一种新型锥形海绵尖电极在幼虫斑马鱼中的电录记录

该协议有助于简化幼虫斑马鱼电雷素图或ERG的测量，为视觉发育和遗传疾病模型提供重要的功能读取。本协议中使用的记录电极的软海绵尖端使用经济且容易获得的材料易于制造，避免了对幼虫眼睛的潜在损坏。较软的海绵尖电极可以促进对同一只眼睛的重复 ERG 测量。

对于此过程的新功能，可能会发现很难在整个过程中使用的昏暗的红色灯光下工作。但保持黑暗适应很重要。要准备锥形海绵记录电极，请从铂电极引线延长件上切开端，并使用手术刀从延长线的新端去除 10 毫米的外聚四氟乙烯绝缘涂层。

切割一块直径 0.3 毫米的银线 40 毫米，用裸露的内线将银线缠绕在一起，将导线牢固地连接到电极引线上。用绝缘胶带包裹接头，使大约 15 毫米长的银线暴露在外。将另一根导线连接到蓄电池的负端子，然后将导线的另一端浸入盐水中。

将外露的银线浸入普通盐水中，将另一端连接到九伏直流源的正端子。60 秒后，将导线放在吸水组织上晾干。同时，将20微20毫米的醋酸聚乙烯海绵切成锥形，将海绵在一次林格缓冲液中饱和。

在光学显微镜下，用刻度杆在目镜上，使用手术刀刀片将圆锥体的顶点塑造成直径约 40 微米。在吸水纸巾上风干锥形海绵，直到它是固体。在将银线插入干燥的实心锥形醋酸酯海绵之前，使用遮罩胶带将多余的暴露金属绝缘，以减少光伏伪影。

在实验当天，将海绵尖电极浸入林格的缓冲液中15分钟，使海绵完全饱和。在录音前至少8小时，将不超过20只斑马鱼幼虫放在一个15毫升的管子里，没有盖子，用铝箔包裹在黑暗的孵化器里。在孵化结束时，将深色适应的斑马鱼倒入发光二极管昏暗的红色照明下的培养皿中。

要准备海绵平台，切一块聚乙烯醋酸海绵大致等于35毫米的培养皿的深度，使海绵将舒适地适合在盘中。通过海绵的一端垂直切入一个小切口，以容纳参考电极的银线，将海绵浸泡在金鱼环圈缓冲器中，直到海绵饱和。然后将海绵放入干净的 35 毫米培养皿中，并使用纸巾吸收多余的液体，直到海绵没有溶液在轻指按下散发。

为了放置动物进行实验，使用三毫米巴斯德移液器将麻醉幼虫转移到三厘米三厘米方的纸巾上，并使用钳子将方块放在湿润的海绵上。使用浸泡在林格缓冲液中的细刷，调整幼虫的位置，一只眼睛朝上，远离幼虫下毛巾上的任何液体。用保湿眼凝胶对幼虫身体进行釉面，使动物在整个电雷蛋白记录中保持水分。

将盘子放在位于法拉第笼子里的甘兹菲尔德碗前的一个小水加热平台上。将参考电极插入平台海绵中的切割中。将商业获得的接地电极连接到法拉第笼。

将记录电极连接到电极支架，然后将支架固定到微操纵器的立体臂上。使用三毫米巴斯德移液器，用一滴林格溶液对电极的海绵尖端进行再饱和，将显微镜放在法拉第笼中的电雷基图平台上。使用吸水组织尖端从电极海绵尖端和显微镜下去除多余的液体，将有源电极放置，使海绵尖端轻轻地接触斑马鱼眼的中央角膜表面。

然后将甘兹菲尔德碗移向海绵平台，注意幼虫被碗覆盖，并关闭笼子以减少无关的电磁噪声。幼虫斑马鱼视网膜对变暗的敏感度随着年龄的增长而增加。由于在受精后四天，在强度低于负1.61的原木中，无法识别强度低于负1.61的原木，而在较旧的幼虫的这些强度下，可以检测到清晰的信号。

B波振幅在受精后四到五之间显著增加。在7天，信号在2.48原木，每平方米比5天和第6天施肥后更大。A 波和 b 波隐式时间在受精五天后变得明显加快。

总的来说，这些结果表明斑马鱼视网膜功能在受精后四到七天成熟。要成功执行此协议，海绵必须完全饱和液体，这有助于保持记录电极的电导率并降低噪声水平。如果一波特别感兴趣，可以应用药理处理来阻止b波成分，从而暴露完整的一波。