这种测定的主要优点是简单和准确性,因为它不需要胚胎冲洗转移到食品小瓶,并避免因技术错误的损失。该协议不需要专家技术技能。然而,适当的时间和仔细的调水对于其准确性和可重复性非常重要。
安东尼奥·罗克韦尔是一位刚从我实验室毕业的博士生,他将证明这个程序。在开始手术之前,将葡萄加糖倒入35毫米的培养皿中,以半满,让葡萄加凝固一小时。当阿加凝固后,使用一把小塑料刀轻轻划伤板外面的加糖表面,使板的中间没有划痕。
然后将少量新鲜准备的酵母酱放入菜的中心,将盘子放入胚胎收集迷你笼中。对于胚胎采集,首先将两名雌性处女和一名年轻男性放在收集笼内24小时。第二天,检查阿加板的底部寻找胚胎。
如果胚胎已经奠定了,将阿加板转移到潮湿的腔室中,用盖子盖住盘子,以避免脱水。如果要打分几天的铺设,请将新的阿加板放入收集笼中。使用显微镜确定孵化胚胎和L1幼虫的数量,并在室温下将胚胎返回湿润室,直到所有胚胎孵化并发育成L1幼虫。
48 小时后,计算孵化胚胎和 L1 幼虫的数量,并使用铲子小心地从 Petri 盘中取出葡萄加子盘,将盘 L1 侧放在食物小瓶中,大到足以容纳该盘。然后仔细检查培养皿中是否有剩余的幼虫。每天大约在同一时间监测食物小瓶,以确认可以观察到L2和L3幼虫进入食物。
记录幼崽和成年果蝇的数量,继续计数,直到不再观察到成人,并避免计算下一代。然后执行奇方分析。零假设假设假设 100% 的生存能力,这样成人的数量将等于最初记录的孵化胚胎和 L1 的数量,并转移到食物小瓶。
当阿加被放置在小瓶的一侧时,许多胚胎和幼虫对成人来说并不成熟,很可能是由于葡萄加盘脱水。当葡萄加糖面朝下放置在小瓶内与食物表面直接接触时,通常不到6%的后代会丢失,因为葡萄加在接触小瓶内速溶食物的水分时保持水分。在这个比较野生型和突变后代发育的代表性实验中,大约91%的突变后代使用这种方法成熟到成年,而野生型苍蝇的后代的94%则使用这种方法成熟到成年。
记得将红盘胚胎侧向下转移到食物小瓶中,然后检查空的培养皿中是否有未转移的剩余幼虫。另一个关键步骤是将糖盘转移到食物小瓶,不迟于48小时后从胚胎收集迷你笼中去除葡萄加糖盘,以防止脱水。