لإحداث شلل خفيف. لتأكيد ما إذا كانت الآفة مشلولة أم لا ، قم بدفع الآفة أو لمسها برفق باستخدام فرشاة ناعمة. لا توجد استجابة للمنبهات اللينة وعدم الحركة تشير إلى شلل ناجح. ملاحظة: يمكن أيضا استخدام درجة الحرارة المنخفضة (-20 درجة مئوية) كتقنية بديلة لشل الحشرات.</li>
</ol>4. تشريح الحشرات
<ol><li>ضع الأنثى المشلولة حديثا في طبق بتري التشريحي الذي يحتوي على الإيثانول المطلق (10 مل). لتجنب تأثير الشعر القشري ومسحوق الأجنحة أثناء التشريح ، تسلل إلى الحشرة الحية أو المشلولة بالكحول المطلق وشطفه بالماء النظيف.</li>
	<li>افصل الأجنحة الظهرية عن تقاطع جسم الصدر والبطن ، باستخدام زوجين من الملقط.</li>
	<li>انقل البطن إلى طبق بتري جديد يمكن التخلص منه ، يحتوي على كمية مناسبة من الماء (بعمق 2-5 مم) ، وقشر الهيكل الخارجي البطني برفق على طول الخط البطني الظهري من الفم المدبب إلى الذيل ، باستخدام ملقط تشريح. كرر نفس الخطوات على الجانب الآخر ، ثم ضعها في ماء نظيف لتفريق الأنسجة السليمة.</li>
	<li>تقشر بعناية الأنسجة الدهنية للبشرة باستخدام ملقط ، واسحب المبايض برفق وحررها.</li>
	<li>استخدم ملقط تشريح لإزالة جزيئات الدهون والأعضاء الأخرى حول المبايض برفق. بشكل عام ، يتم طي مبيض الآفات في الغالب إلى الداخل على جانبي البطن ، وحاول العمل في بيئة سائلة أثناء فتح المبايض ، وقشر كيس التزاوج ببطء من المنتصف ، والتقاط جزيئات الدهون المرتبطة بأنابيب المبيض.</li>
	<li>تمسك برفق بكيس المبيض والتزاوج من الطرف الخلفي العمودي وافتحه بعناية لأسفل. لتجنب التلف أثناء التكشف ، انقل المبيض إلى طبق بتري جديد أو نظيف يحتوي على الماء. امسك طرف المبيض وافتح المبيض داخليا ؛ نفذ هذه الخطوة بعناية لتجنب تلف المبيضات.</li>
</ol>5. تحليل البيانات لتشريح أنسجة المبيض
<ol><li>في هذه الخطوة ، قم بتقييم نمو البيض لكل حشرة ، باتباع لون وحجم البيض ، للحكم على نضجها. ثم ، الحكم على درجة المبيض وفقا لتطور البيض. ملاحظة: ينقسم تقسيم مستويات نمو المبيض المختلفة بشكل أساسي ، إما قبل وضع البيض أو نمو البيض مع مستوى ترسيب صفار البيض. تنقسم الحشرات تطور حبوب البيض إلى مراحل لمزيد من الوضوح مثل مرحلة حدوث صفار البيض ومرحلة نضج الصفار ومرحلة زوال الصفار. يعتمد نضج حبة البيض على امتلاء البويضة ولونها وحجمها للحكم على نضجها.</li>
	<li>بعد التشريح ، تأكد من فصل أنسجة أكياس التزاوج الأنثوية عن المبايض السليمة ، ومراقبة التشكل لتمييز الأنواع لأن معظم تشريح أكياس التزاوج يختلف من نوع إلى آخر. لذلك ، استخدم أكياس التزاوج للتمييز بين الأنواع.</li>
	<li>في هذه الخطوة ، قم بتقييم تشريح المبيض ، وتحليل درجات تطور المبيض. قسم أنسجة المبيض إلى خمس درجات (الصف 1 إلى الصف 5).<ol><li>ابحث عن التغييرات والبنية التالية لتنظيم الأنسجة: الصف الأول (1) هو مرحلة مبكرة من التطور (شفاف حليبي) ، بطن كامل ، ناعم ، جسم دهني رقيق ، لون فاتح ، يصعب تقشيره. الصف الثاني (2) هو مرحلة ترسب صفار البيض وتصنيف المبيضين بشكل منفصل إذا لزم الأمر بعد مراقبة قناة المبيض الأطول والأكثر سمكا. الصف الثالث (3) لديه عدد أقل من الأجسام الدهنية وعدد قليل من الحبيبات المرتبطة بالمبيض. يبدو الصف الرابع (4) أقل مرونة وسهل الكسر ، ويمكن أن توجد بعض البويضات في منتصف أنبوب الرحم. من السهل التعرف على الصف الخامس (5) مع أجسام دهنية أقل أو معدومة ، ومبايض ضامرة وهشة.</li>
	</ol></li>
	<li>التقاط الصور باستخدام كاميرا رقمية حسب الحاجة التجريبية.</li>
</ol>

