斑马鱼癫痫模型中的行为和生理分析

该协议为评估WC5基因的撞击效果提供了一种快速方法，WC5基因是焦点癫痫的最常见病因。这项技术的主要优点是，我们可以用它来评估癫痫，就像表型在不同的发展阶段使用行为和生理特征一样。在微注射的前一天，设置斑马鱼交配池。

在注射的早晨，取出分隔器，使产卵。使用细筛将卵子转移到100毫米的培养皿中，里面装满了胚胎水。使用塑料巴斯德管道，挑选60至80个鸡蛋，并将鸡蛋排列在硅胶涂层的培养皿中进行注射。

我们移动了大部分的水， 留下足够的钱把鸡蛋盖到一半。将玻璃针垂直放入注射液管中。允许彩色溶液在几分钟内通过毛细管作用填充管子。

当针尖可见注射液时，将针头安装到微型喷油器的注射手柄上，然后打开空气压缩机。调整压力设置以生成两纳米注射体积。并将鸡蛋置于解剖双目显微镜下，放大四倍。

将针尖插入单阶段胚胎的胆汁和蛋黄中，将溶液直接注射到每个细胞内。然后将注射的胚胎转移到标有100毫米的培养皿胚胎水中，并将盘子放在28摄氏度的孵化器中。施肥后28小时，在试盘底部放置一个塑料1.2乘1.2毫米网格。

使用塑料巴斯德移液器将10至12个胚胎放在塑料网状物上。在盘子中装满足够的胚胎水，使胚胎保持浸入水中，但不会漂浮，在必要时用塑料尖端小心地将胚胎移入网格上的位置。然后，使用连接到解剖显微镜的摄像机，记录自发的盘绕活动 10 到 20 分钟。

要分析整个自发运动，请使用 Zebra 实验室系统中的活动定量模块上传录制的视频，并酌情设计每个胚胎周围的跟踪竞技场。将冻结和爆裂阈值分别设置为 10 和 50。当自动视频分析量化每个定义的竞技场内的总活动时。

然后使用适当的数据分析软件将数据集恢复为电子表格进行分析。受精后46小时，使用细钳将胚胎脱钩，并用胚胎水填充130毫米的试验盘。休息前至少15分钟，在28摄氏度的孵化器中加热试盘。

要执行触摸唤起逃生响应测试，请使用塑料巴斯德移液器将胚胎放在测试盘的中心，放在摄像机下。使用每秒 30 帧的采集速率开始录制。使用精细的塑料尖端，用轻弹运动稍微触摸胚胎的尾部。

停止录音，当幼虫已经终止其运动。然后，将胚胎转移到充满新鲜胚胎水的新保鲜盘中，并重复每个实验条件所需的尽可能多的胚胎测试。要准备斑马鱼进行电生理分析，将受精后的一、四至六天放入玻璃底培养皿中。

去除任何多余的，额外的水手介质，以确保鱼将尽可能接近菜的底部。使用塑料巴氏杆移液器添加足够的温暖液体农业覆盖幼虫。当农用硬化物时，使用细钳将鱼腹侧向下定向在菜的中心。

然后加入两毫升的录音溶液，其中含有10微摩尔溴化物到盘子中，以阻止神经肌肉传播。接下来，用记录溶液填充微吐机，并在电压夹配置中使用贴片夹放大器，测量浴缸中的电极电阻，以确认其正确值。使用 20 倍目标，将幼虫的头部放置在中央视野中，并降低微管以达到光学结肠内的记录位置。

将贴片夹放大器切换到当前夹具配置，并将保持电流固定为零毫安。使用一千赫的低通滤波器和一千赫的采集率以及 10 倍的数字增益，记录鱼的自发活动 60 分钟，以确定基线活动水平。在基线记录结束时，在143微升每升五角星溶液的微升下洗澡，最终浓度为每升20毫摩尔。

用五角形溶液记录动物的神经元活动，再记录120分钟。在记录的基线期间，4至6天后受精癫痫模型斑马鱼表现出较高的自发事件发生，而不匹配控制鱼显示很少的波动。在五角形拉佐尔应用后，不匹配的控制和癫痫模型斑马鱼表现出越来越多的深极化事件。

在五角星应用后的第一个期间，在不匹配控制和击倒动物时，观察到每分钟 0.8 个事件的速率，而大多数事件的振幅都很高。在后一个响应期间。去极化事件的速度增加到每分钟一个事件左右。

并且大多数事件的振幅都很低。在执行击倒时，使用剂量响应曲线确定正确的莫福利诺斯剂量非常重要，并执行控制以避免非特定毒性。这一推动使一些下游研究，包括测试遗传或化学修饰剂的影响。

和斑马鱼的行为和神经活动，以了解DC五突变的发展影响。