需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。
Method Article
我们描述了一个快速和有效的方法纯化的酵母线粒体酿酒酵母。这种方法使高产纯线粒体隔离,其他细胞器的污染基本上是免费的,并保留其净化后的结构和功能完整性。
线粒体是ATP生产的主要场所,在真核细胞非光合细胞的有氧代谢
材料和方法
酵母菌株和生长条件。
丰富YEPD培养基中生长的野生型菌株BY4742(MATαhis3Δ1leu2Δ0lys2Δ0ura3Δ0)(1%酵母提取物,2%蛋白胨,2%葡萄糖) 。细胞培养在30 ° C旋转摇晃锥形瓶在200 RPM“瓶体积/中等音量”5:1的比例。
原油线粒体分数隔离
**所有后续步骤,应在4℃或冰面上进行。原生质球悬浮应轻轻削减提示使用移液器,以避免破坏细胞器处理**
**虽然这种悬挂在线粒体丰富,还含有其它细胞器,如内质网(微粒),高尔基体和空泡。为了得到纯净的线粒体,这种原油的线粒体分数可以受到进一步的分馏,如下所述**
线粒体的没有污染的其他细胞器的分离纯化
试剂
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
这种方法使高产的隔离从酵母细胞中的纯线粒体。通过这种方法纯化的线粒体其他细胞器的污染基本上是免费的,其净化后保留其结构和功能的完整性。所述的方法产生的线粒体适用于无细胞重组基本线粒体过程。这些高度纯净的线粒体也可以用于线粒体结构和功能,线粒体蛋白质组和lipidome,和线粒体DNA的分析。
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
The authors have nothing to disclose.
这项工作得到了CIHR和加拿大NSERC资助。 VIT是一个新的CIHR调查和Concordia大学基因组学研究主席,细胞生物学和老化。
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
请求许可使用此 JoVE 文章的文本或图形
请求许可This article has been published
Video Coming Soon
版权所属 © 2025 MyJoVE 公司版权所有,本公司不涉及任何医疗业务和医疗服务。