寨卡病毒和埃博拉病毒等最近流行病的上升突出表明，需要在全球范围采取更加协调和灵活的应对措施。为此，我们设计了一个创新、可扩展、模态实验室单元，用于全球资源有限的地区。在这里，我们展示我们的内部模式，可扩展，移动航运集装箱实验室。
在下面的论文中，我们介绍了我们的BSL-2和BSL-3呼吸道流感病毒诊断方法。由 RCT-PCR 快速诊断流感病毒。在准备进入已安装的实验室单元之前，请注意，必须说明所有 BSL-2 安全要求。
这包括用适当的个人防护设备穿衣、洗手、戴手套以及去污染您计划使用的任何工作空间。请注意，如果您使用漂白剂来净化您的工作区和用品，您还必须使用 70% 乙醇来清洁暴露于漂白剂的所有区域，因为漂白剂可以与工作区中的其他化学物质混合，以产生有毒烟雾。将所有漂白剂产品放入自己指定的垃圾箱。
当样本棉签从患者身上取时，它们从现场或诊所运送到实验室设施，并通过直通窗口传递给实验室技术人员。无法从两侧打开此窗口。在 BSL-2 直通窗口中，含有样品的管子的外部表面必须用漂白剂完全消毒，并单独坐两分钟。
打开直通窗口并收集要注册的样品。擦拭任何残留漂白剂的样品，然后用漂白剂擦拭直通窗口的内部，然后用70%乙醇溶液擦拭。将条形码添加到每个样品管中，并为您的等分管添加四个空管。
将样品移动到通风罩。扫描每个管上的条形码，并确保基于平板电脑的系统或笔记本电脑屏幕上显示正确的样品标识信息。完成注册过程。
样品等分。一旦试管被标记，使用经过认证和除污染的II类生物安全柜来采集样品。服用等分物时，一定要对每个样品使用新鲜的无菌或一次性移液器，并丢弃在生物危害废物容器中，以避免交叉污染。
确保每个管子都紧紧密封和关闭。每个样品利用一个等分，立即提取。将任何其他等分放在冰柜中，供将来使用。
在移动到工作站之前，使用漂白剂清洁所有工作空间表面和设备，然后使用 70% 乙醇溶液。条形码 PCR 样品一旦得到等码，即可将它们移动到指定用于提取的工作站。为解解步骤准备缓冲性AVL载体RNA混合物。
样品和解液缓冲液主混合物应保持在室温下。标记 1.5 毫升离心管。将移液器尖端设置为 560 微升。
应用干净的移液器尖端。向每个管添加一个解液缓冲液。丢弃废物容器中的尖端。
接下来，采取您的 PCR 等分样本。将其放入为等分液一指定的准备的解液缓冲管中，然后对任何其他样品重复。丢弃旧的移液器尖端，并应用干净的移液器尖端。
应用干净的移液器尖端。向控制管添加 140 微升缓冲液。牢固地合上每个管子。
脉冲涡流15秒。对任何其他等同或样品重复。微离离每个样品五秒钟。
在室温下孵育10分钟。10 分钟后，将管子短暂离车，从每个管盖内侧取出任何掉落液。加入560微升乙醇的样品之一。
更改移液器提示。对任何剩余或附加样本重复。牢固地合上每个样品管。
每个样品的脉冲涡流15秒。微离离样品五秒钟。获得干净的两毫升收集管。
添加旋转列。标记它们以匹配您的样品。传输样品的 630 微升以相应地匹配柱。
固定你的帽子。移动到离心机。将样品均匀地分配到离心机中。
在 6000 g 的离心机一分钟，以去除解液缓冲液。返回到工作站。更换收集管。
添加剩余的解解缓冲液并重复离心步骤。丢弃原始等分样品管，之后，释放洗涤液，用缓冲器 AW1 清洗旋转柱。对每个样品或任何其他样品重复此过程。
