Bu çalışma, büyük bilimsel ve teknolojik yenilik projesi (2020CXGC010802) tarafından desteklenmiştir.

NOT: Yabani tip göçmen böcekleri yakalamadan önce güvenlik önlemlerine dikkat edin, güvenlik donanımı (eldiven, uzun kollu gömlek ve gözlük) giyilmesi önerilir. Ayrıca, diğer güvenlik tehlikelerini ve ışığın aşırı ısınmasını önlemek için kullanılmadığında sifonu kapatın. Vücut sıvılarına ve kimyasallarına maruz kalmayı önlemek için diseksiyondan önce eldiven, gözlük ve laboratuvar önlüğü giymek gibi güvenlik protokollerini takip etmek önemlidir.
1. Göçmen böceklerin yakalanması
<ol><li>Projektör lambasını kullanarak böcekleri yakalayarak bu protokole başlayın. Bu protokolde, test böcek kaynağı Jiyang bölgesi, Jinan şehri, Shandong eyaleti, Çin'dir (36.977088 ° K, 116.982747 ° D).</li>
	<li>Paslanmamış çelikten yapılmış projektör lambasının ana gövdesini, dikdörtgen gövdeli kutusunu ve 1000 W gücünde GT75 tipi halojen farı kullanın.</li>
	<li>Işığın içine ve altına huni şeklinde bir böcek toplama kanalı yerleştirin, 5 cm çapında böcek toplama kutusu yerleştirin, ardından ışıkla hapsolmuş böcekleri toplamak için kullanılan 60 sıralı bir böcek toplama ağı torbası (0,5 m x 0,5 m) yerleştirin. Işığın bilinen izdüşümü yerden yaklaşık 500 m yüksekliktedir.</li>
	<li>Bu protokol, vahşi tip dişilerin göç dinamiklerine ve yumurtalık gelişimine vurgu yapar; bu nedenle, farklı böcek türlerini toplayın (burada toplama Nisan'dan Ağustos'a kadar, 2021'den 2022'ye kadar yapıldı). Küçük boyutlu ve yaralı böcekleri toplamaktan kaçının, bu deney için benzer büyüklükteki büyük haşereleri seçin.</li>
</ol>2. Böceklerin hazırlanması
<ol><li>Toplanan tüm böcekleri ağ torbasından (0,5 m) ağ kafesine (30 cm x 30 cm) aktarın ve ardından% 10 ballı su sterilize edilmiş çözelti içeren bir Petri kabı sağlayın (besleme isteğe bağlıdır). Kafesi 27 ± 2 °C'ye, %65 ± %12 bağıl neme yerleştirin ve 8-12 saat karanlıkta muhafaza edin.</li>
	<li>Aynı gün kafesin içinde uçan vahşi tip dişileri seçin, bunları dikkatlice tek tek şişe tüplerine aktarın ve her tüpü pamuklu bir kapakla kapatın. Aşırı basınç nedeniyle haşereye zarar verebilecek veya yaralayabilecek doğrudan kullanımdan kaçının. NOT: Tüm yabani tip dişiler gece yakalandı ve gündüz diseksiyon yapıldı. Böylece her deney bir gün içinde gerçekleştirilmiş oldu.</li>
</ol>3. Böcek felç yöntemi için hazırlık (Şekil 1)
<ol><li>Seçilen dişi haşereyi tek tek ortadaki bir sinek şişesi tüpüne yerleştirin ve hafif felce neden olmak için üfleme tabancası iğnesini tutarak CO2 gazı kullanarak dişiyi uyuşturun. Zararlı böceğin felç olup olmadığını doğrulamak için yumuşak bir fırça kullanarak zararlıyı hafifçe dürtün veya dokunun. Yumuşak uyaranlara ve hareketsizliğe yanıt verilmemesi başarılı bir felç olduğunu gösterir. NOT: Düşük sıcaklık (-20 °C), böcekleri felç etmek için alternatif bir teknik olarak da kullanılabilir.</li>
</ol>4. Böceklerin diseksiyonu
<ol><li>Taze felçli dişi, mutlak etanol (10 mL) içeren diseksiyon Petri kabına yerleştirin. Diseksiyon sırasında pul kıllarının ve kanat tozlarının etkisinden kaçınmak için, canlı veya felçli böceğe mutlak alkolle sızın ve temiz suyla durulayın.</li>
	<li>İki çift forseps kullanarak sırt kanatlarını göğüs ve karın gövdesinin birleştiği yerden ayırın.</li>
