鼻ブレオマイシン噴霧により誘発される肺線維症のマウスモデル

要約

ブレオマイシンを用いた肺線維症の様々な動物モデルが確立されており、肺線維症の病態解明や新たな創薬標的の探索が進められています。しかし、肺組織を標的とする肺線維症モデルの多くは、薬剤の投与にばらつきがあります。ここでは、鼻ブレオマイシン噴霧によって誘発される均一な肺線維症のモデルを提案します。

要約

肺線維症は、さまざまな原因から生じるいくつかのヒト肺疾患に特徴的です。治療の選択肢がかなり限られていることを考えると、マウスモデルは新しい抗線維化戦略を開発するための重要なツールであり続けています。この研究では、ブレオマイシン (BLM) の肺内投与を鼻噴霧によって行い、臨床疾患の特性を厳密に模倣した肺線維症のマウス モデルを作成します。C57BL/6マウスは、鼻噴霧によりBLM(7 U/mL、30分/日)を3日間連続して投与し、9日目、16日目、または23日目に犠牲にして肺組織の炎症性および線維性変化を観察しました。経鼻エアロゾル化BLMは直接肺を標的とし、広範で均一な肺の炎症と線維化をもたらしました。これにより、典型的なヒト肺線維症の実験用マウスモデルを作成することに成功しました。この方法は、さまざまな鼻エアロゾルの投与が肺の病態生理学に及ぼす影響を研究し、新しい抗炎症および抗線維化治療を検証するために簡単に使用できます。

概要

肺線維症は、細胞外マトリックス成分(主にI型コラーゲン)が肺の間質に過剰に沈着すると肺機能障害を引き起こす進行性の疾患プロセスです¹。肺線維症の病態生理学は複雑であり、治療の選択肢は現在非常に限られています。マウスモデルは、疾患の発生と進行に寄与する病原性メカニズム、および医薬品開発の新しい戦略を研究するための重要なツールであり続けています。

肺線維症のさまざまな動物モデルは、BLM 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 の気管内注入に依存しています。^<....

プロトコル

中日友好病院(中国・北京)動物研究委員会は、本研究の一環として実施されたマウスを用いたすべての処置を承認しました(NO.190108)。マウスは、室温20〜25°C、相対湿度40〜70%、動物の光強度15〜20LX、明暗を交互に12時間/12時間、中日友好臨床医学研究所の無菌動物室に保管しました。動物は食べ物と水を自由に利用できました。

1.マウス

1. 噴霧する前に、すべての動物が7日間住宅施設に順応していることを確認してください。
2. 噴霧には、8〜10週齢の雄のC57BL/6マウスを使用します。

2.鼻ブレオマイシン噴霧

1. ブレオマイシン製剤
   注意:BLMは化学毒であり、腫瘍を殺しますが、正常な細胞や正常な組織にも損傷を与える可能性があります。
   1. BLM溶液はクリーンベンチで調製します。
      1. 使用濃度(7 U/mL)を得るには、15 Uの塩酸BLMを2.14 mLの生理食塩水に再懸濁します。再懸濁したBLMを完全に溶解するまで慎重に混合します。
   2. 作業溶液は4°Cまたは氷上で保存し、1日以内に使用してください。噴霧する前に、BLM溶液を室温に戻します....

結果

肺損傷は噴霧BLMによって誘発され、対照動物は同量の生理食塩水で噴霧されました。マウスを1日1回、1日30分間、BLM濃度7 U/mLを用いて噴霧した。マウスは、BLM投与後9日目、16日目、および23日目にH&E染色のために犠牲にしました(図2B)。正常な肺胞構造の喪失、中隔肥厚、肺胞の肥大、炎症細胞の間質および気管支周囲領域への浸潤の増加を伴うびまん性?.......

ディスカッション

ブレオマイシンの気管内注射は、両方の肺に急性炎症反応と線維化反応をもたらし、ヒト間質性肺疾患の実験的マウスモデルを確立するための効果的なアプローチと見なすことができます。気管内投与は、最も一般的に使用される投与経路^です2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12。

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
bleomycin	Bioway/Nippon Kayaku Co Ltd	DP721	Fibrosis model drugs
0.9% saline for injection	Baxter Healthcare(Tianjin)Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
1 mL syringe	BD	300481	Anesthetize animals
10% neutral formalin buffer	TechaLab Biotech Company		Fix lung tissue
15 mL centrifuge tube	corning	430790	Prepare for anesthesia
20 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
4 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
Adobe illustrator cc2020	Adobe		Process images
blue back liquid	Beijing Chemical Works		tissue staining
clean bench	Suzhou Sujie Purifying Equipment Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
differentiation fluid	Beijing Chemical Works		tissue staining
Electronic balance	METTLER TOLEDO	AA-160	Prepare for anesthesia
eosin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
Heating pad	HIDOM		Mice incubation
hematoxylin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
phosphate buffered saline (PBS) buffer	Hyclone	SH30256.01	Clean lung tissue
Photoshop drawing software	Adobe		Process images
SCIREQ INEXPOSE	EMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.		Atomizing device
Upright fluorescence microscope	Olympus	BX53	Observe the slice