Il vantaggio principale di questo saggio è la semplicità e l'accuratezza perché non richiede un risciacquo embrionale da trasferire sulla fiala alimentare e che evita perdite da errori tecnici. Questo protocollo non richiede competenze tecniche esperte. Tuttavia, la tempistica corretta e un attento trasferimento dell'acqua sono importanti per la sua accuratezza e riproducibilità.
A dimostrare questa procedura sarà Antonio Rockwell, dottorando di recente laurea presso il mio laboratorio. Prima di iniziare la procedura, versare l'agar d'uva in una piastra di Petri di 35 millimetri a metà piena e lasciare che l'agar si solidifichi per un'ora. Quando l'agar si è solidificato, utilizzare un piccolo coltello di plastica per graffiare delicatamente la superficie dell'agar intorno all'esterno della piastra, lasciando il centro della piastra privo di graffi.
Quindi mettere una piccola quantità di pasta di lievito appena preparata al centro del piatto e posizionare il piatto in una mini gabbia per la raccolta degli embrioni. Per la raccolta degli embrioni, al primo posto due femmine vergini di Drosophila e un giovane maschio all'interno della gabbia di raccolta per 24 ore. Il giorno dopo, ispezionare il fondo della piastra dell'agar per cercare embrioni.
Se gli embrioni sono stati deposti, trasferire la piastra di agar in una camera umida e coprire la piastra con il coperchio per evitare la disidratazione. Se devono essere segnati diversi giorni di posa, posizionare una nuova piastra di agar nella gabbia di raccolta. Utilizzare il microscopio per determinare il numero di embrioni nati e larve di L1 e riportare gli embrioni nella camera umida a temperatura ambiente fino a quando tutti gli embrioni si sono schiusi e sviluppati in larve L1.
Dopo 48 ore, contare il numero di embrioni nati e larve di L1 e utilizzare una spatola per rimuovere con cura il disco di agar d'uva dalla piastra di Petri, posizionando il lato L1 del disco sul cibo in una fiala alimentare abbastanza grande da ospitare il disco. Quindi ispezionare attentamente la piastra di Petri alla ricerca di eventuali larve rimanenti. Monitora la fiala alimentare ogni giorno all'incirca alla stessa ora ogni giorno per confermare che le larve L2 e L3 possono essere osservate mentre si divano verso il cibo.
Registra il numero di pupe e Drosophila adulta, continuando a contare fino a quando non vengono osservati più adulti ed evitando di contare la generazione successiva. Quindi eseguire un'analisi chi quadrato. L'ipotesi nulla presuppone una vitalità del 100%, tale che il numero di adulti sarà uguale al numero di embrioni nati e L1 originariamente registrato e trasferito alle fiale alimentari.
Quando l'agar viene posto sul lato del flaconcino, molti degli embrioni e delle larve non maturano per gli adulti, probabilmente a causa della disidratazione del disco di agar dell'uva. Quando l'agar dell'uva viene posizionato a faccia in giù all'interno della fiala a diretto contatto con la superficie alimentare, meno del 6% della progenie viene tipicamente persa, poiché l'agar rimane idratato mentre è a contatto con l'umidità del cibo istantaneo all'interno del flaconcino. In questo esperimento rappresentativo che confronta lo sviluppo della progenie selvatica e mutante, circa il 91% della progenie mutante è maturata fino all'età adulta usando questo metodo rispetto al 94% della progenie delle mosche di tipo selvatico.
Ricordarsi di trasferire il disco di agar embrionale verso il basso nella fiala alimentare e poi, per controllare la piastra di Petri vuota per eventuali larve rimanenti che non sono state trasferite. Un altro passo cruciale è il trasferimento del disco di agar su una fiala alimentare non più tardi di 48 ore dopo aver rimosso il piatto di agar dell'uva dalle mini gabbie di raccolta degli embrioni per prevenire la disidratazione.