	<li>Karnı, uygun miktarda su (2-5 mm derinliğinde) içeren yeni bir tek kullanımlık Petri kabına aktarın ve diseksiyon forseps kullanarak karın dış iskeletini dorsal ventral çizgi boyunca sivri ağızdan kuyruğa kadar nazikçe soyun. Diğer tarafta aynı adımları tekrarlayın ve ardından sağlam dokuları dağıtmak için temiz suya koyun.</li>
	<li>Forseps kullanarak epidermis yağ dokularını dikkatlice soyun ve yumurtalıkları yavaşça çekip bırakın.</li>
	<li>Yumurtalıkların etrafındaki yağ parçacıklarını ve diğer organları nazikçe çıkarmak için diseksiyon forseps kullanın. Genellikle haşere yumurtalıkları çoğunlukla karnın her iki yanında içe doğru katlanır, yumurtalıkları açarken sıvı ortamda çalışmaya çalışır ve çiftleşme kesesini ortasından yavaşça soyarak yumurtalık tüplerine bağlı yağ parçacıklarını koparır.</li>
	<li>Yumurtalık ve çiftleşme kesesini dikey arka uçtan nazikçe tutun ve dikkatlice aşağı doğru açın. Açılma sırasında hasar görmemesi için, yumurtalığı su içeren yeni veya temiz bir Petri kabına aktarın. Yumurtalık ucunu tutun ve yumurtalığı içe doğru açın; Yumurtalıkların zarar görmesini önlemek için bu adımı dikkatlice gerçekleştirin.</li>
</ol>5. Yumurtalık dokuları anatomisi için veri analizi
<ol><li>Bu adımda, olgunluğunu değerlendirmek için yumurtaların rengini ve boyutunu takip ederek her bir böceğin yumurta gelişimini değerlendirin. Ardından, yumurtalık derecesini yumurta gelişimine göre değerlendirin. NOT: Çeşitli yumurtalık gelişim seviyelerinin bölünmesi, esas olarak ya yumurtlamadan önce ya da yumurta sarısı çökelme seviyesi ile yumurta gelişimi ile bölünür. Böceklerin yumurta tanesi gelişimi, daha fazla netlik için yumurta sarısı oluşum aşaması, yumurta sarısı olgunluk aşaması ve yumurta sarısı ölüm aşaması gibi aşamalara ayrılır. Yumurta tanesinin olgunluğu, olgunluğunu değerlendirmek için yumurtanın dolgunluğuna, rengine ve boyutuna bağlıdır.</li>
	<li>Diseksiyondan sonra, dişi çiftleşme kesesi dokularını sağlam yumurtalıklardan ayırdığınızdan emin olun ve türleri ayırt etmek için morfolojiyi gözlemleyin, çünkü çoğu çiftleşme kesesi anatomisi türden türe değişir. Bu nedenle, türler arasında ayrım yapmak için çiftleşme keseleri kullanın.</li>
	<li>Bu adımda, yumurtalık anatomisini değerlendirin ve yumurtalık gelişim derecesini analiz edin. Yumurtalık dokularını beş dereceye ayırın (derece 1 ila derece 5).<ol><li>Dokuyu düzenlemek için aşağıdaki değişiklikleri ve yapıyı arayın: birinci sınıf (1) gelişimin erken bir aşamasıdır (sütlü şeffaf), tam karın, yumuşak, şişman vücut kabarık, açık renkli, soyulması zordur. İkinci derece (2) yumurta sarısı biriktirme aşamasıdır ve daha uzun ve kalın yumurtalık kanalını gözlemledikten sonra gerekirse yumurtalıkları ayrı ayrı derecelendirir. Üçüncü sınıf (3) daha az yağ gövdesine ve yumurtalığa bağlı sadece birkaç granüle sahiptir. Dördüncü sınıf (4) daha az elastik ve kırılması kolay görünür ve bazı yumurtalar uterus tüpünün ortasında bulunabilir. Beşinci sınıf (5) daha az veya hiç yağ içermeyen cisimler, atrofik ve kırılgan yumurtalıklar ile tanımlanması kolaydır.</li>
	</ol></li>
	<li>Deneysel ihtiyaca göre bir dijital kamera kullanarak görüntü yakalayın.</li>
</ol>

