تظهر الكائنات الحية تنوعا هائلا في أشكالها. نحن مهتمون للغاية بالآليات الجزيئية والخلوية الكامنة وراء تكوين هذه الأشكال وتنويعها وتطورها. لفهم ذلك ، قمنا بالتحقيق في كيفية تحديد الخلايا التي يحددها القدر في الشكل النهائي للساق البالغة في ذبابة الفاكهة.
باستخدام التصوير الحي ، وجدنا سلوكا مفاجئا بشكل غير متوقع للخلايا. أثناء تكوين الشكل النهائي للساق ، شكلت الخلايا الظهارية بشكل عابر البنية الخاصة كما أطلقنا على الهيكل الشبيه بالبارثينون. يبدو أن هذا الهيكل هو سمة عامة للخلايا الظهارية لأنها تحدد شكلها النهائي للتصوير الحي على المدى الطويل أثناء مرحلة الخادرة ، من المهم إزالة الشرانق مع الحفاظ على الرطوبة.
طريقتنا ، التي تستخدم طبقا زجاجيا وقطرة ماء ، مستقرة وموثوقة وسهلة التعامل معها ، حتى للمبتدئين. توضح نتائجنا أن الخلايا تخضع لتغييرات ديناميكية غير متوقعة في الشكل أثناء عملية تكوين الشكل النهائي. لفهم آليات تكوين الشكل النهائي بدقة ، من الضروري فهم التغييرات المستمرة في شكل الخلية بدقة والتحقيق في الآليات الكامنة وراء هذه التغييرات وأهميتها في التشكل.
الأسئلة التالية التي نريد معالجتها هي كيف يتم تشكيل الهيكل الشبيه بالبارثينون بشكل عابر ، وكيف يساهم في تكوين الشكل الأدق. للبدء ، اجمع الشرانق البيضاء من السلالة المرغوبة ذبابة الفاكهة السوداء من القوارير وضعها في أطباق أو قوارير فارغة باستخدام فرشاة الرسم. احتضان الشرانق البيضاء المجمعة عند 25 درجة مئوية لمدة 14 ساعة على الأقل حتى تصل إلى المرحلة المطلوبة للمراقبة.
باستخدام فرشاة رسم مبللة بالماء المقطر ، قم بإزالة الغراء بعناية ويطير الطعام من سطح الشرانق. ثم ضع الشرانق التي تم تنظيفها على مناديل التنظيف واتركها لعدة دقائق حتى تجف. الآن قم بإرفاق قطعة من الشريط على الوجهين بشريحة زجاجية وضع الشرانق المجففة على الشريط على الوجهين بحيث يكون الجانب البطني متجها لأسفل.
باستخدام فرشاة رسم مجففة ، ادفع الجانب الظهري من الشرانق برفق لتحسين الالتصاق بالشريط على الوجهين. تحت مجهر ستيريو ، استخدم زوجا من الملقط لفتح طبقة الشرانق بعناية. أدخل طرفا واحدا من الملقط في الفراغ بين الخادرة والشرانق من حافة الفتحة المفتوحة.
ثم باستخدام الملقط ، أمسك العذررة واسحبها للخارج حتى تنفجر. ارفع الأجزاء الممزقة من الشرانق وألصقها بالشريط على الوجهين. للبدء ، قم بإعداد ذبابة الفاكهة السوداء الساق العذرية للتصوير.
اعتمادا على العدسة المستخدمة ، ضع ميكرولتر واحد من الماء المقطر أو زيت السيليكون في قاع طبق زجاجي. ثم انقع فرشاة الرسم في الماء المقطر واغرف الخادرة برفق. ضع الخادرة بحيث يكون الجانب البطني متجها لأسفل على الماء المقطر أو زيت السيليكون في الطبق.
باستخدام ماصة دقيقة ، أضف 10 ميكرولترات من الماء المقطر بالقرب من حافة الجزء الزجاجي من الطبق. باستخدام حقنة ، ضع دائرة من شحم السيليكون حول حافة الجزء الزجاجي من الطبق. ثم ضع زلة غطاء على شحم السيليكون لإغلاق الطبق.
بعد تشغيل المجهر متحد البؤر والبرنامج ، ضع الطبق السفلي الزجاجي مع الخادرة على مرحلة المجهر وقم بتصوير منطقة الاهتمام المطلوبة. شكلت الخلايا الظهارية في الرصغ النتوءات القاعدية والوصلات القاعدية ، والتي تذكرنا بالبارثينون بين 16 ساعة و 27.5 ساعة بعد تكوين الشرانقية. لوحظ انخفاض تدريجي في سمك الظهارة من 41 ساعة إلى 60 ساعة بعد تكوين العذررة ، حتى بعد أن أصبح مخطط أنسجة الساق أكثر تحديدا.
