Darbe sinekleri, zorunlu veya fakültatif parazitlerin yanı sıra sapro-nekrofag olabilen çeşitli sinek gruplarıdır. Zorunlu parazitik türler yalnızca canlı dokularla beslenir ve omurgalılarda miyazise neden olurken, sapro-nekrofag türleri çürüyen organik maddelerle beslenir. Fakültatif parazitler hem canlı hem de çürüyen materyalle beslenebilir ve parazit olarak yaşayabilir veya yaşayamaz.
Larva aşaması en sorunlu olanı olmasına rağmen, dişi nerede yumurtlayacağını seçtiği için belirleyici bir rol oynar ve bu nedenle larvaların nerede besleneceğini ve gelişeceğini büyük ölçüde kontrol eder. Burada sunulan yöntemlerin genel amacı, sineklerde hem larva besin substrat tercihini hem de dişi yumurtlama yeri seçimini değerlendirmektir. Larva beslenme tercihi.
Birinci adım, Petri kaplarının agar ile hazırlanması %2 agar ile Petri kapları hazırlayın. Bunu yapmak için, 300 mililitre suya altı gram bakteriyolojik agar ekleyin ve bu karışımı bir mikrodalgada eritin. Ardından hacmi dört Petri kabına bölün.
Agarlı Petri kaplarının sayısını, arzu edilen çoğaltma sayısına göre hazırlayın. Agar katılaştıktan sonra, Petri kabının her iki tarafında iki delik olmak üzere, üç santimetre çapında 50 mililitrelik konik bir tüpte makalemizde verilen kesme petterini kullanarak agarda dört delik açın. İkinci adım, alt tabakaların hazırlanması.
Taze eti kanla hazırlamak için, antikoagülan solüsyon ve yarı süzülmüş su ile yarım kan olan 12 mililitre seyreltilmiş sığır kanı kullanın. Daha sonra bu çözeltiyi 200 gram taze sığır kıymasına ekleyin ve iyice karıştırın. Alt tabakalar arasında başka kontaminasyonu önlemek için her et türü için farklı lisansüstü silindirler ve kaşıklar kullanmayı unutmayın.
Çürük alt tabakayı hazırlamak için 200 gram çürük ete 12 mililitre süzülmüş su ekleyin ve tıpkı taze etle yapıldığı gibi karıştırın. Deney başlamadan önce, et bir inkübatörde 25 santigrat derecede beş gün çürümeye bırakılır. Et alt tabakasını hazırladıktan sonra, agardaki delikleri her iki tarafta taze ve çürümüş etle doldurun.
Burada gösterdiğimiz gibi petin Petri kaplarındaki konumunu rastgele seçmeyi unutmayın. Üçüncü adım, deney düzeneği. 25 santigrat derecedeki bir odada, ışığa karşı veya ışığa karşı geniş bir davranış önyargısında tercih testini eşit şekilde aydınlatmak için ısıtma yastığını bir ışık kaynağının hemen altına ayarlayın.
Ardından, hepsini aynı seviyede tutmak için destek olarak ısıtma yastığının etrafındaki kartonu kullanın. Tüm alt tabakaların üzerinde aynı renk desenini korumak için tüm setin, ısıtma yastığının ve destek kartonunun üzerine siyah bir karton yerleştirin. Agar ve et alt tabakalı altı Petri kabını, her biri ısıtma yastığının üzerinde, diğer ikisi ısıtma yastığı yüzeyinin dışında olmak üzere iki alt tabakaya sahip siyah kartonun üzerine yerleştirin.
Bunu yaparak, Petri kabının her birinin taze ve soğuk, çürümüş ve soğuk, taze ve sıcak ve son olarak çürümüş ve sıcak olmak üzere dört alt tabakaya sahip olmasına izin vereceğiz. Alt tabakanın yaklaşık 10 dakika ısınmasına izin verin. Dördüncü adım, larva testi.
