自由移动小鼠中肠道来源的微生物代谢物的脑室内递送

肠道微生物群释放的代谢物对宿主产生复杂的影响。该协议提供了一种询问肠道代谢物在小鼠大脑和行为中的作用的方法。该技术提供了一种精确，细致且经过验证的方法，可将自由移动的小鼠的肠道代谢物输送到大脑中。

我们为深入了解肠脑轴研究提供了全面和生理学的最佳方法。将鼠标放在立体定位框架上，并将鼠标门牙固定在立体定位门牙支架中的门牙杆上。用鼻锥面罩遮住鼻子。

然后通过顶部捏反射评估小鼠的伤害感受，并确保在切开手术部位之前保持恒定的呼吸频率。一旦用胶带去除头上修剪过的皮毛，皮下注射镇痛药酮洛芬以缓解疼痛并涂抹眼膏。接下来，通过将尖头耳杆插入耳道来固定头部。

拧紧门牙支架上的鼻夹，轻轻按压头部以确保头部固定。使用3次氯己定拭子交替擦洗对头皮进行消毒。现在，使用解剖手术刀在头皮上以前后方式切开小于一厘米的切口。

打开切口后，用微解剖钳固定的棉签擦拭头骨。根据立体定位坐标，识别并标记手稿中描述的右侧心室位置。接下来，使用立体定位钻在标记部位的头骨上钻一个孔，然后在头骨上再钻两到四个孔。

用利多卡因棉签擦拭头骨，并在孔上安装 2 到 4 个不锈钢螺钉。将商业导向套管放在立体定位套管支架上，并在150摄氏度下用玻璃速度灭菌器进行消毒。然后，将立体定位套管支架移动到为侧脑室钻孔的孔中，并将商业导向套管缓慢插入孔中，直到达到所需的深度。

现在涂上10微升氰基丙烯酸正丁酯粘合剂，将商业导引套管固定在钻孔中，等待3至4分钟。从立体定位套管支架中轻轻松开商业导引套管，然后将亚克力牙科涂在切开的头皮上以固定商业导引套管并等待至少 5 分钟。将商业假人植入商业导引套管中。

然后，将鼠标放入一个新的笼子中，下面有一个加热垫，以便从麻醉中恢复，并不断观察直到小鼠完全醒来。将装有10微升蒸馏水的微升注射器安装在显微注射泵上。使用胰岛素注射器，用蒸馏水填充聚乙烯管，并将微升注射器连接到悬挂的聚乙烯管。

打开显微注射控制器并按显示所有通道以访问命令屏幕。接下来，按配置并将体积目标设置为 9， 800 纳升，输送速率为每秒 100 纳升。然后按方向切换到注入模式，并按运行从连接到微升注射器的聚乙烯管注入9， 800纳升蒸馏水。

现在，将注射器放入装有矿物油的小瓶中，按压配置并将体积目标设置为3， 000纳升，输送速率为每秒100纳升。要提取 3， 000 纳升矿物油，请按方向切换到提取模式，然后按运行。从微升注射器针头上拆卸聚乙烯管。

要从微升注射器针头中吐出 3， 000 纳升蒸馏水，请按方向切换到输注模式并按运行。然后将微升注射器插回聚乙烯管中。将注射器放入含有SCFA的小瓶中。

按配置并将体积目标设置为 9， 500 纳升，输送速率为 100 纳升/秒。通过按方向提取9， 500纳升SCFA切换到提取模式并按运行。标记油 SCFA 相以验证 SCFA 是否成功注入。

按配置并将所需的体积目标设置为每秒 7 纳升。按方向切换到注入模式。按运行向前注入微升注射器，直到液体从商业注射器的前端流出，然后将注射器插入套管以进行SCFAs注射。

麻醉小鼠后，将商业注射器插入商业导引套管中。一旦小鼠从麻醉中恢复过来，将其放在一个新的笼子里，让它自由探索35分钟。在前 5 分钟内，目标体积为 2， 100 纳升，以每秒 7 纳升的输送速率注入 SCFA。

然后按方向进入注入模式并按运行。行为测试后，从商业导引套管中取出商业注射器。以每秒7纳升的输送速率注入2， 100纳升的中性示踪剂，以验证输注部位。

使用荧光显微镜对输注部位的荧光信号进行成像。ACSF和SCFAs注入的小鼠都在一个新的笼子中旅行总共35分钟。在SCFAs和ACSF输注之间的新笼中运动活动没有观察到差异。

当注入商业引导套管时，在侧脑室和小鼠大脑的周围区域检测到荧光染料。同样，通过不锈钢导管输注导致在侧脑室和小鼠大脑周围区域检测信号。将这一程序与基于电路的神经技术相结合，将使科学家能够深入了解基于回路的大脑控制和肠道代谢物贡献的行为。

这项技术为研究人员探索微生物群和代谢物在复杂的肠道脑轴中的作用铺平了道路。