طريقة مباشرة وبسيطة لتقييم قدرة دروسوفيلا ميلانوغاسترعلى البقاء من الجنين إلى الكبار

الميزة الأساسية لهذا الفحص هي البساطة والدقة لأنها لا تتطلب شطف الجنين لنقلها إلى قارورة الطعام وهذا يتجنب الخسائر من الأخطاء الفنية. ولا يتطلب هذا البروتوكول مهارات تقنية متخصصة. ومع ذلك، فإن التوقيت المناسب ونقل المياه بعناية مهمة لدقتها وقابلية التكاثر.

إثبات هذا الإجراء سيكون أنطونيو روكويل، طالب دكتوراه تخرج مؤخرا من مختبري. قبل البدء في الإجراء، صب العنب أجار في طبق بيتري 35 ملليمتر إلى نصف كامل والسماح لأجار لترسيخ لمدة ساعة واحدة. عندما تتوطد أجار، استخدم سكينًا بلاستيكيًا صغيرًا لخدش سطح agar حول الجزء الخارجي من اللوحة، مما يترك منتصف اللوحة خاليًا من الخدوش.

ثم ضع كمية صغيرة من معجون الخميرة الطازجة في وسط الطبق ووضع الطبق في قفص صغير لجمع الجنين. لجمع الأجنة، المركز الأول اثنين من الإناث الدروسيليليا العذراء و ذكر شاب داخل قفص جمع لمدة 24 ساعة. في اليوم التالي، تفقد الجزء السفلي من لوحة أجار للبحث عن الأجنة.

إذا تم وضع الأجنة، قم بنقل صفيحة الأجار إلى غرفة رطبة وغطّي الطبق بالغطاء لتجنب الجفاف. إذا كان عدة أيام من زرع هي أن تكون مسجلة، وضع لوحة أغار جديدة في قفص جمع. استخدم المجهر لتحديد عدد الأجنة المفقوسة ويرقات L1، وإعادة الأجنة إلى الغرفة الرطبة في درجة حرارة الغرفة حتى تفقس جميع الأجنة وتطورت إلى يرقات L1.

بعد 48 ساعة ، عد عدد الأجنة المفقسة ويرقات L1 واستخدم ملعقة لإزالة قرص العنب أجار بعناية من طبق بيتري ، ووضع جانب القرص L1 لأسفل على الطعام في قارورة طعام كبيرة بما يكفي لاستيعاب القرص. ثم تفقد بعناية طبق بيتري عن أي يرقات متبقية. مراقبة قارورة الطعام يوميا في نفس الوقت تقريبا كل يوم للتأكد من أن اليرقات L2 و L3 يمكن ملاحظتها تشق طريقها إلى الطعام.

تسجيل عدد من pupae وDdosophila الكبار، والاستمرار في العد حتى لا يتم ملاحظة المزيد من البالغين وتجنب عد الجيل اللاحق. ثم إجراء تحليل تشي سكوير. الفرضية الفارغة تفترض صلاحية 100٪، بحيث يكون عدد البالغين مساويا لعدد الأجنة المفقوسة وL1 المسجلة أصلا ونقلها إلى قارورة الغذاء.

عندما يتم وضع الأجار على جانب القارورة ، فإن العديد من الأجنة واليرقات لا تنضج للبالغين ، على الأرجح بسبب جفاف قرص العنب الأجار. عندما يتم وضع العنب أجار الوجه إلى أسفل داخل القارورة في اتصال مباشر مع سطح الطعام، يتم فقدان أقل من 6٪ من ذرية عادة، كما لا يزال أجار رطبة في حين في اتصال مع رطوبة الطعام الفوري داخل القارورة. في هذه التجربة التمثيلية مقارنة التنمية من النوع البري وذرة، ما يقرب من 91٪ من ذرية متحولة نضجت إلى مرحلة البلوغ باستخدام هذه الطريقة مقارنة مع 94٪ من ذرية من الذباب من النوع البري.

تذكر أن تنقل قرص agar جانب الجنين إلى أسفل إلى قارورة الطعام ثم ، للتحقق من طبق بيتري الفارغ لأي يرقات متبقية لم يتم نقلها. خطوة أخرى حاسمة هي نقل قرص أجار إلى قارورة الطعام في موعد أقصاه 48 ساعة بعد إزالة صفيحة العنب أجار من أقفاص صغيرة لجمع الأجنة لمنع الجفاف.