Alt tabakanın sıcaklığını bir kızılötesi termometre ile kontrol edin. Soğuk taraf yaklaşık 25 santigrat derece ve daha sıcak taraf yaklaşık 33 santigrat derece olmalıdır. İstenilen sıcaklığa ulaştıktan sonra, bir cımbız kullanarak her Petri kabının ortasına beş adet üçüncü instar larvası yerleştirin.
Ardından Petri kabını kapakla kapatın ve seçim deneyinin tam olarak 10 dakika çalışmasına izin verin. Deney sırasında larvalar Petri kabının etrafında gezinecek ve dört seçenek arasından seçim yapacaktır. Herhangi bir larva kaçarsa, bir cımbız kullanarak alın ve Petri kabının ortasına geri yerleştirin.
10 dakika sonra, tüm deney Petri kaplarını ısıtma yastığından çıkarın ve farklı bir yüzeye yerleştirin. Sonra her substratta kaç tane larva olduğunu sayın. Renkli larvaların seçtikleri substratta kaldıklarını gözlemledik.
Kadın yumurtlama bölgesi tercihi. Birinci adım, deney düzeneği. Görev, daha önce siyah kartonlarla kaplı normal bir rafta yapılabilir.
Bu kartonlar, tıpkı bir larva tahlilinde olduğu gibi, gereklidir, bu nedenle yetişkin dişiler için görsel ipuçları mevcut değildir. Rafın ayrıca LED şeritlerle eşit şekilde kaplanması gerekir. 25 santigrat derecelik bir odada, ısıtma yastığını rafın ortasına yerleştirin.
Hepsini aynı seviyede tutmak için destek olarak ısıtma yastığının etrafındaki kartonu kullanın. Tüm setin üzerine siyah bir karton, bir ısıtma yastığı ve tüm alt tabakaların üzerinde aynı renkli deseni korumak için destek kartonu yerleştirin. Isıtma yastıklarını aynı haçın iki kolunun altına, iki farklı haç arasına yerleştirin.
Bu, raftaki alanın daha iyi kullanılmasını sağlayacaktır. Deney başlamadan önce LED ışıkları ve ısıtma yastığını açın. Testler arasında koku kontaminasyonunu önlemek için çapraz şekilli camları her zaman %70 etanol ile temizlemeyi unutmayın.
İkinci adım, alt tabakaların hazırlanması. Plastik Petri kaplarını beş gram taze veya çürük et ile hazırlayın. Substrat larva testi ile aynıdır, taze ve beş günlük çürük.
Her haç için ikisi taze etli ve ikisi çürük etli olmak üzere toplam dört Petri kabı gereklidir. Taze et için, antikoagülan ile kanın yarısı ve su yarısı olan bir milimetre seyreltilmiş sığır kanı ekleyin. Çürük et için bir milimetre süzülmüş su ekleyin.
Çürük ve taze et arasında koku çapraz kontaminasyonunu önlemek için her iki alt tabakayı da iyice karıştırmayı ve farklı kaşıklar kullanmayı unutmayın. Alkolün haçlarda tamamen buharlaşıp buharlaşmadığını kontrol edin. Ardından, haç kollarının ucuna, her bir et türünden biri ısıtma yastığının ucuna ve diğer ikisi ısıtma yastığı yüzeyinin dışına etli dört Petri kabı yerleştirin.
Bu, haçların her birinin taze ve soğuk, çürümüş ve soğuk, taze ve sıcak ve son olarak çürümüş ve sıcak olmak üzere dört alt tabakaya sahip olmasını sağlayacaktır. Haçların açıklığını kapatın ve alt tabakaların yaklaşık 10 dakika ısınmasına izin verin. Üçüncü adım, kadın testi.
Sinek kafesinde bir dişi toplayın. Genişlemiş ve beyazımsı sarı bir karına sahip olmaları ile karakterize edilirler. Ayrı tüplerde her çaprazlama için bir dişi ayırın.