تشريح لتحديد الحشرات المهاجرة عن طريق تحليل تكاثر المبيض

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

تستخدم طرق تحليل المبيض بشكل روتيني في وقاية النبات ، لتوضيح حركة طيران الحشرات وأعدادها للتنبؤب 19،20،21 ولتوضيح الاختلافات الفسيولوجية في الحشرات. وقد لوحظ أن الهجرة الفريدة وقدرة الانتشار السريع للآفات الزراعية الشائعة ، مثل دودة اللو?...

تلعب هجرة الحشرات دورا حيويا في ديناميات السكان لتوزيع الحشرات العالمية للحشرات مثل Helicoverpa armigera - دودة اللوز القطنية ، Mythimna منفصلة - دودة الحشد الشرقية ، Spodoptera litura - كاتربيلر القلقاس ، Spodoptera exigua - دودة الحشد البنجر ، التي تم الإبلاغ عنها كآفات خطيرة في الصين1،2،3،4. جلبت مسافات السفر الطويلة ، والحركات الموسمية ، والخصوبة العالية للآفات المهاجرة ، والعوامل البيئية صعوبات كبيرة في التنبؤ بهذه الآفات والتنبؤ بها ومكافحتها5. مطلوب مراقبة هجرة الآفات للكشف عن القدرة على التكيف والتغيرات السلوكية التي تسهل الآفات المهاجرة وفقا للتغيرات المناخية أو الدورات6. للحفاظ على نموها وتكاثرها وبقائها ، اكتسبت الحشرات قدرة متسلسلة على التكيف أثناء التطور. ولدت هذه السلسلة من الحياة التكيفية العديد من التغييرات في الجهاز التناسلي ، مثل استراتيجية الهجرة التي تؤدي إلى السيطرة على نمو المبيض في عملية الهجرة الطويلة.
تطور المبيض شائع في الآفات المهاجرة ، مما يؤثر على نمو سكانها7. لذلك ، كان تطور المبيض موضوعا ساخنا لأبحاث الآفات المهاجرة لفترة طويلة. أدت سلسلة من الدراسات إلى العديد من مؤشرات نمو المبيض واستراتيجيات التصنيف. حتى الآن ، تم استخدام عدة طرق لتحليل تطور المبيض ، على سبيل المثال ، Loxostege sticticalis - عثة المرج - تطور المبيض الذي يتضمن مرحلة الريش الأولية ، وفترة التفريخ المبكرة ، وفترة التفريخ ، ونهاية وضع البيض8. يقسم بعض الباحثين مستويات المبيض على أساس تطور لون صفار البيض في آفات حرشفيات الأجنحة المهاجرة ، مثل S. exigua - دودة الحشد البنجر ، Pseudaletia unipuncta - دودة الحشد الحقيقية ، و Cnaphalocrocis medinalis - مجلد أوراق الأرز ، إلخ.9،10،11،12. في الدراسات السابقة ، تم تقسيم مستويات تطور المبيض للآفات ، مثل دودة اللوز القطنية وأسطوانة أوراق الأرز ، إلى خمس مراحل: مرحلة ترسب صفار البيض ، مرحلة نضج حبوب البيض ، الانتظار الناضج للولادة ، فترة ذروة التبويض ، ومرحلة التفريخالنهائي 13،14. تم تقسيم تطور المبيض لحفار الذرة الأوروبي إلى ست مراحل تنموية: مرحلة ترسب صفار البيض ، ونضج البيض ، والتخلص من البيض المسبق ، ومرحلة التفريخ القصوى ، ومرحلة التفريخالنهائي 15.