Yumurtalık Üreme Analizi ile Göçmen Böceklerin Tanımlanması için Diseksiyon

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Yumurtalık analiz yöntemleri, bitki korumada, böcek uçuşunun ve popülasyonun hareketini 19,20,21 tahmin etmek ve böceklerdeki fizyolojik varyasyonları detaylandırmak için rutin olarak kullanılmaktadır. Kurt kurdu, ordu kurdu, taro tırtıl ve pancar güvesi gibi yaygın tarım zararlılarının benzersiz göç ve hızlı yayılma yeteneğinin, diğer bölgelerden tahmin yapılmasını zorlaştırdığı fark edilmiş...

Böceklerin göçü, Çin'de ciddi zararlılar olarak bildirilen Helicoverpa armigera - pamuk kurdu, Mythimna ayrı - oryantal ordu kurdu, Spodoptera litura - taro tırtılı, Spodoptera exigua - pancar tırtılı gibi böcekler için küresel böcek dağılımının popülasyon dinamiklerinde hayati bir rol oynamaktadır 1,2,3,4 . Uzun seyahat mesafeleri, mevsimsel hareketler, göçmen zararlıların doğurganlığının yüksek olması ve ekolojik faktörler bu zararlıların tahmini, tahmini ve kontrolünde büyük zorluklar getirmiştir5. Zararlı göçü izlemesi, iklim değişikliklerine veya döngülerine göre göç eden zararlıları kolaylaştıran uyum ve davranış değişikliklerini ortaya çıkarmak için gereklidir6. Büyümelerini, üremelerini ve hayatta kalmalarını sürdürmek için böcekler evrim sırasında sıralı adaptasyon kazanmışlardır; Bu uyarlanabilir yaşam serisi, üreme sisteminde, uzun göç sürecinde yumurtalık gelişiminin kontrolüne yol açan göç stratejisi gibi birçok değişiklik yaratmıştır.
Yumurtalık gelişimi, göçmen zararlılarda yaygındır ve bu da popülasyonlarının büyümesini etkiler7. Bu nedenle, yumurtalık gelişimi uzun süredir göçmen haşere araştırmalarının sıcak bir konusu olmuştur. Bir dizi çalışma, çeşitli yumurtalık gelişim göstergelerine ve sınıflandırma stratejilerine yol açmıştır. Şimdiye kadar, yumurtalık gelişimini analiz etmek için çeşitli yöntemler kullanılmıştır, örneğin, Loxostege sticticalis - ilk tüylenme aşamasını, erken yumurtlama dönemini, yumurtlama dönemini ve yumurtlamanın sonunu içeren çayır güvesi yumurtalık gelişimi8. Bazı araştırmacılar, yumurtalık seviyelerini, S. exigua - pancar tırtıl kurdu, Pseudaletia unipuncta - gerçek ordu kurdu ve Cnaphalocrocis medinalis- pirinç yaprağı klasörü vb. gibi göçmen Lepidopteran zararlılarında yumurta sarısı renk gelişimi temelinde bölerler.9,10,11,12. Önceki çalışmalarda, pamuk kurdu ve pirinç yaprağı merdanesi gibi zararlılar için yumurtalık gelişim seviyeleri beş aşamaya ayrılmıştı: yumurta sarısı biriktirme aşaması, yumurta tanesi olgunluk aşaması, doğum için olgun bekleyiş, pik ovogenez dönemi ve son yumurtlama aşaması13,14. Avrupa mısır kurdunun yumurtalık gelişimi altı gelişim aşamasına ayrılmıştır: yumurta sarısı biriktirme aşaması, yumurta olgunlaşması, yumurta öncesi düzenleme, en yüksek yumurtlama aşaması ve son yumurtlama aşaması15.
