עלייה במגיפות האחרונות, כמו זיקה ונגיף האבולה, הדגישה את הצורך בתגובה מתואמת ונקיזה יותר בקנה מידה עולמי. כדי להשיג זאת עיצבנו יחידת מעבדה חדשנית, מדרגית, תוך מודאלית, שתשמש באזורים מוגבלי משאבים ברחבי העולם במהלך התפרצויות כאלה. כאן אנו מציגים את מעבדות המכולות התוך-מודאליות, הניתנות להרחבה וניידות שלנו.
ובנייר הבא, אנו מציגים את גישת BSL-2 ו- BSL-3 שלנו לאבחון וירוס שפעת הנשימה. אבחון וירוס שפעת מהירה על ידי RCT-PCR. לפני ההכנה להיכנס ליחידת המעבדה המותקנת, שים לב שיש לקחת בחשבון את כל דרישות הבטיחות של BSL-2.
זה כולל הלבשה עם ציוד מגן אישי מתאים, שטיפת ידיים, לבישת כפפות, וניקה כל סביבות עבודה שאתה מתכנן להשתמש. שים לב, אם אתה משתמש באקונומיקה כדי לטהר את סביבת העבודה ואת החומרים המזינים שלך, עליך גם להשתמש 70%אתנול כדי לנקות את כל האזורים חשופים אקונומיקה, כמו אקונומיקה יכול לערבב עם כימיקלים אחרים בסביבת העבודה כדי ליצור אדים רעילים. השלך את כל מוצרי האקונומיקה לפח האשפה הייעודי שלהם.
כאשר ספוגיות מדגם נלקחות מחולים, הן מועברות למתקן המעבדה מהשטח או מהמרפאה ומועברות לטכנאי המעבדה דרך חלון המעבר. אין אפשרות לפתוח חלון זה משני הצדדים. בחלון המעבר BSL-2, יש לחטא לחלוטין את המשטח החיצוני של הצינורות המכילים דגימות באקונומיקה ולהותר לבד לשבת במשך שתי דקות.
פתח את חלון המעבר ואסוף את הדגימות לרישום. לנגב את כל הדגימות שיש להם שרידים של אקונומיקה, ולנגב את הפנים של החלון עובר עם אקונומיקה, ואחריו 70% פתרון אתנול. הוסף ברקודים לכל צינור לדוגמה, וארבעת הצינורות הריקים שלך המיועדים לאלקוטים.
העבר את הדגימות שלך למכסה המנוע. סרוק את הברקוד בכל צינור וודא שמידע הזיהוי המדגם המתאים מופיע במערכת מבוססת הטאבלט או במסך המחשב הנישא. השלם את תהליך ההרשמה.
אלקוט לדוגמה. לאחר שנבדקים תויגו, השתמשו בארונות ביו-בטיחות מוסמכים ומנוקטנים מסוג II כדי לקחת אליקוטים של דגימות. כאשר לוקחים aliquots הקפד להשתמש פיפטים סטריליים טריים או חד פעמיים עבור כל מדגם ולהשליך אותם לתוך מיכלי פסולת biohazardous על מנת למנוע זיהום צולב.
ודא שכל צינור אטום וסגור היטב. השתמש aliquot אחד לכל דגימה לחילוץ מיידי. לאחסן כל aliquots אחרים במקפיא לשימוש עתידי.
לפני המעבר לתחנת העבודה, נקה את כל משטחי סביבת העבודה והציוד באמצעות אקונומיקה ואחריה פתרון אתנול של 70%. לאחר דגימות PCR ברקוד שלך כבר aliquoted להעביר אותם לתחנת עבודה המיועדת לחילוץ. הכינו את תערובת ה-RNA של מנשא AVL של המאגר לשלב התיזה.
יש לשמור על תערובת האב של מאגר הדגימה והתיזה בטמפרטורת החדר. סמן צינור צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. הגדר את קצה פיפטה ל 560 microliters.
החל עצה פיפטה נקייה. הוסף מאגר תזה לכל צינור. השלך את הקצה במיכל הפסולת.
לאחר מכן, קח את דוגמת האליקוט של PCR. מניחים אותו לתוך צינור חיץ תזה מוכן המיועד aliquot אחד, ולחזור על זה עבור כל דגימות נוספות. השלך קצה פיפטה ישן והחל טיפ פיפטה נקי.
