זבובי מכה הם קבוצה מגוונת של זבובים שיכולים להיות טפילים מחייבים או פקולטטיביים, כמו גם sapro-necrophagous. מינים טפיליים מחייבים ניזונים אך ורק מרקמות חיות וגורמים למיאזיס אצל בעלי חוליות, בעוד מינים סאפרו-נקרופגיים ניזונים מחומר אורגני נרקב. טפילים פקולטטיביים יכולים להיזון הן מחומר חי והן מחומר נרקב ולחיות כטפילים או לא.
למרות ששלב הזחל הוא הבעייתי ביותר, הנקבה ממלאת תפקיד מכריע כאשר היא בוחרת היכן לבצע אוביפוזיט ולכן, במידה רבה שולטת היכן הזחלים יזונו ויתפתחו. המטרה הכוללת של השיטות המוצגות כאן היא להעריך הן את העדפת מצע המזון של הזחלים והן את בחירת אתר הביפוזיציה הנקבי בזבובי נשיפה. העדפת האכלת זחלים.
שלב ראשון, הכנת צלחות פטרי עם אגר 2% הכינו צלחות פטרי עם 2% אגר. כדי לעשות זאת, מוסיפים שישה גרם אגר בקטריולוגי ל-300 מיליליטר מים, וממיסים את התערובת במיקרוגל. לאחר מכן מחלקים את הנפח לארבע צלחות פטרי.
מכינים את מספר צלחות הפטרי עם אגר לפי מספר השכפול הרצוי. לאחר שהאגר מתמצק, נקבו ארבעה חורים באגר באמצעות פטרון החיתוך המסופק בנייר שלנו בצינור חרוטי של 50 מיליליטר בקוטר שלושה סנטימטרים, שני חורים בכל צד של צלחת הפטרי. שלב שני, הכנת מצעים.
כדי להכין את הבשר הטרי עם דם, להשתמש 12 מיליליטר של דם בקר מדולל שהוא חצי דם עם פתרון נוגדי קרישה וחצי מים מסוננים. לאחר מכן מוסיפים פתרון זה ל -200 גרם של בשר בקר טחון טרי ומערבבים אותו היטב. זכור להשתמש בגלילים ובכפות בוגרים שונים עבור כל סוג של בשר כדי למנוע זיהום אחר בין המצע.
כדי להכין את המצע הרקוב, מוסיפים 12 מיליליטר מים מסוננים ל -200 גרם בשר רקוב ומערבבים אותו בדיוק כמו שנעשה עם הבשר הטרי. לפני תחילת הניסוי משאירים את הבשר להירקב במשך חמישה ימים בטמפרטורה של 25 מעלות באינקובטור. לאחר הכנת מצע הבשר, ממלאים את החורים באגר בבשר טרי ונרקב מכל צד.
זכרו לחלק באופן אקראי את מיקום הבשר בצלחות הפטרי כפי שאנו מראים כאן. שלב שלישי, התקנה ניסיונית. בחדר בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, כוונו את כרית החימום ממש מתחת למקור אור כדי להאיר באופן שווה את בדיקת ההעדפות בהטיית התנהגות רחבה לכיוון האור או נגדו.
לאחר מכן השתמשו בקרטון סביב כרית החימום כתמיכה כדי לשמור על כולם באותה רמה. הניחו קרטון שחור על כל הסט, כרית החימום בתוספת קרטון תומך, כדי לשמור על אותה תבנית צבע מעל כל המצעים. מניחים שש צלחות פטרי עם מצע אגר ובשר מעל הקרטון השחור עם שני מצעים, אחד מכל סוג על כרית החימום והשניים האחרים מחוץ למשטח כרית החימום.
בעשותנו זאת, נאפשר לכל צלחת פטרי להיות בעלת ארבעה מצעים, טריים וקרים, רקובים וקרים, טריים וחמים, ולבסוף רקובים וחמים. תן למצע להתחמם במשך כ -10 דקות. שלב רביעי, בדיקת זחל.