Ayrıca, aynı cinsin böcekleri, Spodoptera frugiperda'nın yumurtalık gelişim seviyeleri gibi farklı gelişim aşamalarına sahiptir - sonbahar ordu kurdu - dört seviyeye ayrılır: yumurta sarısı biriktirme aşaması, doğum için bekleyen olgunluk, en yüksek yumurtlama pozitifliği ve son yumurtlama aşaması16. Öte yandan, pancar güvesi olan Spodoptera exigua'daki yumurtalık gelişiminin beş seviyesi vardır: şeffaf, vitellogenez, yumurtaların olgunlaşması, yumurta salınımı ve geç yumurtlama seviyeleri17.
Önceki çalışmalar, yumurta sarısı, yumurtlama ve yumurta gelişimlerinin renk olgunluğunu kullanarak gelişimi yalnızca tek ila çoklu yumurtalık gelişim seviyelerinden sınıflandırabilir, ancak üreme sisteminin anatomisine dayalı sınıflandırma yapılamaz. Morfogenez anatomisine dayalı bir yumurtalığın gelişimi daha az çalışılmış bir alandır. Burada, diseksiyon yöntemi, iki yumurtalık dokusu tipi kullanarak popülasyondaki göçmen dişileri tahmin etmek, üreme dinamiklerini -yumurtalık gelişim aşaması ve çiftleşme kesesinin anatomik morfogenezine dayalı olarak- detaylandırmak için tasarlanmıştır ve göçmen vahşi tip dişileri ayırt etmek için doğrudan kanıt sağlar.
Bazı çalışmalar, göçmen Noctuidae böcek türlerinin sıklıkla projektörler tarafından yakalandığınıbulmuştur 18. Göçmen Noctuidae böcek türlerinin çoğunun yumurtalıkları, göçün ilk aşamasında gelişimin erken aşamalarındadır ve göçün ilerlemesiyle yumurtalık seviyesi artar. Bu çalışmada, farklı dişi popülasyon zararlılarının iki üreme dokusunu incelemek için yumurtalık gelişim dereceleri için diseksiyon yöntemi anlatılmıştır. Bu yöntem sadece göç dinamiklerini anlamak için araştırmayı ilerletmekle kalmaz, aynı zamanda böcek sınıflandırması, böcek fizyolojisi çalışması, haşere tahmini ve dişi haşere türlerinin tahminindeki olanakları da ilerletir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Canon ( China ) co., LTD</td>
			<td>EOS 800D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dropper</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute (99.7%)</td>
			<td>Shanghai Hushi Laboratory Equipmentco., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>&#160;Vetus Tools co., LTD</td>
			<td>ST-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GT75 type halogen headlamp (1000 W)</td>
			<td>Shanghai Yadeng Industry co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helicoverpa armigera, Mythimna separate, Spodoptera litura, Spodoptera exigua</td>
			<td>Jiyang district, Jinan city, Shandong province, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring cylinder, beaker, flask</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net bag&#160;</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>0.5 m&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net cages&#160;</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>30 cm x 30 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD</td>
			<td></td>
			<td>&#160;60 mm diameter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and grading of ovarian development in wild-type female insects

