Les organismes présentent une énorme variété de formes. Nous nous intéressons beaucoup aux mécanismes moléculaires et cellulaires qui sous-tendent la formation, la diversification et l’évolution de ces formes. Pour comprendre cela, nous avons étudié comment les cellules déterminées par le destin forment la forme finale de la patte adulte chez la drosophile.
En utilisant l’imagerie en direct, nous avons trouvé un comportement étonnamment surprenant des cellules. Au cours de la formation finale de la forme de la jambe, les cellules épithéliales ont formé transitoirement la structure spéciale que nous avons nommée la structure de type Parthénon. Cette structure semble être une caractéristique générale des cellules épithéliales car elles établissent leur forme finale Pour l’imagerie en direct à long terme pendant le stade de nymphe, il est important d’enlever le puparium tout en maintenant l’humidité.
Notre méthode, qui utilise un plat à fond de verre et une goutte d’eau, est stable, fiable et facile à manipuler, même pour les débutants. Nos résultats démontrent que les cellules subissent des changements de forme dynamiques inattendus au cours du processus de formation finale de la forme. Pour comprendre avec précision les mécanismes finaux de formation de la forme, il est essentiel de bien saisir les changements continus de la forme cellulaire et d’étudier les mécanismes à l’origine de ces changements et leur importance pour la morphogenèse.
Les prochaines questions que nous voulons aborder sont de savoir comment la structure de type Parthénon est formée de manière transitoire et comment elle contribue à la formation de formes plus fines. Pour commencer, prélevez des pupes blanches de la souche souhaitée de Drosophila melanogaster dans des flacons et placez-les dans des plats ou des flacons vides à l’aide d’un pinceau. Incuber les pupes blanches collectées à 25 degrés Celsius pendant au moins 14 heures jusqu’à ce qu’elles atteignent le stade d’observation souhaité.
À l’aide d’un pinceau imbibé d’eau distillée, retirez soigneusement la colle et la nourriture pour mouches de la surface du puparium. Placez ensuite les pupes nettoyées sur des lingettes nettoyantes et laissez-les sécher pendant plusieurs minutes. Fixez maintenant un morceau de ruban adhésif double face à une lame de verre et placez les pupes séchées sur le ruban adhésif double face avec le côté ventral vers le bas.
À l’aide d’un pinceau séché, poussez doucement la face dorsale des pupes pour améliorer l’adhérence au ruban adhésif double face. À l’aide d’un microscope stéréoscopique, à l’aide d’une pince, ouvrez soigneusement l’opercule du puparium. Insérez l’une des pointes de la pince dans l’espace entre la chrysalide et le puparium à partir du bord de l’opercule ouvert.
Ensuite, à l’aide de la pince, saisissez le puparium et tirez-le vers l’extérieur jusqu’à ce qu’il s’ouvre. Soulevez les fragments déchirés du puparium et collez-les sur le ruban adhésif double face. Pour commencer, préparez la patte nymphale de Drosophila melanogaster pour l’imagerie.
Selon l’objectif utilisé, appliquez un microlitre d’eau distillée ou d’huile de silicone au fond d’un plat à fond de verre. Ensuite, trempez un pinceau dans de l’eau distillée et ramassez doucement la nymphe. Placez la chrysalide avec le côté ventral vers le bas sur l’eau distillée ou l’huile de silicone dans le plat.
À l’aide d’une micropipette, ajoutez 10 microlitres d’eau distillée près du bord de la partie en verre du plat. À l’aide d’une seringue, appliquez un cercle de graisse silicone sur le pourtour de la partie en verre du plat. Placez ensuite une lamelle sur la graisse silicone pour sceller le plat.
Après avoir allumé le microscope confocal et le logiciel, placez la parabole à fond de verre avec la chrysalide sur la platine du microscope et imagez la zone d’intérêt souhaitée. Les cellules épithéliales du tarse ont formé des projections basales apicobasales et des connexions basales, qui rappellent le Parthénon entre 16 heures et 27,5 heures après la formation du puparium. Une réduction progressive de l’épaisseur épithéliale a été observée de 41 à 60 heures après la formation du puparium, même après que le contour du tissu de la jambe soit devenu plus défini.
