这种方法可以帮助回答有关血脑屏障在多阶段发育过程中形成和维持的遗传调控关键问题。这种方法也可以适应，以检查其他屏障的渗透性，如肠道上皮在各种生物体。该技术的主要优点是，它允许评估活组织中的血脑屏障功能。
此方法的可视化演示至关重要，因为示例操作可能很困难，并且许多步骤需要密切注意细节。对于胚胎收集的地方，至少50个处女与20至25雄性每瓶玉米餐阿加食物，并孵育这些苍蝇一到两天，然后再开始收集。前一天收集，热苹果汁加糖板在25摄氏度过夜。
第二天早上，将二氧化碳麻醉苍蝇转移到收集笼中，将预加热的苹果汁加糖板放在笼子的开端上，用一小块酵母膏涂抹。然后用红套将盘子固定到笼子上。为了清除较旧的胚胎，允许苍蝇在25摄氏度的苹果汁加糖盘上产卵一小时。
在孵化结束时，将笼子网面向下反转，然后将苍蝇敲击到笼子的底部。用一个新的预热苹果汁加糖板代替苹果汁加糖，用一小块酵母酱涂抹。允许苍蝇在25摄氏度下在新盘子里再产卵一小时。
要收集晚期17个胚胎进行注射，用新的预热板代替苹果汁加糖板，用酵母膏涂抹。让苍蝇在25摄氏度的盘子里产卵。一小时后，更换板，用收集的胚胎老化19小时，温度为25摄氏度，使胚胎在成像时20至21小时。
在19小时的孵育结束时，从培养箱中取出胚胎收集板，用PbTx覆盖胚板表面。将胚胎的过滤器放在100毫米培养皿中50%的漂白剂中，在室温下偶尔搅拌5分钟，以脱毛。
在孵育结束时，在新鲜PBTx中旋转过滤器，使用新的培养皿进行每次洗涤，对胚胎冲洗三次。用PBTx将胚胎清洗到过滤器的一侧，并使用玻璃移液器将胚胎转移到2%的阿加罗斯凝胶板上。用滤纸去除多余的液体。
将板面上的六到八个胚胎与右侧的后侧对齐，背侧朝上，并牢固地按下贴在胚胎顶部的幻灯片上的一块双面胶带。然后在室温下干燥胚胎约25分钟，然后用卤化碳油覆盖标本。对于幼虫收集，设置一个十字架与5至10处女雌蝇所需的基因型和一半的雄性所需的基因型在小瓶与玉米粉阿加食品。
在25摄氏度的5到7天后，根据基因型，使用钳子轻轻地从小瓶中收集游荡的第三个星幼虫，并用PBS冲洗幼虫，以去除任何卡住的食物。将幼虫转移到苹果汁加糖盘中，必要时进行基因分型，然后再使用画笔将幼虫擦干组织上的幼虫。然后使用钳子将六到八只幼虫转移到用双面胶带准备的幻灯片上。
注射前，使用微管拉拔器将毛细管拉成标准针形，用于 D.Melanogaster 注射，并在培养皿中将针头固定在粘土中。对于胚胎注射，使用 20 微升凝胶加载移液器尖端装载准备好的针头，其中 5 微升 10 千吨脱胶素结合到磺胺 101 氯化酸，然后将针头加载到针架中。将针头固定在钢基座的微操纵器中，将注射装置设置为每平方英寸 50 磅，将 5 到 10 毫秒，范围为 10。
将幻灯片放在微操纵器舞台上，以 45 度角将针的边缘刷在双面胶带的边缘上，以创建一个稍微倾斜的尖端，以使 10 千吨脱胶器流过开口。泵踩脚踏板，直到染料位于针尖。对齐针头，使其与胚胎平行，并刺穿标本的后端。
泵送脚踏板，将两纳米色染料注入试样中。注意用于孵育目的的注射时间，然后继续向下滑动以注入额外的试样。对于幼虫注射，在给幼虫注射220纳米光，与胚胎标本相似之前，使角开口比用于注射胚胎的开口稍大一些，针稍微向下角向标本倾斜。
在 10 分钟注射孵化结束时，使用棉尖施用器将油果冻涂在幻灯片上样品的左右两侧，作为垫垫。将盖滑放在顶部，然后将滑轨放在共和显微镜舞台上。选择 20 倍目标，并在整个胚胎深度中成像样本。
然后根据公式计算血脑屏障受损的样本百分比。在开始解剖程序之前，使用指甲油在幻灯片上安装两个相距约 0.5 厘米的盖滑，并在 30 分钟孵化结束时将注射的幼虫放入幻灯片上的 PBS 中。使用一对钳子，抓住幼虫身体的一半，用第二对钳子分离幼虫的前部和后部。
接下来，使用一对钳子抓住嘴钩的前部区域，并使用第二对钳子将身体壁倒置在第一对钳子的尖端上。大脑和腹神经线将暴露。如果需要，通过切断神经，将大脑和腹间神经线从身体壁分离，然后从滑梯上取下身体壁。
用 10 微升 80%甘油覆盖样品。然后在样品上放置盖板，用于成像和成像样品，以确定血脑屏障受损的样本的百分比，如所示。当野生型晚期17胚胎被注射10千达酮脱氧核糖核酸101酸氯化荧光染料时，大德xtran分子被排除在腹神经脐带中，如预期的那样。
异质1个突变胚胎表现出完整的血脑屏障，类似于在野生型控制胚胎中观察到的屏障。相比之下，同源1个突变胚胎在血脑屏障的完整性上表现出缺陷，10公斤的脱毒液充斥到腹神经脐带中，表明血脑屏障形成失败。在野生型控制幼虫样本中，10千吨脱毒剂无法穿透血脑屏障，被排除在大脑和腹神经线之外。
在尝试此程序时，胚胎的适当老化对于确保样本在血脑屏障形成预期完成的年龄进行检测至关重要。按照这个程序，显示受损血脑屏障的突变体可以使用遗传学、免疫组织化学和显微镜进一步研究，以更好地了解细胞水平上的基因功能。这项技术将使研究人员能够识别对建立和维持血脑屏障至关重要的其他基因。
