自动造影是一种强大而简单的技术，用于研究使用特定放射性基因在组织中蛋白质结合位点分布。它也是免疫基础化学的合适替代品。该技术通过比传统胶片曝光更快的数字图像，以空间分辨率可视化蛋白质表达。
它也可用于蛋白质靶点的药理分析。该方法涉及安装在玻璃上的小鼠组织，但可以扩展到其他物种，甚至扩展到在盖玻片上生长的细胞。演示程序将由纳内格里姆-克雷，一个博士生在我的实验室。
首先，将组织淹没在粉状干冰中，以捕捉冻结。将冷冻组织直接转移到温度设置为零下 20 摄氏度的低温恒温器。让组织在低温恒温器中适应零下20摄氏度20分钟。
然后用低温恒温器外的嵌入介质覆盖组织支架，并快速将冷冻组织标本放在所需方向，而嵌入介质仍然是液体。将组织支架转回低温恒温器，将嵌入介质暴露在零下 10 摄氏度以下的温度下进行硬化。将组织支架放置到低温恒温器的微原子中。
调整组织的方向以避免倾斜部分。在所需厚度部分的立体税图集的指导下切割组织，如有必要，用小刷子展开剖面。将截面安装到显微镜幻灯片上。
然后按顺序从感兴趣的区域收集部分，以进行所需的技术重复。在进一步处理之前，让幻灯片上的部分风干一小时。在经过认证的放射性实验室中，使用铅笔将幻灯片与实验条件标记。
水平将幻灯片放在塑料托盘中。小心地将调整到有关目标的 SA 缓冲区的适当卷应用于幻灯片上安装的部分。确保每个部分都完全覆盖。
为确定非特异性结合，用相关浓度的未标记化合物补充SA缓冲液。然后用盖子盖住托盘，避免蒸发。在设定为 20 rpm 的板摇床上，在相关温度下预孵育 30 分钟。
接下来，从每张幻灯片中倒出预孵化液，然后将幻灯片重新转移到塑料托盘中。立即用 SA 缓冲液的相关浓度完全覆盖各部分。为确定非特异性结合，补充放射性利甘溶液与相关浓度的未标记化合物。
用盖子盖住托盘，并在所需条件下孵育，在 20 rpm 时持续轻轻摇晃。在此之后，倒掉孵化溶液，将幻灯片转移到显微镜幻灯片架中。立即清洗幻灯片。
对于 GHB 协议，用冰冷 SA 缓冲液洗两次 20 秒，然后通过将滑动架浸入装满冰冷蒸馏水的托盘中冲洗两次。将滑梯垂直放置在机架中，风干至少一小时。然后将幻灯片转移到含有甲状甲醛的固定器中，在室温下进行隔夜固定。
第二天，在室温下将幻灯片转移到含有硅胶的干燥器盒中。将幻灯片放在干燥器盒中三小时，以消除水分。首先，将部分放入辐射屏蔽成像板盒中，组织朝上。
在每个盒式磁带中包括放射性微尺度，以便随后对放射性结合进行定量。在使用前，立即将钛敏感磷成像板加载到荧光成像机中，然后根据制造商的指示将其暴露在可见光下。然后从荧光成像机上取下成像板，并立即将其放在盒式磁带的截面上。
确保盒式磁带完全关闭。将各部分暴露在荧光成像板上，在室温下优化曝光时间，同时屏蔽光线。曝光后，小心地在黑暗中打开盒式磁带，并立即将成像板转移到荧光成像仪的暗盒中。
以尽可能高的分辨率扫描板以获得数字图像。首先，打开适当的图像分析程序。通过选择菜单项区域确定，确定每个校准标准的相对光学密度。
选择用于区域创建的工具，并用它来为放射性微尺度的每个点选择大小相等的区域。单击菜单项标签下的数字，为每个选定区域分配一个数字。单击"文件导出"，然后单击 2D 区域报告，以导出校准标准每个点的 OD 值。
在专有成像软件中，使用区域创建工具选择每个部分中感兴趣的区域并测量其 OD，以开始执行自动放射图的量化。通过为感兴趣区域创建模板，选择每个部分中的同一区域，并复制并调整其以适应每个自动放射图中大脑解剖学的细微变化。之后，单击"文件导出 2D 区域报告"将所选区域的 ROD 值和大小导出到电子表格中。
确定文本协议中概述的无线电绑定。在这项研究中，高亲和力GHB结合位点的解剖分布与小鼠大脑中的放射性标记GHB模拟放射性 HOCPCA进行可视化，该分布被切成冠状、下垂和水平部分。在海马和皮层中可以看到高水平的结合，而在线状体中可以看到较低的结合水平，在小脑中未检测到结合。
如这里所示，解剖结构可以使用不同的平面进行可视化，解剖完整性可能由紫红色染色支持。老鼠、老鼠和猪的代表性自动放射图说明了哺乳动物大脑中高亲和力GHB结合位点的进化保护。在所有三个物种中检测到放射性 HOCPCA 结合位点，从而比较它们之间的大脑解剖量。
高亲和力GHB绑定站点使用GHB无线电基安，这些辐射点显示绑定站点的不同亲和力，但具有可比性的特定活动。放射性 HOCPCA 具有高灵敏度和出色的信噪比。由于放射性NCS-382的灵敏度较低，必须使用较高的放射性利甘浓度才能获得类似的结合水平。
放射性 GHB 达到可比的结合水平，甚至更高的放射性利格和浓度也是必要的。然而，较高的放射性和浓度也会增加非特异性结合水平，从而降低信噪比。优化测定条件（如放射性浓度、洗涤和曝光时间）非常重要，以便获得最佳的信号与噪声比，并且记住之前擦除板也很重要。
该过程可以扩展到体内条件，以获得关于活动物的化合物结合的想法，这可能对发现项目有用。记得在经过认证的全放射性物质实验室工作，在处理放射性或甲状甲醛时穿穿防护服。