החל עצה פיפטה נקייה. הוסף 140 מיקרוליטרים של חיץ לצינור הבקרה. סגור כל צינור בצורה מאובטחת.
מערבולת דופק למשך 15 שניות. חזור על הפעולה עם כל aliquots נוספים או דגימות. מיקרוצנטריפוגה כל דגימה במשך חמש שניות.
דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לאחר 10 דקות לזמן קצר צנטריפוגה הצינורות שלך כדי להסיר את כל הטיפות מבפנים של המכסה של כל צינור. הוסף 560 microliters של אתנול המדגם אחד.
תשנה את טיפ הפיפיטים שלך. חזור על הפעולה עם כל הדוגמאות הנותרות או הנוספים. סגור כל צינור מדגם בצורה מאובטחת.
פולס-מערבולת כל דגימה במשך 15 שניות. מיקרוצנטריפוג את הדגימות לחמש שניות. השג צינור איסוף נקי של שני מיליליטר.
הוסף את עמודות הסיבוב. תייג אותם כך שיתאימו לדוגמאות שלך. העבר 630 מיקרוליטרים של המדגם כדי להתאים לעמודה בהתאם.
אבטחו את הכובעים שלכם. עבור לצנטריפוגה. הפיץ באופן שווה את הדגימות שלך בצנטריפוגה.
צנטריפוגה ב 6000 גרם לדקה אחת כדי להסיר את מאגר תמוגה. חזור לתחנת עבודה. החלף את צינורות האיסוף שלך.
הוסף את מאגר התמוגה הנותר וחזור על שלב הצנטריפוגה. השלך את צינורות דגימת aliquot המקוריים שלך, ולאחר מכן, להשליך את eluate ולשטוף את עמוד ספין עם החיץ AW1. חזור על הליך זה עם כל דגימה או כל דגימה נוספת.
אבטחו את הכובעים על כל דגימה וצנטריפוגה בשישה ג'י. חזור על הפעולה עם חיץ הכביסה השני AW2 ב-20 גרם. לבסוף, מניחים את העמוד לתוך צינור נקי 1.5 מיליליטר.
פתח את העמודה והוסף 60 מיקרוליטרים של חיץ AVE. דגירה בטמפרטורת החדר למשך דקה אחת וצנטריפוגה בשש גרם לדקה אחת. הדוגמה מוכנה כעת לניתוח PCR.
תחת תנאי BSL-3 פרוטוקול ניסיוני יישאר זהה, אבל אמצעי בטיחות ייקח תקדים מעל כל דבר אחר. לפני הכניסה למעבדת BSL-3 להסתכל דרך החלון השקוף כדי להיות בטוח לחץ שלילי הוקמה ביחידת תא הכפפות. זה יהיה ברור כי לחץ שלילי נקבע כאשר הכדור בקיר גלוי.
לאחר לחץ שלילי הוקמה לפתוח את הדלת ולהיכנס ליחידה. מיד לשטוף את הידיים ולאחר מכן להמשיך לרשימה שלך PPE. המשך לשים על PPE בסדר הבא: תחת כפפות, שמלה, כיסויי נעליים, מסכה, מגן פנים, זוג השני של כפפות.
הפעל את המכונה ולאפשר ללחץ בתא הכפפות להתייצב. השתמש בתסריס אקונומיקה כדי לטהר את כל האזורים ואספקה אתה מתכנן להשתמש בתוך ומחוץ לתיבת הכפפות. יש להשליך את כל מוצרי פסולת האקונומיקה למיכל אקונומיקה בלבד.
השתמש בתסנון אתנול 70%כדי לנקות על כל האזורים שבהם נעשה שימוש באקונומיקה. העבר את הדגימות שלך דרך חלון המעבר. דגימות היו צריכות להיות מרוססות בתסכול אקונומיקה ולהותר לבד למשך דקה אחת לפחות במעבר לפני קבלתן בתוך יחידת BSL-3.
