שיטה ישירה ופשוטה להערכת דרוזופילה מלאנוגסטרהכדאיות מעובר למבוגר

היתרון העיקרי של הראיה זו הוא הפשטות והדיוק מכיוון שהיא אינה דורשת שטיפה של עובר כדי לעבור לבקבוקון המזון וזה מונע הפסדים מטעויות טכניות. פרוטוקול זה אינו דורש כישורים טכניים מומחים. עם זאת, העיתוי הנכון והעברת מים זהירה חשובים לדיוק ולשכפול שלה.

הדגמת הליך זה יהיה אנטוניו רוקוול, סטודנט לתואר שלישי שזה עתה סיים את לימודיו מהמעבדה שלי. לפני תחילת ההליך, יוצקים אגר ענבים לתוך צלחת פטרי 35 מילימטר עד חצי מלא ולאפשר אגר להתגבש במשך שעה אחת. כאשר אגר התגבש, להשתמש בסכין פלסטיק קטנה כדי לגרד בעדינות את פני השטח של אגר סביב החלק החיצוני של הצלחת, עוזב את אמצע הצלחת ללא שריטות.

לאחר מכן מניחים כמות קטנה של משחת שמרים טריים במרכז המנה ומ מניחים את המנה לתוך כלוב מיני אוסף עוברים. לאיסוף עוברים, מקום ראשון שתי נקבות דרוסופילה בתולות וזכר צעיר אחד בתוך כלוב האיסוף במשך 24 שעות. למחרת, לבדוק את החלק התחתון של צלחת אגר לחפש עוברים.

אם הונחו עוברים, מעבירים את צלחת הגר לתא לח ומכסים את הצלחת במכסה כדי למנוע התייבשות. אם יש להבקיע מספר ימים של הנחת, הניחו צלחת אגר חדשה בכלוב האיסוף. השתמש במיקרוסקופ כדי לקבוע את מספר העוברים שבקעו וזחלי L1, ולהחזיר את העוברים לתא הלח בטמפרטורת החדר עד שכל העוברים בקעו והתפתחו לזחלי L1.

לאחר 48 שעות, לספור את מספר העוברים בקעו זחלים L1 ולהשתמש מרית כדי להסיר בזהירות את הדיסק של אגר ענבים מן צלחת פטרי, הצבת הדיסק L1 בצד על האוכל בקבוקון מזון גדול מספיק כדי להתאים את הדיסק. ואז לבדוק בזהירות את צלחת פטרי עבור כל הזחלים הנותרים. לפקח על בקבוקון המזון מדי יום בערך באותו זמן בכל יום כדי לאשר כי הזחלים L2 ו L3 ניתן לראות עושה את דרכם למזון.

רשום את מספר הגלימות והדרוסופילה הבוגרת, ממשיך לספור עד שלא נצפו יותר מבוגרים ונמנע מספירת הדור הבא. לאחר מכן בצע ניתוח ריבועי צ'י. השערת האפס מניחה 100% כדאיות, כך שמספר המבוגרים יהיה שווה למספר העוברים שבקעו ו- L1 נרשם במקור והועבר לבקבוקוני המזון.

כאשר הגר ממוקם בצד הבקבוקון, רבים מהעוברים והזחלים אינם מתבגרים למבוגרים, ככל הנראה בשל התייבשות דיסק אגר ענבים. כאשר אגר ענבים ממוקם עם הפנים כלפי מטה בתוך הבקבוקון במגע ישיר עם משטח המזון, פחות מ 6% של צאצאים בדרך כלל הולך לאיבוד, כמו אגר נשאר hydrated בעת מגע עם הלחות של מזון מיידי בתוך הבקבוקון. בניסוי מייצג זה המשווה התפתחות של צאצאים פראיים ומוטנטים, כ-91% מצאאוות המוטנטים התבגרו לבגרות בשיטה זו בהשוואה ל-94% מצאאצאי זבובים מסוג פראי.

זכור להעביר את צד העובר של דיסק אגר לתוך בקבוקון המזון ולאחר מכן, כדי לבדוק את צלחת פטרי הריקה עבור כל הזחלים הנותרים שלא הועברו. צעד מכריע נוסף הוא העברת דיסק אגר לבקבוקון מזון לא יאוחר מ-48 שעות לאחר הסרת צלחת אגר הענבים מכלובי המיני של איסוף העוברים כדי למנוע התייבשות.