Göçmen böcek zararlıları, tüm dünyada gıda üretimi ve güvenliği için ciddi zorluklar oluşturmaktadır. Göçmen zararlılar, projektör tuzakları kullanılarak izlenebilir ve yakalanabilir. Göçmen haşere tahmini için en önemli tekniklerden biri, göçmen türleri tanımlamaktır. Bununla birlikte, çoğu durumda, bilgiyi sadece görünüşe göre elde etmek zordur. Bu nedenle, dişi üreme sisteminin sistematik analizi ile elde edilen bilgilerin kullanılması, yumurtalık çiftleşme kesesinin birleşik anatomik morfolojisinin ve projektör tuzakları ile yakalanan vahşi tip göçmen böceklerin yumurtalık gelişimsel derecelendirmesinin anlaşılmasına yardımcı olabilir. Bu yöntemin uygulanabilirliğini göstermek için yumurtalık anatomisi için Helicoverpa armigera, Mythimna separata, Spodoptera litura ve Spodoptera exigua'da yumurtalık gelişim durumu ve yumurta tane gelişim evreleri doğrudan değerlendirildi ve yumurtalık çiftleşme keseleri Agrotis ipsilon, Spaelotis valida, Helicoverpa armigera, Athetis lepigone, Mythimna separata, Spodoptera litura, Mamestra brassicae ve Spodoptera exigua'da çalışıldı., ilişkilerini keşfetmek için. Bu çalışma, farklı göçmen böceklerin benzersiz üreme sistemini karşılaştırarak, vahşi tip göçmen böcekleri tahmin etmek için spesifik diseksiyon yöntemini göstermektedir. Daha sonra her iki doku, yani yumurtalık ve çiftleşme keseleri daha fazla araştırıldı. Bu yöntem, vahşi tip dişi göçmen böceklerde üreme sistemlerinin dinamiklerini ve yapısal gelişimini tahmin etmeye yardımcı olur.

Migration of insects plays a vital role in population dynamics of global insect distribution for insects like Helicoverpa armigera - the cotton bollworm, Mythimna separate - the oriental armyworm, Spodoptera litura - the taro caterpillar, Spodoptera exigua - the beet armyworm, that have been reported as serious pests in China1,2,3,4. The long travel distances, seasonal movements, high fecundity of migratory pests, and ecological factors have brought great difficulties in the prediction, forecast, and control of these pests5. Pest migration monitoring is required to reveal the adaptability and behavioral changes that facilitate migratory pests according to climate changes or cycles6. To sustain their growth, reproduction, and survival, insects have acquired sequential adaptability during evolution; this series of adaptive life has generated many changes in the reproductive system, such as migratory strategy leading to control of ovarian development in the long migratory process.
Ovarian development is common in migratory pests, which affects the growth of their population7. Therefore, ovarian development has been a hot topic of migratory pest research for a long time. A series of studies have led to several ovarian development indicators and classification strategies. Until now, several methods have been used to analyze ovary development, e.g., Loxostege sticticalis - the meadow moth- ovary development which includes the initial feathering stage, the early spawning period, the spawning period, and the end of oviposition8. Some researchers divide ovarian levels on the bases of yolk color development in migratory Lepidopteran pests, such as S. exigua - the beet armyworm, Pseudaletia unipuncta - the true armyworm, and Cnaphalocrocis medinalis- the rice leaf-folder, etc.9,10,11,12. In previous studies, the ovarian development levels for pests, such as cotton bollworm and rice leaf roller, were divided into five stages: yolk deposition stage, egg grain maturity stage, mature waiting for birth, peak ovogenesis period, and end spawning stage13,14. The ovarian development of the European corn borer was divided into six developmental stages: yolk deposition stage, egg maturation, pre-eggs dispositioning, peak spawning stage, and end-spawning stage15.
Moreover, insects of the same genus have different stages of development, such as ovarian development levels of Spodoptera frugiperda - the fall armyworm - falls into four levels: yolk deposition stage, mature waiting for delivery, peak ovi-positivity, and end spawning stage16. On the other hand, ovarian development in Spodoptera exigua - the beet moth - has five levels: transparent, vitellogenesis, maturation of eggs, egg release, and late egg-laying levels17.
Former studies can only classify development from single to multiple ovarian development levels using color maturity of yolk, oviposition, and egg developments, but classification cannot be done based on anatomy of the reproductive system. The development of an ovary based on the morphogenesis anatomy is a less studied area. Here, the dissection method was designed to predict migratory females in the population using two ovarian tissue types, to elaborate their reproductive dynamics based on the anatomical morphogenesis of -ovarian development stage and mating sac- providing direct evidence to distinguish migratory wild-type females.
Some studies have found that, migratory Noctuidae insect species were frequently captured by searchlights18. The ovary of most migratory Noctuidae insect species is in the early stages of development during the initial stage of migration and the ovarian level increases with the migratory progress. In this study, the dissection method for ovarian development grades is described, to study the two reproductive tissues of different female population pests, captured by search light. This method not only advances the research to understand the migratory dynamics, but also facilities in insect classification, insect physiology study, pest prediction, and forecasting of female pest species.

