鼻腔博来霉素雾化诱导的肺纤维化小鼠模型

摘要

已经使用博来霉素建立了各种肺纤维化动物模型，以阐明肺纤维化的发病机制并寻找新的药物靶点。然而，大多数针对肺组织的肺纤维化模型给药不均匀。在这里，我们提出了一个由鼻腔博来霉素雾化诱导的均匀肺纤维化模型。

摘要

肺纤维化是由各种原因引起的几种人类肺部疾病的特征。鉴于治疗选择相当有限，小鼠模型仍然是开发新的抗纤维化策略的重要工具。在这项研究中，博来霉素 （BLM） 的肺内给药是通过鼻腔雾化进行的，以创建与临床疾病特征非常相似的肺纤维化小鼠模型。C57BL/6 小鼠连续 3 天经鼻雾化接受 BLM （7 U/mL，30 分钟/天），并在第 9 天、第 16 天或第 23 天处死以观察肺组织的炎症和纤维化变化。鼻雾化 BLM 直接靶向肺部，导致广泛而均匀的肺部炎症和纤维化。因此，我们成功生成了典型人肺纤维化的实验小鼠模型。这种方法可以很容易地用于研究各种鼻腔气雾剂给药对肺部病理生理学的影响，并验证新的抗炎和抗纤维化治疗方法。

引言

肺纤维化是一种进行性疾病过程，其中细胞外基质成分（主要是 I 型胶原蛋白）在肺间质中过度沉积，导致肺功能受损¹。肺纤维化的病理生理学很复杂，目前的治疗选择相当有限。小鼠模型仍然是研究导致疾病出现和进展的致病机制以及药物开发新策略的重要工具。

肺纤维化的各种动物模型依赖于 BLM 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 的气管内滴注。然而，BLM 在肺部引起的纤维化变化的分布并....

研究方案

中日友好医院（中国北京）动物研究委员会批准了本研究中涉及小鼠的所有程序 （NO.190108）。将小鼠饲养在中日友好临床医学研究所无菌动物房中，室温20-25°C，相对湿度40%-70%，动物光照强度15-20LX，明暗交替12 h/12 h。动物可以免费获得食物和水。

1. 老鼠

1. 确保所有动物在雾化前适应饲养设施 7 天。
2. 使用 8-10 周龄的雄性 C57BL/6 小鼠进行雾化。

2. 鼻腔博来霉素雾化

1. 博来霉素制备
   注意：BLM 是一种化学毒物，可杀死肿瘤，但也可能损害正常细胞和正常组织。
   1. 在洁净工作台上制备 BLM 溶液。
      1. 为了获得工作浓度 （7 U/mL），将 15 U BLM 盐酸盐重悬于 2.14 mL 生理盐水中。小心混合重悬的 BLM，直至完全溶解。
   2. 将工作溶液储存在 4 °C 或冰上，并在 1 天内使用。雾化前，将 BLM 溶液加热至室温。
2. 麻醉
   1. 将 0.1 g 戊巴比妥钠溶解在 10 mL 生理盐水中，为麻醉做准备。将工作麻醉液存放在 4 °C 的黑暗处，并....

结果

雾化 BLM 诱导肺损伤，对照动物用相同体积的生理盐水雾化。小鼠雾化每天一次，持续 3 天，每天 30 分钟，使用 7 U/mL 的 BLM 浓度。在 BLM 给药后第 9 天、第 16 天和第 23 天处死小鼠进行 H&E 染色（图 2B）。与对照组小鼠相比，在接受 BLM 的小鼠的肺部观察到弥漫性肺病灶伴正常肺泡结构丧失、鼻中隔增厚、肺泡扩大以及炎症细胞浸润到间质和细支气管周围区域?.......

讨论

气管内注射博来霉素导致双肺急性炎症和纤维化反应，可以被认为是建立人间质性肺病实验小鼠模型的有效方法。气管内给药是最常用的给药途径 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
bleomycin	Bioway/Nippon Kayaku Co Ltd	DP721	Fibrosis model drugs
0.9% saline for injection	Baxter Healthcare(Tianjin)Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
1 mL syringe	BD	300481	Anesthetize animals
10% neutral formalin buffer	TechaLab Biotech Company		Fix lung tissue
15 mL centrifuge tube	corning	430790	Prepare for anesthesia
20 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
4 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
Adobe illustrator cc2020	Adobe		Process images
blue back liquid	Beijing Chemical Works		tissue staining
clean bench	Suzhou Sujie Purifying Equipment Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
differentiation fluid	Beijing Chemical Works		tissue staining
Electronic balance	METTLER TOLEDO	AA-160	Prepare for anesthesia
eosin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
Heating pad	HIDOM		Mice incubation
hematoxylin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
phosphate buffered saline (PBS) buffer	Hyclone	SH30256.01	Clean lung tissue
Photoshop drawing software	Adobe		Process images
SCIREQ INEXPOSE	EMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.		Atomizing device
Upright fluorescence microscope	Olympus	BX53	Observe the slice