Alt tabakaların sıcaklığını bir kızılötesi termometre ile kontrol edin. Soğuk taraf yaklaşık 25 santigrat derece ve daha sıcak taraf yaklaşık 33 santigrat derece olmalıdır. Her bir çaprazın orta açıklığına bir dişi tutulmuş bir tüp yerleştirin.
Dişi haça girdikten sonra, açıklığı kapakla kapatın. Tüm dişileri her bir çapraza yerleştirdikten sonra, harici ışık kaynaklarına karşı koruma sağlamak için rafın açık kısmını siyah karton ile kapatın. Denemenin tam olarak dört saat çalışmasına izin verin.
Bu süre bittikten sonra, dişi bir tüp kullanarak haçlardan çıkarın. Ardından alt tabaka üzerinde başka bir konum olup olmadığını kontrol edin. Her Petri kabının kapağını alt tabakanın adıyla tanımlayın.
Testten kaynaklanan herhangi bir kokudan haçları temizlemek için% 70 etanol kullanın. Dördüncü adım, yumurta sayımı. Petri kapları sayılmadan önce dondurulabilir.
Bu durumda, Petri kaplarını çözün. Ardından, bir stereomikroskop kullanarak her bir substrattaki yumurta sayısını sayın. Veri analizi ve istatistik.
Birinci adım, tercih indeksi hesaplaması. Davranış testlerinin her bir kopyası için, substrat tipi ve sıcaklık için ayrı ayrı bir tercih indeksi hesaplanır. Substrat tipi için tercih indeksi, taze et substratlarındaki larva veya yumurta sayısının, tüm substratlardaki toplam larva veya yumurta sayısına bölünmesiyle temsil edilir.
Sıcaklık tercih indeksi, sıcak substratlardaki larva veya yumurta sayısının, tüm substratlardaki toplam larva veya yumurta sayısına bölünmesiyle temsil edilir. Her iki indeks tercihi de göz önüne alındığında, bire yakın değerler taze veya sıcak alt tabaka tercihini yansıtır. Ve sıfıra yakın değerler, çürümüş veya soğuk alt tabakaların tercih edilmesi anlamına gelir.
İkinci adım, gözlemlenen tercihin rastgele seçimle karşılaştırılması. Sıcaklık için tercih indeksini Y ekseninde, et tercih indeksini ise X ekseninde görselleştirebiliriz. Larvaların ve/veya dişilerin bir durum için bir tercih gösterip göstermediğini belirlemek için, sonuçlarımızı simüle edilmiş verileri kullanarak rastgele bir seçimle karşılaştırdık.
Larva sonuçlarımız, sıcaklık ve et tercihi açısından simüle edilmiş tüm veri kümelerinden önemli ölçüde ertelenmiştir. Grafiksel olarak, larvaların çürümüş ve soğuk substrat için güçlü bir tercih sergilediği açıktır. Kadınların bir et türü tercihinin, karşılaştırmaların yaklaşık% 30'unda rastgele bir seçimden önemli ölçüde farklı olduğunu bulduk.
Sıcaklık için, karşılaştırmalarımızın yaklaşık% 70'i önemli bir tercihle sonuçlandı. Her iki protokol de larvaların ve dişilerin tercihini iki etkileşimli faktör, et türü ve sıcaklık için test etme imkanı sunar. Testler basittir ve aynı büyüklükteki ve/veya diğer koşullardaki diğer türlerin tercihini test etmek için uyarlanabilir.
Hayvan davranışının oldukça değişken olduğunu ve çeşitli çevresel faktörlerden etkilendiğini biliyoruz, bu nedenle eşit olmayan aydınlatma, kalıcı kokular ve ortak mutfak eşyaları yoluyla alt tabakanın diğer kontaminasyonunu önlemek için özel dikkat gösterilmelidir. İzlediğiniz için teşekkürler.
