نطاق هذا البحث هو تقييم وظيفة الصفائح الدموية في ظل الظروف الفسيولوجية. ندرس على وجه التحديد وظيفة الصفائح الدموية باستخدام أجهزة الموائع الدقيقة والأسطح البيولوجية. وباستخدام هذا النهج ، تمكنا من الإجابة على الأسئلة المتعلقة بضعف الصفائح الدموية والإنعاش المرقئ للتطبيقات في طب نقل الدم.
غالبا ما تختبر فحوصات وظائف الصفائح الدموية الحالية قدرة الصفائح الدموية على التجمع استجابة لناهض معين من اختياره. قد تشمل طرق الكشف نقل الضوء أو المعاوقة الكهربائية ، وقد تستخدم هذه المقايسات عينات العملية ، ويتم اختبارها بشكل راكد. باستخدام نهج الموائع الدقيقة هذا لاختبار وظيفة الصفائح الدموية ، نقوم بدمج ديناميكيات السوائل لإضافة أهمية فسيولوجية.
تلعب ديناميكيات السوائل دورا مهما في الآليات البيولوجية المشاركة في وظيفة الصفائح الدموية أثناء الإرقاء. في المرضى الذين يعانون من نزيف ، نحن قلقون بشكل خاص بشأن وظيفة الصفائح الدموية والتدخلات العلاجية التي قد تعزز هذه الوظيفة للحصول على نتائج أفضل. باستخدام نهج اختبار وظيفة الصفائح الدموية هذا ، نحن قادرون على تتبع مساهمات مجموعات الصفائح الدموية المختلفة في تجربة وفتح طريقة لتقييم الخيارات العلاجية للصدمات وحالات النزيف الأخرى.
للبدء ، اسكب قاعدة المطاط الصناعي المصنوعة من السيليكون في طبق الوزن. أضف عامل معالجة السيليكون بنسبة عشرة إلى واحد وحرك الخليط جيدا لضمان الربط المتبادل المناسب لسلاسل بوليمر السيليكون. ضع القالب الرئيسي في طبق بتري واسكب PDMS غير المعالج على القالب بالتساوي.
ثم ضع طبق بتري داخل مجفف مفرغ لمدة 30 دقيقة لإزالة الفقاعات من الخليط. لإنهاء معالجة PDMS ، ضع القالب في فرن على درجة حرارة 70 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة. بعد المعالجة الكاملة ل PDMS ، استخدم شفرة حلاقة أو مشرط لقطع قالب الموائع الدقيقة.
ثقب ثقوب على حواف القنوات. الآن ، ضع الشريحة الزجاجية والمصبوب الموائع الدقيقة مع الجانب المحفور لأعلى في منظف البلازما. ابدأ تشغيل مضخة التفريغ وأغلق الغرفة.
بعد ذلك ، قم بتحويل منظف البلازما إلى الإعداد العالي واترك الإعداد في المنظف لمدة 30 ثانية. بعد ذلك ، قم بإيقاف تشغيل منظف البلازما وتحرير المكنسة الكهربائية. لربط الشريحة الزجاجية والزجاجية التي تم تنظيفها بالبلازما ، اضغط برفق على الجوانب التي كانت متجهة لأعلى في منظف البلازما معا.
ضع جهاز الموائع الدقيقة في فرن أو على طبق ساخن على حرارة 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق لإنهاء عملية الربط. الآن ، قم بتغطية غرفة الموائع الدقيقة بكاشف الكولاجين الليفي للخيول من النوع الأول من خلال منفذ مخصص للمدخل المحدد. قم بتخزين الجهاز في وعاء دافئ ورطب ومغلق لمنع الكولاجين المطلي من التبخر داخل القناة.
بعد ساعة واحدة ، اشطف الجهاز باستخدام PBS في الاتجاه المعاكس للطلاء لطرد محلول الكولاجين. للبدء ، احتضان الدم الكامل المبتذل بجسم مضاد CD41 مترافق مضان ، باستخدام فلوروفور مفضل. لطخ الدم لمدة 30 دقيقة على الروك الجوزي.
بعد ذلك ، قم بتشغيل المجهر والبرامج المرتبطة به. اضبط مستوى مضخة حقنة السحب مع مرحلة المجهر واضبط إعدادات مضخة الحقنة وفقا للمتطلبات التجريبية. بعد ذلك ، ضع جهاز الموائع الدقيقة على مرحلة المجهر وقم بلصق حوافه على المسرح لمنع الحركة.
الآن ، قم بتوصيل الأنبوب الذي يبلغ قطره الداخلي على ستة عشر بوصة بموصل الكوع ، ثم بحقنة سعة 10 مليلتر بموصل بقطر داخلي واحد على ستة عشر بوصة. املأ المحقنة سعة 10 ملليلتر ب PBS معقم وقم بتوصيلها بمضخة المحقنة. ثم أدخل موصل الكوع في مخرج جهاز الموائع الدقيقة.
قم بإعداد خطوط مدخل يبلغ طولها حوالي 10 سم مع موصل الكوع في أحد طرفيه وقطع بزاوية على الطرف الآخر. الآن ، قم بتوصيل موصل كوع المدخل بمدخل الجهاز ووضع خط المدخل في أنبوب الطرد المركزي الدقيق للنفايات الموضوع على حامل بزاوية. استخدم العدسة الموضوعية 10 مرات للتركيز على حواف قناة جهاز الموائع الدقيقة.
بعد ذلك ، قم بتجهيز الخطوط باستخدام PBS. قم بدفع مضخة الحقنة يدويا لمسح القناة من أي PDMS أو حطام. تحقق بالقرب من مدخل ومخرج القناة بحثا عن أي عوائق.
الآن ، افتح إعدادات التقاط الصور المحفوظة أو قم بإنشاء إجراء جديد لالتقاط الصور لصور السلاسل الزمنية التي تم التقاطها كل ثانية إلى ثانيتين باستخدام قناة مجال ساطعة وقنوات فلورسنت تتوافق مع الأجسام المضادة CD41 في عينة الدم. احصل على عينة الدم الفيترية المفلترة واخلطها عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل قبل بدء التجربة مباشرة. ضع العينة على حامل الطرد المركزي الدقيق الزاوية.
بعد ذلك ، ضع خط المدخل في عينة الدم وابدأ في تسجيل التقاط الصورة. اسحب المحقنة ببطء لملء الحجم الميت في الأنبوب. بمجرد وصول الدم إلى القناة ، اضغط على الفور على تشغيل على مضخة الحقنة لاستئناف التدفق بالمعدل المطلق المطلوب.
قم بإجراء التجربة حتى تسد الصفائح الدموية تماما المنطقة الضيقة لجهاز الموائع الدقيقة ، أو حتى نقطة النهاية التجريبية ، والتي عادة ما تكون 10 دقائق. بمجرد اكتمال التجربة ، أوقف التقاط الصورة ، وأوقف مضخة المحقنة. أخيرا ، احفظ التقاط الصورة في التخزين المناسب.