Yazar Spotlight: Deneysel Zorlukların Üstesinden Gelmek İçin Göçmen Böceklerde Yumurtalık Anatomisinin Analizi 

Yabani tip dişi böceklerde yumurtalık gelişiminin diseksiyonu ve derecelendirilmesi

We aim to apply easy and this newest method for migratory pest, in describing the ovarian anatomy of migratory females. This information will be useful to analyze similar individual species. To predict migratory female insects is pretty challenging.Therefore, visualization of ovarian anatomy is quite easy and very useful.

Yumurtaların gelişimi Yumurtalıktaki yumurtaların gelişimini analiz etmek için yukarıdaki protokol uygulandı. Bu amaçla, ilk olarak, yumurtalar, kurt kurdu, ordu kurdu, taro tırtıl ve pancar güvesi gibi tüm türler arasında yumurta gelişiminin erken ve olgun aşamasını ayırt etmek için genel olarak dört aşamaya ayrılmıştır. Burada tüylenmenin erken evresi (süt beyazı saydam evre) gözlenmiştir. Şekil 2A , yumurtalıkların henüz gelişmeye b...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Ovarian Anatomy in Migratory Insects to Overcome Experimental Challenges at JoVE.com

Protokol, projektör tuzakları ile yakalanan vahşi tip göçmen dişi böcekler için uygun, basit ve kolay bir diseksiyon yöntemi göstermektedir. Bu teknik, hem üreme dokularını, yani çiftleşme kesesini hem de vahşi tip dişi böceklerin yumurtalık gelişimini karşılaştırarak aynı türü önemli ölçüde netleştirebilir.

Migratory insect pests pose serious challenges to food production and security all over the world. The migratory pests can be monitored and captured using ...

Göçmen zararlılara yönelik bu yeni yöntemi, göçmen dişilerin yumurtalık anatomisini tanımlarken uygulamayı amaçlıyoruz. Bu bilgi, benzer bireysel türleri analiz etmek için faydalı olacaktır. Göçmen dişi böcekleri tahmin etmek oldukça zordur.Bu nedenle yumurtalık anatomisinin görselleştirilmesi oldukça kolay ve oldukça faydalıdır.

dissection-grading-ovarian-development-wild-type-female

Research

JoVE Journal

Behavior

Dissection and Grading of Ovarian Development in Wild-Type Female Insects

954 Görüntüleme.  Shandong Academy of Agricultural Sciences. Göçmen zararlılara yönelik bu yeni yöntemi, göçmen dişilerin yumurtalık anatomisini tanımlarken uygulamayı amaçlıyoruz. Bu bilgi, benzer bireysel türleri analiz etmek için faydalı olacaktır. Göçmen dişi böcekleri tahmin etmek oldukça zordur.Bu nedenle yumurtalık anatomisinin görselleştirilmesi oldukça kolay ve oldukça faydalıdır.