الذباب المنفوخ هو مجموعة متنوعة من الذباب التي يمكن أن تكون طفيليات إلزامية أو اختيارية ، وكذلك sapro-necrophagous. تتغذى الأنواع الطفيلية الملزمة حصريا على الأنسجة الحية وتسبب الانقباضات في الفقاريات ، بينما تتغذى الأنواع الصخرية على المواد العضوية المتحللة. يمكن أن تتغذى الطفيليات الاختيارية على كل من المواد الحية أو المتحللة وتعيش كطفيليات أم لا.
على الرغم من أن مرحلة اليرقات هي الأكثر إشكالية ، إلا أن الأنثى تلعب دورا حاسما لأنها تختار مكان وضع البيض ، وبالتالي تتحكم إلى حد كبير في المكان الذي تتغذى فيه اليرقات وتتطور. الهدف العام من الطرق المعروضة هنا هو تقييم كل من تفضيل الركيزة الغذائية لليرقات واختيار موقع وضع البيض الأنثوي في الذباب النفخي. تفضيل تغذية اليرقات.
الخطوة الأولى ، تحضير أطباق بتري مع أجار 2٪تحضير أطباق بتري مع 2٪ أجار. للقيام بذلك ، أضف ستة جرامات من الآجار البكتريولوجي إلى 300 ملليلتر من الماء ، وقم بإذابة هذا المزيج في الميكروويف. ثم قسم الحجم إلى أربعة أطباق بتري.
تحضير عدد أطباق بتري مع أجار وفقا لعدد من تكرار الرغبة. بعد تصلب الآجار، اثقب أربعة ثقوب في الآجار باستخدام آلة القطع المتوفرة في ورقتنا في أنبوب مخروطي حجمه 50 ملليلتر بقطر ثلاثة سنتيمترات، وثقبان على كل جانب من طبق بتري. الخطوة الثانية ، إعداد ركائز.
لتحضير اللحم الطازج بالدم ، استخدم 12 ملليلترا من دم البقر المخفف وهو نصف دم بمحلول مضاد للتخثر ونصف ماء مصفى. ثم أضف هذا المحلول إلى 200 جرام من اللحم المفروم البقري الطازج وحركه جيدا. تذكر أن تستخدم أسطوانات وملاعق مختلفة لكل نوع من أنواع اللحوم لتجنب التلوث الآخر بين الركائز.
لتحضير الركيزة الفاسدة ، أضف 12 مل من الماء المصفى إلى 200 جرام من اللحم الفاسد وحركه تماما كما حدث مع اللحم الطازج. قبل بدء التجربة ، يترك اللحم ليتعفن لمدة خمسة أيام عند 25 درجة مئوية في حاضنة. بعد تحضير ركيزة اللحم ، املأ الثقوب الموجودة في الآجار باللحوم الطازجة والعفن على كل جانب.
تذكر أن تضع موضع اللحم عشوائيا في أطباق بتري كما نوضح هنا. الخطوة الثالثة ، الإعداد التجريبي. في غرفة عند 25 درجة مئوية ، اضبط وسادة التدفئة أسفل مصدر الضوء مباشرة لإلقاء الضوء بالتساوي على مقايسة التفضيل في انحياز سلوكي واسع نحو الضوء أو ضده.
ثم استخدم الورق المقوى حول وسادة التدفئة كدعم للحفاظ على الجميع على نفس المستوى. ضع كرتونا أسود فوق كل المجموعة ، وسادة التدفئة ، بالإضافة إلى الورق المقوى الداعم ، للحفاظ على نفس نمط اللون فوق جميع الركائز. ضع ستة أطباق بتري مع أجار وركيزة لحم فوق الورق المقوى الأسود مع ركيزتين ، واحدة من كل نوع على وسادة التدفئة والآخران خارج سطح وسادة التدفئة.
عند القيام بذلك ، سنسمح لكل طبق من أطباق بتري بالحصول على أربع ركائز ، طازجة وباردة ، فاسدة وباردة ، طازجة وساخنة ، وأخيرا فاسدة وساخنة. دع الركيزة تسخن لمدة 10 دقائق. الخطوة الرابعة ، اختبار اليرقات.