将每个样品的盖固定，并在六克时离心。在 20 g 的 20 g 下重复使用第二个洗涤缓冲器 AW2。最后，将柱子放入干净的 1.5 毫升管中。
打开柱子，加入60微升缓冲液AVE.在室温下孵育1分钟，在6克下离心1分钟。该示例现已准备好进行 PCR 分析。
在BSL-3条件下，实验协议将保持不变，但安全措施将超越任何其他先例。在进入 BSL-3 实验室之前，请通过透明窗口查看，以确保在手套箱单元中已建立了负压。很明显，当墙上的球可见时，已经建立了负压。
一旦建立了负压，打开车门并进入装置。立即洗手，然后继续使用 PPE 检查表。继续按以下顺序穿上 PPE：下手套、长袍、鞋套、面罩、面罩、第二副手套。
打开机器，让手套箱中的压力稳定下来。使用漂白剂喷雾溶液对您计划在手套箱内外使用的所有区域和用品进行净化。将任何漂白剂废物放入仅漂白剂容器中。
使用 70%乙醇溶液在已使用漂白剂的任何区域进行清洁。通过直通窗口传输样品。样品应用漂白剂溶液喷洒，并在通过中单独留用至少一分钟，然后接收在 BSL-3 单元内。
接下来，在 BSL-3 单元内接收样品，并彻底清洁，然后再执行注册和标记步骤。一旦样品被注册并标记管子，通过气闸托盘将样品放入手套箱中。请勿同时打开两扇门。
为了安全防范措施，请用两个不同的步骤打开和关闭每扇门。样品安全移至手套箱内部后，请按照前面描述的步骤在手套箱中创建样品等同。一旦样品被等分，样品将移入密封容器中。
在手套箱内喷洒漂白剂溶液，以净化管材和所有其他表面。等待五分钟，然后应用70%乙醇溶液清洗漂白剂。彻底净化后，仅将解压步骤移回手套箱所需的 PCR 分析样本。
在手套箱中，只执行提取程序的解解步骤。一旦细胞被融化，请紧密密封每个样品的盖，并把它们放入加压气闸通道。再次用漂白剂对手套箱进行净化，然后用70%乙醇溶液进行净化。
将样品移出手套箱，然后将其传输到工作站，执行提取过程的剩余步骤。提取后，将样品传输到通过窗口进行 PCR 分析。样品取出并转移后，在手套箱外清除实验室工作区的污染。
在卸下 PPE 之前，请等待设备中的空气循环安全达到适当数量的过滤周期，然后再开始移除 PPE。将所有 PPE 取出并放入 PPE 废物容器后，请立即在实验室水槽中用肥皂和水洗手，然后离开设备。PCR 扩增和检测。
从传递窗口取出提取的RNA样品。在 1.5 毫升管中准备主混合，每个目标检测的组件包括：水、底注和探针、攻击混合物和 2X 缓冲液。漩涡和旋转您的主混合，之后，等分混合到每个条带管。
准备好主混合后，在建议温度下将 PCR 套件返回存储。使用每个条带管之间的单独尖端将样品添加到每个条带管中。以 1，500 rpm 旋转样品一分钟，之后样品即可加载到实时 PCR 装置上。
将样品加载到 PCR 仪器上后，完成一次运行大约需要 90 分钟。实时 PCR 检测是一种用于强健检测病毒的敏感方法。这可以在标记为：PCR 分析结果的表中看到。
在收集结果并离开实验室之前，请取出 PPE 并充分清除每个工作站，为下一次诊断测试做准备。代表性结果。实验室工作流程在强调个人保护的图表中得到体现。
通过RT-PCR分析完成流感快速诊断检测。该过程由四个主要步骤组成，为协议的每个阶段分配了单独的工作区。该项目的目标是验证一种新型的模块化快速部署实验室设施，我们成功地做到了这一点，并为此为在流行病和疫情期间在低资源环境中工作的实验室人员制定培训计划。
