用于口腔中性粒细胞病评价的鼠期牙周炎的强结合诱导模型

此处描述的协议为研究人员提供了一种方法，以类似于人类参与者的方式研究牙周病连结诱导动物模型中的口服嗜中性粒细胞。这种技术的主要优点是增加用于后续分析的发炎金黄色组织，从而减少了动物的用量。我们能够从牙齿周围检索生物膜涂层的连结字，可以模拟局部牙周病的有效治疗。

由于发炎的金吉瓦尔组织面积增加，该模型的使用可用于动物模型中牙周炎的系统性影响。熟悉使用显微手术器械和解剖显微镜，以及在处理活体动物受试者之前打结外科医生的结，是强烈建议。这种技术的视觉演示对于缩短实现熟练连字放置所需的学习曲线长度至关重要。

演示这个程序的将是杰夫·查德维格，一个研究生从我的实验室。首先将鼠标定位在加热手术平台上。确保小鼠正确麻醉后，使用弹性带在开放位置稳定最大和可移动性。

用棉卷支撑颈部，以保持 maxilla 的水平位置，并覆盖身体和尾部，以减轻热量损失。将手术显微镜置于口腔上所需的放大倍率和照明位置。使用分裂钳在银杏磺胺的 M1 和 M2 最大摩尔周围安装无菌 50 或更小的编织丝缝合线。

将缝合线的端尾放在齿面的齿面上，并在 M2 和 M3 接触之间插入近端段。然后，将其缠绕在 M2 的桶面周围，并将其插入 M1 和 M2 的接触之间。确保缝合线两端被紧紧拉住，以驱动它到金吉瓦尔硫化物。将近近缝合线段缠绕在 M1 周围的轮廓高度以下，并将其插入 M1 和 M2 的接触之间。紧密拉紧缝合线近近的尾部，以清除所有松弛。用外科医生的结把缝合线末端绑起来，并尽可能修剪尾巴。

将结放在 M1 和 M2 之间的金花磨痕中，放在最大齿形的苍白侧。至关重要的是，用于固定连字的结是安全的，并在位置，它不会激怒动物或干扰粘结。连接安装后，将鼠标从手术器械中取出，放入热灯下的清洁笼中，确保监测直到完全恢复。

在每个动物主体之间的热玻璃珠消毒器中对手术器进行消毒。将每只鼠标单独安装为适当的环境浓缩设备，并允许 ad libitum 在温度和湿度控制的环境中接触过滤水和捣碎标准周，为期 7 至 11 天。当准备收集样品时，使用移液器用100微升消毒4摄氏度PBS冲洗口腔，不带钙和镁10秒。

再重复冲洗两次，将每个冲洗放入每个动物相同的 15 毫升锥形无菌试管中。通过 40 微米尼龙网过滤器将每个 15 毫升管的内容物运行到 50 毫升锥形管中，然后将滤芯转移到新的 15 毫升试管中。添加 33.3 微升 16% 的半成醛，以方便样品固定。

立即对样品进行涡旋，并在冰上孵育15分钟。甲状甲醛是协议中使用的最危险试剂，应使用制造商建议的建议的个人防护设备进行处理。孵育后，用PBS将管子填充至15毫升，然后在1000xg和4摄氏度的离心，5分钟。

吸升液，在四摄氏度的一毫升 FACS 缓冲液中重新悬浮颗粒，并在血细胞计或自动细胞计数器上计数细胞。重复离心并吸进上经剂。然后，将细胞颗粒重新悬浮在适当体积的 FACS 缓冲液中，使每 50 微升 FACS 缓冲液中最终浓度为 50 万至 100 万细胞，然后将细胞转移到 FACS 管中。

在样品的50微升中加入一微升大鼠血清和两微升抗小鼠IGG抗体。立即对样品进行涡旋，并在冰上阻挡样品20分钟。然后，将适当的抗体添加到每个样品中。

漩涡，在黑暗中在冰上孵育30分钟。孵育后，用一毫升的FACS缓冲液、涡流短暂清洗样品，并在1000xg和4摄氏度的离心机中清洗5分钟。倾倒上一个液，轻轻挡住 FACS 管的开口。

重复洗涤两次，然后将样品重新悬浮在 250 微升的 FACS 缓冲器中进行存储。用石蜡膜盖住管子，用铝箔包裹，在四摄氏度下储存，直到准备分析。流式膀胱学用于分析从天真小鼠的口服冲洗中恢复的嗜中性粒细胞，以及从具有连结字引起的牙周炎的小鼠中口服冲洗和恢复连体。

为了评估道骨流失，从道长骨峰到水泥骨质结，为健康和结扎小鼠测量了道骨水平。然后计算测量差异。虽然没有在这里审查，组织病理学，免疫组织化学，和形态学评估的周和起骨也可以根据研究问题进行。

这个模型目前正在我的实验室里用于研究口腔先天免疫系统对全身健康和疾病的影响。