علاوة على ذلك ، فإن الحشرات من نفس الجنس لها مراحل مختلفة من التطور ، مثل مستويات تطور المبيض من Spodoptera frugiperda - دودة الحشد الخريفية - تقع في أربعة مستويات: مرحلة ترسب صفار البيض ، والانتظار الناضج للتسليم ، وذروة إيجابية ovi ، ومرحلة التفريخالنهائية 16. من ناحية أخرى ، فإن تطور المبيض في Spodoptera exigua - عثة البنجر - له خمسة مستويات: شفاف ، تكوين الجسم ، نضوج البيض ، إطلاق البيض ، ومستويات وضع البيضالمتأخرة 17.
يمكن للدراسات السابقة فقط تصنيف التطور من مستويات تطور المبيض الفردي إلى المتعدد باستخدام نضج اللون لتطور صفار البيض ووضع البيض والبويضات ، ولكن لا يمكن إجراء التصنيف بناء على تشريح الجهاز التناسلي. تطور المبيض على أساس تشريح التشكل هو مجال أقل دراسة. هنا ، تم تصميم طريقة التشريح للتنبؤ بالإناث المهاجرة في السكان باستخدام نوعين من أنسجة المبيض ، لتوضيح ديناميكيات التكاثر الخاصة بهم بناء على التشكل التشريحي لمرحلة تطور المبيض وكيس التزاوج - مما يوفر دليلا مباشرا لتمييز الإناث البرية المهاجرة.
وقد وجدت بعض الدراسات أن أنواع الحشرات Noctuidae المهاجرة تم التقاطها بشكل متكرر بواسطة الكشافات18. المبيض لمعظم أنواع الحشرات Noctuidae المهاجرة في المراحل الأولى من التطور خلال المرحلة الأولى من الهجرة ويزداد مستوى المبيض مع تقدم الهجرة. في هذه الدراسة ، تم وصف طريقة تشريح درجات تطور المبيض ، لدراسة النسجين التناسليين لآفات سكانية مختلفة من الإناث ، تم التقاطهما بواسطة ضوء البحث. لا تعمل هذه الطريقة على تطوير البحث لفهم ديناميكيات الهجرة فحسب ، بل تعمل أيضا على تصنيف الحشرات ، ودراسة فسيولوجيا الحشرات ، والتنبؤ بالآفات ، والتنبؤ بأنواع الآفات الأنثوية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Canon ( China ) co., LTD</td>
			<td>EOS 800D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute (99.7%)</td>
			<td>Shanghai Hushi Laboratory Equipmentco., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>&#160;Vetus Tools co., LTD</td>
			<td>ST-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GT75 type halogen headlamp (1000 W)</td>
			<td>Shanghai Yadeng Industry co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helicoverpa armigera, Mythimna separate, Spodoptera litura, Spodoptera exigua</td>
			<td>Jiyang district, Jinan city, Shandong province, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring cylinder, beaker, flask</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net bag&#160;</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>0.5 m&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net cages&#160;</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>30 cm x 30 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>&#160;60 mm diameter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and grading of ovarian development in wild-type female insects

