Мухи представляют собой разнообразную группу мух, которые могут быть облигатными или факультативными паразитами, а также сапронекрофагами. Облигатные паразитические виды питаются исключительно живыми тканями и вызывают миаз у позвоночных, в то время как сапронекрофаги питаются разлагающимся органическим веществом. Факультативные паразиты могут питаться как живым, так и разлагающимся материалом и жить как паразиты или нет.
Несмотря на то, что личиночная стадия является наиболее проблематичной, самка играет решающую роль, поскольку она выбирает, где откладывать яйца, и, следовательно, в значительной степени контролирует, где личинки будут питаться и развиваться. Общая цель представленных здесь методов состоит в том, чтобы оценить как предпочтения личинок пищевого субстрата, так и выбор самками места яйцекладки у мух. Предпочтения личинок в питании.
Шаг первый, приготовление чашек Петри с агаром 2%Приготовьте чашки Петри с 2%-ным агаром. Для этого добавьте шесть граммов бактериологического агара в 300 миллилитров воды и растопите эту смесь в микроволновке. Затем разделите объем на четыре чашки Петри.
Приготовьте количество чашек Петри с агаром в соответствии с желаемым количеством повторений. После того, как агар застынет, пробиваем четыре отверстия в агаре с помощью режущей петтерки, предусмотренной в нашей статье, в 50-миллилитровой конической трубке диаметром три сантиметра, по два отверстия с каждой стороны чашки Петри. Шаг второй, подготовка субстратов.
Для приготовления свежего мяса с кровью используют 12 миллилитров разбавленной бычьей кровью, которая наполовину состоит из раствора антикоагулянта и наполовину фильтрованной воды. Затем добавьте этот раствор в 200 грамм свежего говяжьего фарша и хорошо перемешайте. Не забывайте использовать разные цилиндры и ложки для каждого вида мяса, чтобы избежать других загрязнений между субстратами.
Чтобы приготовить гнилой субстрат, добавьте 12 миллилитров фильтрованной воды к 200 граммам тухлого мяса и перемешайте так же, как это было сделано со свежим мясом. Перед началом эксперимента мясо оставляют гнить на пять дней при температуре 25 градусов Цельсия в инкубаторе. Подготовив мясной субстрат, заполните отверстия в агаре свежим и гнилым мясом с каждой стороны.
Не забудьте рандомизировать положение мяса в чашках Петри, как мы показываем здесь. Шаг третий, экспериментальная установка. В комнате с температурой 25 градусов по Цельсию установите грелку прямо под источником света, чтобы равномерно осветить предпочтительный анализ в широком смещении поведения в сторону или против света.
Затем используйте картон вокруг грелки в качестве опоры, чтобы держать все на одном уровне. Положите черный картон на весь набор, грелку и вспомогательный картон, чтобы сохранить одинаковый цветовой узор над всеми подложками. Поместите шесть чашек Петри с агаром и мясным субстратом на черный картон с двумя подложками, по одной каждого типа на грелку, а две другие снаружи поверхности грелки.
Сделав это, мы позволим каждой чашке Петри иметь четыре субстрата: свежий и холодный, гнилой и холодный, свежий и горячий и, наконец, гнилой и горячий. Дайте субстрату нагреться около 10 минут. Шаг четвертый, личиночный тест.
Проверьте температуру подложки инфракрасным термометром. Более холодная сторона должна быть около 25 градусов по Цельсию, а более горячая - около 33 градусов по Цельсию. После достижения желаемой температуры поместите пять личинок третьего возраста в центр каждой чашки Петри с помощью пинцета.
Затем накройте чашку Петри крышкой и дайте эксперименту по выбору постоять ровно 10 минут. Во время эксперимента личинки будут ползать по чашке Петри и выбирать один из четырех вариантов. Если какие-либо личинки сбежали, возьмите их с помощью пинцета и поместите обратно в центр чашки Петри.
Через 10 минут достаньте все опытные чашки Петри из грелки и поместите их на другую поверхность. Затем посчитайте, сколько личинок в каждом субстрате. Мы заметили, что разноцветные личинки остаются в выбранном ими субстрате.
Предпочтение места яйцекладки самки. Шаг первый, экспериментальная установка. Задание можно выполнить на обычной полке, которая предварительно была застелена черными картонами.
Эти картонки, как и в личиночном анализе, необходимы, поэтому для взрослых самок нет никаких визуальных подсказок. Полку также нужно равномерно выложить светодиодными лентами. В комнате при температуре 25 градусов по Цельсию поместите грелку в центр полки.
Используйте картон вокруг грелки в качестве опоры, чтобы все оставалось на одном уровне. Положите черный картон на весь набор, грелку и поддерживающий картон, чтобы сохранить один и тот же цветной узор над всеми подложками. Расположите грелки под двумя рукавами одного и того же креста между двумя разными крестовинами.