לאחר מכן, קבל את הדגימות שלך בתוך יחידת BSL-3 ונקה אותן ביסודיות לפני שתמשיך לשלב הרישום והתיוג. לאחר הדגימות נרשמו צינורות כבר שכותרתו, למקם את הדגימות לתוך תא הכפפות דרך מגש מנעל האוויר. אין לפתוח את שתי הדלתות בבת אחת.
פתח וסגור כל דלת בשני שלבים שונים לאמצעי זהירות. לאחר דגימות הועברו בבטחה אל פנים תא הכפפות, בצע את אותם שלבים כפי שתואר בעבר ליצירת aliquots מדגם בתא הכפפות. ברגע שהדגימות עוברות, מעבירים את הדגימות למיכל אטום.
לרסס תספס אקונומיקה בתוך תא הכפפות כדי לטהר צינורות וכל המשטחים האחרים. המתן חמש דקות ולאחר מכן להחיל 70% פתרון אתנול לשטוף את האקונומיקה. לאחר טיהור יסודי להעביר רק את הדגימות הדרושות לניתוח PCR עבור צעד תזה בחזרה לתוך תא הכפפות.
בתא הכפפות לבצע רק את שלב תוה של הליך החילוץ. לאחר lysed התאים, לאטום בחוזקה את הכובעים על כל מדגם ולהחיל אותם לתוך מעבר מנעל האוויר בלחץ. לטהר את תא הכפפות שוב עם אקונומיקה ואחריו 70% פתרון אתנול.
להעביר את הדגימות מתוך תא הכפפות ולהעביר אותם לתחנת העבודה עבור השלבים הנותרים של הליך החילוץ. לאחר החילוץ להעביר את הדגימות שלך לחלון עובר עבור ניתוח PCR. לאחר שהדגימות הוסרו והועברו, תטהר את סביבת העבודה של המעבדה שלך מחוץ לתיבת הכפפות.
לפני הסרת PPE שלך, לחכות עד זרימת האוויר ביחידה הגיע בבטחה מספר מתאים של מחזורי סינון לפני שתתחיל להסיר PPE שלך. מיד לאחר הסרה והסרה של כל PPE לתוך מיכל פסולת PPE, להמשיך לשטוף את הידיים בכיור המעבדה עם מים וסבון לפני היציאה היחידה. הגברה וזיהוי PCR.
הסר את דגימות ה- RNA שחולצו מחלון המעבר. הכינו תערובת אב בצינור 1.5 מיליליטר עם הרכיבים הבאים עבור כל בדיקה ממוקדת: מים, פריימרים ובדיקות, תערובת תקיפה ומאגר 2X. מערבולת ולסובב את תערובת האב שלך, ולאחר מכן, aliquot את תערובת האב לתוך כל צינורות הרצועה.
החזר את ערכת ה- PCR לאחסון בטמפרטורות המומלצות לאחר הכנת התמהיל הראשי. מוסיפים את הדגימות לכל אחד מצינורות הרצועה באמצעות קצה נפרד בין כל צינור רצועה. סובב את הדגימות ב- 1,500 סל"ד למשך דקה אחת, ולאחר מכן דוגמאות מוכנות להטענה ליחידת PCR בזמן אמת.
לאחר שהדגימות נטענות למכשיר PCR, נדרשות כ- 90 דקות להשלמת ריצה אחת. מבחן PCR בזמן אמת הוא שיטה רגישה לגילוי חזק של הנגיף. ניתן לראות זאת בטבלה עם התווית:PCR ניתחו תוצאות.
לפני איסוף התוצאות שלך לעזוב את המעבדה, להסיר PPE כראוי לטהר כל תחנת עבודה לקראת הבדיקה הבאה אבחון. תוצאות מייצגות. זרימת העבודה במעבדה מיוצגת בדיאגרמה המדגישה הגנה אישית.
בדיקת האבחון המהירה של שפעת מושגת באמצעות ניתוח RT-PCR. ההליך מורכב מארבעה שלבים עיקריים וסביבות עבודה בודדות מוקצות עבור כל שלב בפרוטוקול. מטרת הפרויקט היא לאמת מתקן מעבדה מודולרי חדש הניתן לפריסה מהירה וכך הצלחנו לעשות זאת, כמו גם לפתח תוכניות הכשרה לאנשי מעבדה העובדים בסביבות בעלות משאבים נמוכים במהלך מגיפות והתפרצויות.