تشكل الآفات الحشرية المهاجرة تحديات خطيرة لإنتاج الأغذية وأمنها في جميع أنحاء العالم. يمكن رصد الآفات المهاجرة والتقاطها باستخدام مصائد الكشاف. واحدة من أهم التقنيات للتنبؤ بالآفات المهاجرة هي تحديد الأنواع المهاجرة. ومع ذلك ، في معظم الحالات ، من الصعب الحصول على المعلومات بمجرد المظهر. لذلك ، فإن استخدام المعرفة المكتسبة عن طريق التحليل المنهجي للجهاز التناسلي للأنثى يمكن أن يساعد في فهم التشكل التشريحي المشترك لكيس تزاوج المبيض وتدرج نمو المبيض للحشرات المهاجرة من النوع البري التي يتم التقاطها باستخدام مصائد الكشافات. لإثبات قابلية تطبيق هذه الطريقة ، تم تقييم حالة نمو المبيض ومراحل تطور حبوب البيض بشكل مباشر في Helicoverpa armigera و Mythimna separata و Spodoptera litura و Spodoptera exigua لتشريح المبيض ، وتمت دراسة أكياس تزاوج المبيض في Agrotis ipsilon و Spaelotis valida و Helicoverpa armigera و Athetis lepigone و Mythimna separata و Spodoptera litura و Mamestra brassicae و Spodoptera exigua، لاستكشاف علاقاتهم. يوضح هذا العمل طريقة التشريح المحددة للتنبؤ بالحشرات المهاجرة من النوع البري ، ومقارنة الجهاز التناسلي الفريد للحشرات المهاجرة المختلفة. بعد ذلك ، تم إجراء مزيد من التحقيق في كلا النسجين ، وهما أكياس المبيض والتزاوج. تساعد هذه الطريقة على التنبؤ بالديناميات والتطور الهيكلي للأنظمة التناسلية في الحشرات المهاجرة من النوع البري.

Migration of insects plays a vital role in population dynamics of global insect distribution for insects like Helicoverpa armigera - the cotton bollworm, Mythimna separate - the oriental armyworm, Spodoptera litura - the taro caterpillar, Spodoptera exigua - the beet armyworm, that have been reported as serious pests in China1,2,3,4. The long travel distances, seasonal movements, high fecundity of migratory pests, and ecological factors have brought great difficulties in the prediction, forecast, and control of these pests5. Pest migration monitoring is required to reveal the adaptability and behavioral changes that facilitate migratory pests according to climate changes or cycles6. To sustain their growth, reproduction, and survival, insects have acquired sequential adaptability during evolution; this series of adaptive life has generated many changes in the reproductive system, such as migratory strategy leading to control of ovarian development in the long migratory process.
Ovarian development is common in migratory pests, which affects the growth of their population7. Therefore, ovarian development has been a hot topic of migratory pest research for a long time. A series of studies have led to several ovarian development indicators and classification strategies. Until now, several methods have been used to analyze ovary development, e.g., Loxostege sticticalis - the meadow moth- ovary development which includes the initial feathering stage, the early spawning period, the spawning period, and the end of oviposition8. Some researchers divide ovarian levels on the bases of yolk color development in migratory Lepidopteran pests, such as S. exigua - the beet armyworm, Pseudaletia unipuncta - the true armyworm, and Cnaphalocrocis medinalis- the rice leaf-folder, etc.9,10,11,12. In previous studies, the ovarian development levels for pests, such as cotton bollworm and rice leaf roller, were divided into five stages: yolk deposition stage, egg grain maturity stage, mature waiting for birth, peak ovogenesis period, and end spawning stage13,14. The ovarian development of the European corn borer was divided into six developmental stages: yolk deposition stage, egg maturation, pre-eggs dispositioning, peak spawning stage, and end-spawning stage15.
Moreover, insects of the same genus have different stages of development, such as ovarian development levels of Spodoptera frugiperda - the fall armyworm - falls into four levels: yolk deposition stage, mature waiting for delivery, peak ovi-positivity, and end spawning stage16. On the other hand, ovarian development in Spodoptera exigua - the beet moth - has five levels: transparent, vitellogenesis, maturation of eggs, egg release, and late egg-laying levels17.
Former studies can only classify development from single to multiple ovarian development levels using color maturity of yolk, oviposition, and egg developments, but classification cannot be done based on anatomy of the reproductive system. The development of an ovary based on the morphogenesis anatomy is a less studied area. Here, the dissection method was designed to predict migratory females in the population using two ovarian tissue types, to elaborate their reproductive dynamics based on the anatomical morphogenesis of -ovarian development stage and mating sac- providing direct evidence to distinguish migratory wild-type females.
Some studies have found that, migratory Noctuidae insect species were frequently captured by searchlights18. The ovary of most migratory Noctuidae insect species is in the early stages of development during the initial stage of migration and the ovarian level increases with the migratory progress. In this study, the dissection method for ovarian development grades is described, to study the two reproductive tissues of different female population pests, captured by search light. This method not only advances the research to understand the migratory dynamics, but also facilities in insect classification, insect physiology study, pest prediction, and forecasting of female pest species.