בדוק את טמפרטורת המצע עם מדחום אינפרא אדום. הצד הקר יותר צריך להיות בסביבות 25 מעלות צלזיוס והחם יותר בסביבות 33 מעלות צלזיוס. לאחר ההגעה לטמפרטורה הרצויה, הניחו חמישה זחלי כוכב שלישי במרכז כל צלחת פטרי באמצעות טוויטר.
לאחר מכן מכסים את צלחת הפטרי עם המכסה, ונותנים לניסוי הבחירה לרוץ בדיוק 10 דקות. במהלך הניסוי, הזחלים יזחלו סביב צלחת הפטרי ויבחרו בין ארבע האפשרויות. אם זחלים כלשהם בורחים, קחו אותו באמצעות טוויטר, והחזירו אותו למרכז צלחת הפטרי.
לאחר 10 דקות, הוציאו את כל צלחות הפטרי הניסוייות מכרית החימום והניחו אותן על משטח אחר. לאחר מכן ספרו כמה זחלים יש בכל מצע. ראינו שזחלים צבעוניים נשארים במצע הנבחר שלהם.
העדפת אתר ביצית נקבה. שלב ראשון, התקנה ניסיונית. את המשימה ניתן לבצע על מדף רגיל שהיה מכוסה בעבר בקרטון שחור.
קרטון זה, בדיוק כמו בבדיקת זחלים, נחוץ, ולכן אין רמזים חזותיים זמינים עבור הנקבות הבוגרות. המדף גם צריך להיות מרופד באופן שווה עם פסי LED. בחדר בטמפרטורה של 25 מעלות מניחים את כרית החימום במרכז המדף.
השתמשו בקרטון סביב כרית החימום כתמיכה כדי לשמור על כולם באותה רמה. הניחו קרטון שחור מעל כל הסט, כרית חימום וקרטון תומך כדי לשמור על אותה דוגמה צבעונית מעל כל המצעים. מקמו את כריות החימום מתחת לשתי זרועות של אותו צלב בין שני צלבים שונים.
זה יאפשר ניצול טוב יותר של החלל במדף. הפעל את נורות ה-LED ואת כרית החימום לפני תחילת הניסוי. זכור תמיד לנקות את המשקפיים בצורת צלב עם 70% אתנול כדי למנוע זיהום ריח בין הבדיקות.
שלב שני, הכנת מצעים. הכינו את צלחות פטרי הפלסטיק עם חמישה גרם בשר טרי או רקוב. המצע זהה למבחן הזחל, טרי ורקוב בן חמישה ימים.
בסך הכל נדרשות ארבע מנות פטרי לכל צלב, שתיים עם בשר טרי ושתיים עם בשר רקוב. עבור בשר טרי, להוסיף מילימטר אחד של דם בקר מדולל שהוא חצי דם עם נוגדי קרישה וחצי מים. עבור בשר רקוב, להוסיף מילימטר אחד של מים מסוננים.
זכרו לערבב היטב את שני המצעים ולהשתמש בכפות שונות כדי למנוע זיהום צולב ריחות בין בשר רקוב לבשר טרי. בדוק אם האלכוהול התאדה לחלוטין על הצלבים. לאחר מכן הניחו ארבע צלחות פטרי עם בשר בקצה זרועות הצלב, אחת מכל סוג בשר על כרית החימום, והשתיים האחרות מחוץ למשטח כרית החימום.
זה יאפשר לכל אחד מהצלבים להיות בעל ארבעה מצעים, טריים וקרים, רקובים וקרים, טריים וחמים, ולבסוף רקובים וחמים. סוגרים את פתח הצלבים ונותנים למצעים להתחמם כ-10 דקות. שלב שלישי, מבחן נשי.