تحقق من درجة حرارة الركيزة باستخدام مقياس حرارة الأشعة تحت الحمراء. يجب أن يكون الجانب الأكثر برودة عند حوالي 25 درجة مئوية والأكثر سخونة عند حوالي 33 درجة مئوية. بعد الوصول إلى درجة الحرارة المطلوبة ، ضع خمس يرقات ثالثة في وسط كل طبق بتري باستخدام ملقط.
ثم قم بتغطية طبق بتري بالغطاء ، واترك تجربة الاختيار تعمل لمدة 10 دقائق بالضبط. أثناء التجربة ، سوف تزحف اليرقات حول طبق بتري وتختار من بين الخيارات الأربعة. إذا هربت أي يرقات ، خذها باستخدام ملقط ، وضعها مرة أخرى إلى وسط طبق بتري.
بعد 10 دقائق ، أخرج جميع أطباق بتري التجريبية من وسادة التدفئة وضعها على سطح مختلف. ثم احسب عدد اليرقات الموجودة في كل ركيزة. لقد لاحظنا أن اليرقات الملونة تبقى في الركيزة التي تختارها.
تفضيل موقع وضع البيض الأنثوي. الخطوة الأولى ، الإعداد التجريبي. يمكن القيام بالمهمة على رف عادي تم تغطيته مسبقا بالكرتون الأسود.
هناك حاجة إلى هذه الورق المقوى ، تماما كما هو الحال في فحص اليرقات ، لذلك لا توجد إشارات بصرية متاحة للإناث البالغات. يحتاج الرف أيضا إلى أن يكون مبطنا بالتساوي بشرائط LED. في غرفة عند 25 درجة مئوية ، ضع وسادة التدفئة في وسط الرف.
استخدم الورق المقوى حول وسادة التدفئة كدعم للحفاظ على الجميع على نفس المستوى. ضع كرتونا أسود فوق كل المجموعة ، ووسادة تدفئة ، بالإضافة إلى ورق مقوى داعم للحفاظ على نفس النمط الملون فوق جميع الركائز. ضع وسادات التدفئة تحت ذراعين من نفس الصليب بين صليبين مختلفين.
سيسمح ذلك باستخدام أفضل للمساحة الموجودة على الرف. قم بتشغيل مصابيح LED ووسادة التدفئة قبل بدء التجربة. تذكر دائما تنظيف النظارات المتقاطعة باستخدام 70٪ إيثانول لتجنب تلوث الرائحة بين الاختبارات.
الخطوة الثانية ، إعداد ركائز. تحضير أطباق بتري البلاستيكية مع خمسة غرامات من اللحوم الطازجة أو الفاسدة. الركيزة هي نفس اختبار اليرقات ، طازجة وفاسدة عمرها خمسة أيام.
مطلوب ما مجموعه أربعة أطباق بتري لكل صليب ، اثنان مع اللحوم الطازجة واثنان مع اللحوم الفاسدة. بالنسبة للحوم الطازجة ، أضف ملليمترا واحدا من دم البقر المخفف وهو نصف الدم مع مضادات التخثر ونصف الماء. بالنسبة للحوم الفاسدة ، أضف ملليمترا واحدا من الماء المصفى.
تذكر أن تقلب كلتا الركيزتين جيدا وأن تستخدم ملاعق مختلفة لتجنب تلوث الرائحة بين اللحوم الفاسدة والطازجة. تحقق مما إذا كان الكحول قد تبخر تماما على الصلبان. ثم ضع أربعة أطباق بتري مع اللحم في أقصى أذرع الصلبان ، واحد من كل نوع من اللحوم على وسادة التدفئة ، والاثنان الآخران خارج سطح وسادة التدفئة.
سيسمح ذلك لكل واحد من الصلبان بالحصول على أربع ركائز ، طازجة وباردة ، فاسدة وباردة ، طازجة وساخنة ، وأخيرا فاسدة وساخنة. أغلق فتحة الصلبان واترك الركائز تسخن لمدة 10 دقائق. الخطوة الثالثة ، اختبار الإناث.