تسليط الضوء على المؤلف: تحليل تشريح المبيض في الحشرات المهاجرة للتغلب على التحديات التجريبية 

تشريح وتصنيف تطور المبيض في الحشرات الأنثوية البرية

We aim to apply easy and this newest method for migratory pest, in describing the ovarian anatomy of migratory females. This information will be useful to analyze similar individual species. To predict migratory female insects is pretty challenging.Therefore, visualization of ovarian anatomy is quite easy and very useful.

تطور البيض تم تطبيق البروتوكول أعلاه لتحليل تطور البيض في المبيض. لهذا الغرض ، أولا ، تم تصنيف البيض بشكل عام إلى أربع مراحل للتمييز بين المرحلة المبكرة والناضجة من تطور البيض بين جميع الأنواع ، على سبيل المثال ، دودة اللوز ، دودة الحشد ، كاتربيلر القلقاس ، وعثة البنجر. هنا ، لوح?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Ovarian Anatomy in Migratory Insects to Overcome Experimental Challenges at JoVE.com

يوضح البروتوكول طريقة تشريح بسيطة وسهلة ، مناسبة للحشرات الإناث المهاجرة من النوع البري التي يتم التقاطها باستخدام مصائد الكشافات. يمكن لهذه التقنية توضيح نفس النوع بشكل كبير من خلال مقارنة كل من الأنسجة التناسلية ، أي كيس التزاوج وتطور المبيض للحشرات الأنثوية من النوع البري.

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

نهدف إلى تطبيق هذه الطريقة السهلة والأحدث للآفات المهاجرة ، في وصف تشريح المبيض للإناث المهاجرات. ستكون هذه المعلومات مفيدة لتحليل الأنواع الفردية المماثلة. إن التنبؤ بالحشرات الأنثوية المهاجرة أمر صعب للغاية.لذلك ، فإن تصور تشريح المبيض سهل للغاية ومفيد للغاية.

dissection-grading-ovarian-development-wild-type-female

Research

JoVE Journal

Behavior

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

967 Views.  Shandong Academy of Agricultural Sciences. نهدف إلى تطبيق هذه الطريقة السهلة والأحدث للآفات المهاجرة ، في وصف تشريح المبيض للإناث المهاجرات. ستكون هذه المعلومات مفيدة لتحليل الأنواع الفردية المماثلة. إن التنبؤ بالحشرات الأنثوية المهاجرة أمر صعب للغاية.لذلك ، فإن تصور تشريح المبيض سهل للغاية ومفيد للغاية.

Video: تسليط الضوء على المؤلف: تحليل تشريح المبيض في الحشرات المهاجرة للتغلب على التحديات التجريبية 

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using searchlight traps. One of the most important techniques for migratory pest forecasting is to identify the migratory species. However, in most cases, it is difficult to get the information just by appearance. Therefore, using knowledge acquired by systematic analysis of the female reproductive system can help to understand the combined anatomic morphology of the ovarian mating sac and ovary developmental grading of wild-type migratory insects captured with searchlight traps. To demonstrate the applicability of this method, ovarian development status and egg grain development stages were directly assessed in Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura, and Spodoptera exigua for the ovarian anatomy, and the ovarian mating sacs were studied in Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae, and Spodoptera exigua, to explore their relationships. This work shows the specific dissection method to predict wild-type migratory insects, comparing the unique reproductive system of different migratory insects. Then, both tissues, namely, the ovary and mating sacs, were further investigated. This method helps to predict the dynamics and the structural development of reproductive systems in wild-type female migratory insects.