אספו את הנקבות בכלוב הזבובים. הם מאופיינים בבטן צהובה מוגדלת ולבנבנה. יש להפריד נקבה אחת לכל צלב בצינורות נפרדים.
בדוק את טמפרטורת המצעים באמצעות מדחום אינפרא אדום. הצד הקר יותר צריך להיות בסביבות 25 מעלות צלזיוס והחם יותר בסביבות 33 מעלות צלזיוס. מניחים צינור אחד עם נקבה תפוסה ממש בפתח המרכזי של כל צלב.
לאחר שהנקבה נכנסת לצלב, סגרו את הפתח עם המכסה. לאחר הנחת כל הנקבות בכל צלב, סגרו את החלק הפתוח של המדף עם הקרטון השחור כדי להגן מפני מקורות אור חיצוניים. תנו לניסוי להימשך ארבע שעות בדיוק.
לאחר סיום זמן זה, הסר את הנקבה מן הצלבים באמצעות צינור. לאחר מכן בדוק אם היו מיקומים אחרים על המצע. זהה את המכסה של כל צלחת פטרי עם שם המצע.
השתמשו באתנול 70% כדי לנקות את הצלבים מכל ריח מהבדיקה. שלב רביעי, ספירת ביצים. ניתן להקפיא את צלחות הפטרי לפני הספירה.
במקרה זה, להפשיר את מנות פטרי. לאחר מכן, ספרו את מספר הביצים בכל מצע באמצעות סטריאומיקרוסקופ. ניתוח נתונים וסטטיסטיקה.
שלב ראשון, חישוב מדד ההעדפות. עבור כל שכפול של המבחנים ההתנהגותיים, מדד העדפות מחושב בנפרד עבור סוג המצע ועבור הטמפרטורה. מדד ההעדפה לסוג המצע מיוצג על ידי מספר הזחלים או הביצים על מצעי בשר טרי חלקי המספר הכולל של הזחלים או הביצים על כל המצע.
מדד ההעדפה לטמפרטורה מיוצג על ידי מספר הזחלים או הביצים על מצעים חמים חלקי המספר הכולל של הזחלים או הביצים על כל הסובסטרטים. בהתחשב בשתי העדפות המדד, ערכים קרובים לאחד משקפים את ההעדפה למצעים טריים או חמים. וערכים קרובים לאפס פירושם העדפה למצעים רקובים או קרים.
שלב שני, השוואת ההעדפה הנצפית לבחירה אקראית. אנו יכולים לדמיין את מדד ההעדפה לטמפרטורה על ציר Y ואת מדד ההעדפה לבשר על ציר X. כדי לקבוע אם הזחלים או הנקבות מפגינים העדפה למצב, השווינו את התוצאות שלנו לבחירה אקראית באמצעות נתונים מדומים.
תוצאות הזחלים שלנו נדחו משמעותית מכל מערכי הנתונים המדומים מבחינת טמפרטורה והעדפת בשר. מבחינה גרפית, ניכר כי הזחלים הפגינו העדפה חזקה למצע הרקוב והקר. מצאנו כי ההעדפה הנשית לסוג בשר הייתה שונה משמעותית מבחירה אקראית בכ-30% מההשוואות.
לגבי הטמפרטורה, כ-70% מההשוואות שלנו הסתיימו בהעדפה משמעותית. שני הפרוטוקולים מציעים את האפשרות לבחון את העדפת הזחלים והנקבות עבור שני גורמים המקיימים אינטראקציה, סוג הבשר והטמפרטורה. הבדיקות פשוטות, וניתן להתאים אותן לבדיקת העדפה של מינים אחרים באותו גודל או תנאים אחרים.
אנו יודעים שהתנהגות בעלי החיים משתנה למדי ומושפעת ממספר גורמים סביבתיים, ולכן יש לנקוט בזהירות מיוחדת כדי למנוע תאורה לא שוויונית, ריחות מתמשכים וזיהום אחר של המצע באמצעות כלים משותפים. תודה על הצפייה.