Это позволит лучше использовать пространство на полке. Включите светодиодные лампы и грелку перед началом эксперимента. Не забывайте всегда очищать крестообразные стаканы 70%-ным этанолом, чтобы избежать загрязнения запахом между тестами.
Шаг второй, подготовка субстратов. Приготовьте пластиковые чашки Петри с пятью граммами свежего или гнилого мяса. Субстрат такой же, как и личиночный тест, свежий и пятидневный гнилой.
Всего для каждого креста требуется четыре чашки Петри, две со свежим мясом и две с тухлым мясом. Для свежего мяса добавьте один миллиметр разбавленной бычьей крови, которая состоит наполовину из крови с антикоагулянтом и наполовину из воды. Для тухлого мяса добавьте один миллиметр фильтрованной воды.
Не забывайте хорошо перемешивать оба субстрата и использовать разные ложки, чтобы избежать перекрестного загрязнения запаха между гнилым и свежим мясом. Проверьте, полностью ли испарился спирт на крестиках. Затем поместите четыре чашки Петри с мясом на край рук крестов, по одной из каждого вида мяса на грелку, а две другие снаружи поверхности грелки.
Это позволит каждому из скрещиваний иметь четыре субстрата: свежий и холодный, гнилой и холодный, свежий и горячий и, наконец, гнилой и горячий. Закройте отверстие крестиков и дайте субстратам нагреться около 10 минут. Шаг третий, женский тест.
Соберите самку в клетке с мухами. Для них характерно увеличенное и беловато-желтое брюшко. Отделите по одной самке для каждого скрещивания в отдельных пробирках.
Проверьте температуру подложек инфракрасным термометром. Более холодная сторона должна быть около 25 градусов по Цельсию, а более горячая - около 33 градусов по Цельсию. Поместите одну пробирку с захваченной самкой прямо в центральное отверстие каждого креста.
После того, как самка войдет в крест, закройте отверстие крышкой. Поместив всех самок в каждый крест, закройте открытую часть полки черным картоном, чтобы защитить от внешних источников света. Пусть эксперимент продлится ровно четыре часа.
По истечении этого времени извлеките самку из крестов с помощью трубки. Затем проверьте, нет ли на подложке каких-либо других положений. Определите крышку каждой чашки Петри с названием субстрата.
Используйте 70%-ный этанол, чтобы очистить кресты от любого запаха от теста. Шаг четвертый, подсчет яиц. Чашки Петри можно заморозить перед подсчетом.
В этом случае разморозьте чашки Петри. Затем подсчитайте количество яиц в каждом субстрате с помощью стереомикроскопа. Анализ данных и статистика.
Шаг первый, расчет индекса предпочтения. Для каждого повторения поведенческих тестов отдельно рассчитывается индекс предпочтений для типа субстрата и для температуры. Индекс предпочтения типа субстрата представлен количеством личинок или яиц на субстрате из свежего мяса, деленным на общее количество личинок или яиц на всех субстратах.
Индекс предпочтения температуры представлен числом личинок или яиц на горячих субстратах, деленным на общее количество личинок или яиц на всех субстратах. Принимая во внимание оба предпочтения индекса, значения, близкие к единице, отражают предпочтение свежих или горячих субстратов. А значения, близкие к нулю, означают предпочтение гнилых или холодных субстратов.
Шаг второй, сравнение наблюдаемого предпочтения со случайным выбором. Мы можем визуализировать индекс предпочтения температуры по оси Y и индекс предпочтения мяса по оси X. Чтобы определить, проявляют ли личинки и/или самки предпочтение к тому или иному состоянию, мы сравнили наши результаты со случайным выбором, используя смоделированные данные.
Наши результаты по личинкам значительно отличаются от всех смоделированных наборов данных с точки зрения температуры и предпочтений в отношении мяса. Графически видно, что личинки отдавали сильное предпочтение гнилому и холодному субстрату. Мы обнаружили, что предпочтения женщин в отношении типа мяса значительно отличались от случайного выбора примерно в 30% сравнений.
Что касается температуры, то около 70% наших сравнений привели к значительному предпочтению. Оба протокола дают возможность проверить предпочтения личинок и самок по двум взаимодействующим факторам: типу мяса и температуре. Тесты просты и могут быть адаптированы для проверки предпочтения других видов того же размера и/или других условий.
Мы знаем, что поведение животных довольно изменчиво и зависит от нескольких факторов окружающей среды, поэтому следует проявлять особую осторожность, чтобы избежать неравномерного освещения, стойких запахов и другого загрязнения субстрата через общую посуду. Спасибо за просмотр.