The protocol demonstrates a simple and easy dissection method, suitable for wild-type migratory female insects captured with searchlight traps. This technique can significantly clarify the same species by comparing both reproductive tissues, namely the mating sac and ovarian development of wild-type female insects.

Noctuidae Insect Preparation, Dissection, and Ovarian Tissue Analysis

Noctuidae Insect Preparation, Dissection, and Ovarian Tissue Analysis  

Begin by transferring all the collected Noctuidae insects from the net bag to a net cage. Next, provide a Petri dish containing a sterilized 10%honey water solution. Set the cage in a stable environment.Choose wild type female insects that have ventured inside the cage that same day. Carefully transfer these insects into individual vial tubes, ensuring each tube is sealed with a cotton lid. For insect dissection, first place a freshly paralyzed female insect into a dissecting Petri dish containing absolute ethanol.To ensure a clean dissection, infiltrate the insect with absolute alcohol and rinse it in clean water. Next, using forceps, separate the dorsal wings at the junction of the chest and abdomen. Transfer the abdomen into a new disposable dish filled with two to five millimeters of water.Using dissecting forceps, gently peel the abdominal exoskeleton, starting from the pointed mouth dorsoventrally to the tail. Replicate these steps on the other side and place it in clean water to disperse the intact tissues. Now delicately peel off the epidermis fat tissues using forceps and gently pull and release the ovaries.With a pair of dissecting forceps, gently remove fat particles and any surrounding organs from the ovaries. Gradually peel off the mating sac from the middle and eliminate fat particles attached to the ovarian tubes. Gently hold onto the ovary and mating sac from the vertical posterior end, then slowly unfold it downwards.To prevent damage, transfer the ovary into a new or clean Petri dish filled with water. Hold the ovarian tip and unfold the ovary inwardly. Assess the egg maturity for the insect using color and size indicators.Then judge the ovarian grade according to the egg development. After dissection, make sure to separate the female mating sac tissues from the intact ovaries. Examine the morphology as mating sac anatomical features differ from species to species.Next, analyze the ovarian anatomy by dividing the ovarian tissues into five distinct grades. Lastly, capture images of the ovary using a digital camera as per the requirements of the experiment. Four different stages of ovarian development were observed, including the milky white transparent stage with underdeveloped ovaries, the yolk deposition stage with large slightly immature eggs, the ripening stage with bright yellow bead-shaped eggs and the end spawning stage with few or no egg grains.The mating sac of a wild type insect Helicoverpa armigera had a columnar right helix with an inner lumen. Mythimna separata had a G-shaped mating sac with dark brown bands. The mating sac of Agrotis ipsilon was linear with large coils outer back cysts.Spaelotis valida had a slightly brownish thin J-shaped mating sac, while Spodoptera exigua showed a white translucent dumbbell-shaped sac with a bubble cyst in the middle. The mating sac of Spodoptera litura was red with an upper milky white transparent mouth and a faintly visible internal cystic cavity. Pseudoptera lepigone mating sac was small and coiled with closed outer cysts.Mamestra brassicae had olive colored double coiled sacs with outer cysts. Old worm ovarian grading showed transparent and elastic ovarian ducts with grade one visible oocytes. At grade two, the ovarian duct became transparent with tender yellow eggs.At grade three, large fat bodies were absent with the duct being thickest at the ovipositor. Grades four and five showed clusters and fewer eggs in the ovaries with pale yellow and greenish color. All five ovarian grades were also observed in the armyworm, in the tarot caterpillar, and in the bollworm.