جمع الاستيلاء على الإناث في قفص الذبابة. تتميز بوجود بطن متضخم وأبيض اللون. افصل أنثى واحدة لكل صليب في أنابيب فردية.
تحقق من درجة حرارة الركائز باستخدام مقياس حرارة الأشعة تحت الحمراء. يجب أن يكون الجانب الأكثر برودة عند حوالي 25 درجة مئوية والأكثر سخونة عند حوالي 33 درجة مئوية. ضع أنبوبا واحدا مع أنثى ممسكة في الفتحة المركزية لكل صليب.
بعد دخول الأنثى الصليب ، أغلق الفتحة بالغطاء. بعد وضع جميع الإناث في كل صليب ، أغلق الجزء المفتوح من الرف بالكرتون الأسود للحماية من مصادر الضوء الخارجية. دع التجربة تستمر لمدة أربع ساعات بالضبط.
بعد الانتهاء من هذا الوقت ، قم بإزالة الأنثى من الصلبان باستخدام أنبوب. ثم تحقق مما إذا كان هناك أي موقف آخر على الركيزة. حدد غطاء كل طبق بتري باسم الركيزة.
استخدم 70٪ إيثانول لتنظيف الصلبان من أي رائحة من الاختبار. الخطوة الرابعة ، عدد البيض. يمكن تجميد أطباق بتري قبل العد.
في هذه الحالة ، قم بإذابة أطباق بتري. ثم احسب عدد البيض في كل ركيزة باستخدام مجهر مجسم. تحليل البيانات والإحصاءات.
الخطوة الأولى ، حساب مؤشر التفضيل. لكل نسخة مكررة من الاختبارات السلوكية ، يتم حساب مؤشر التفضيل بشكل منفصل لنوع الركيزة ودرجة الحرارة. يتم تمثيل مؤشر التفضيل لنوع الركيزة بعدد اليرقات أو البيض على ركائز اللحوم الطازجة مقسوما على العدد الإجمالي لليرقات أو البيض على جميع الركائز.
يتم تمثيل مؤشر التفضيل لدرجة الحرارة بعدد اليرقات أو البيض على ركائز ساخنة مقسوما على العدد الإجمالي لليرقات أو البيض على جميع الركائز. بالنظر إلى كل من تفضيلات المؤشر ، تعكس القيم القريبة من أحدهما تفضيل الركائز الطازجة أو الساخنة. والقيم القريبة من الصفر تعني تفضيل الركائز الفاسدة أو الباردة.
الخطوة الثانية ، مقارنة التفضيل الملحوظ للاختيار العشوائي. يمكننا تمثيل مؤشر التفضيل لدرجة الحرارة على المحور Y ومؤشر التفضيل للحوم على المحور X. لتحديد ما إذا كانت اليرقات و / أو الإناث تظهر تفضيلا لحالة ما ، قارنا نتائجنا باختيار عشوائي باستخدام بيانات محاكاة.
نتائج يرقاتنا مؤجلة بشكل كبير من جميع مجموعات البيانات المحاكاة من حيث درجة الحرارة وتفضيل اللحوم. بيانيا ، من الواضح أن اليرقات أظهرت تفضيلا قويا للركيزة الفاسدة والباردة. وجدنا أن تفضيل الإناث لنوع اللحوم كان مختلفا بشكل كبير عن الاختيار العشوائي في حوالي 30٪ من المقارنات.
بالنسبة لدرجة الحرارة ، أدى حوالي 70٪ من مقارناتنا إلى تفضيل كبير. يوفر كلا البروتوكولين إمكانية اختبار تفضيل اليرقات والإناث لعاملين متفاعلين ، نوع اللحم ودرجة الحرارة. الاختبارات واضحة ومباشرة ، ويمكن تكييفها لاختبار تفضيل الأنواع الأخرى من نفس الحجم و / أو الظروف الأخرى.
نحن نعلم أن سلوك متغير تماما ويتأثر بالعديد من العوامل البيئية ، لذلك يجب توخي الحذر بشكل خاص لتجنب الإضاءة غير المتكافئة والروائح العالقة وغيرها من تلوث الركيزة من خلال الأواني المشتركة. شكرا للمشاهدة.
