小鼠中可逆硅油诱发眼部高血压模型

青光眼是不可逆性失明的主要原因，其特征是视网膜结节细胞死亡和光神经退化。眼内压力的升高，也称为眼部高血压，是青光眼最公认的危险因素。在实验动物（如小鼠）中，一个简单而有效的眼部高血压模型对于研究神经退化中的光度计和神经保护的试验治疗非常重要。

因此，通过结果，我们开发一个小鼠眼部高血压模型，密切模仿人类患者观察到的继发青光眼。该模型忠实地复制了硅油引起的二次青光眼，导致瞳孔阻塞。程序简单，IOP高程稳定，如果与眼部高血压相关的神经退化在小鼠眼睛中严重，更重要的是，眼部高血压是可逆的，因为硅油可以很容易地从小鼠眼睛中去除。

演示这个程序的将是方方博士，一个来自我实验室的手术后研究员。首先，使用移液器拉拔器拉制玻璃毛细管，用于卡内硅油喷射的玻璃微管。在微管尖端切割开口，并使用微磨床斜面机锐化尖端，使斜面为 35 至 40 度。

抛光斜面的边缘，用水清洗，清除所有碎屑。使用前先将微管中去，然后进行中。要为角膜进入准备准中心针，请将 32 测量针连接到诱饵锁上的 5 毫升注射器上，然后用胶带将其固定。

弯曲针斜头，面朝上，在30度。要准备硅油喷油器，请将钝端 18 表针固定在 10 毫升注射器上。然后将塑料管与 18 量表针连接在一端，并根据需要通过另一端加注硅油。

麻醉9至10周老的C57黑色6J小鼠后，检查对手趾捏没有反应，胡须或尾巴缺乏运动。将鼠标放在手术平台上的横向位置。注射前在角膜上涂抹一滴5%的盐酸丙酸，以降低其在手术过程中的敏感性。

使用 32 量表副中心针在超时间象限（远离肢体约 5 毫米）进行入口切口。穿过角膜层约3毫米，然后穿入前室，小心不要接触镜头或虹膜。慢慢取针，通过隧道从前室释放约一到两个微升水性幽默，等待约八分钟，以进一步降低眼内压力。

测量反向控制眼以确定压力。将用硅油预装的玻璃微管通过角膜隧道插入前室，斜面朝下插入虹膜表面。缓慢地推动注射器柱塞，将硅油注入前室，直到油滴覆盖大部分虹膜表面，直径约为 2.3 至 2.4 毫米。

将微管留在前室中再保留 10 秒钟，然后缓慢取出。轻轻推动上眼睑关闭角膜切口，以尽量减少硅油泄漏。然后将抗生素软膏涂抹在眼部。

将鼠标放在加热垫上，直到完全从麻醉中恢复过来。要从前室中去除硅油，请给鼠标麻醉，然后检查对手趾捏的缺乏反应，以确定麻醉强度和胡须或尾巴的运动不足。将鼠标放在手术平台上，用胶带将鼠标固定在横向位置。

在角膜上涂抹一滴5%的盐酸丙酸，以降低其敏感性。使用预制的 32 量表准中心针，在大约 2 到 5 点钟的角膜时间象限中，在硅油滴的边缘进行两个切口。以最大速度通过一个角膜切口插入连接到灌溉溶液的 33 量表灌溉针。

将另一根 33 量表排水针插入注射器，无需柱塞通过其他角膜切口，以使硅油滴在用灌溉溶液灌溉的同时退出前室。将排水针取走，然后取灌针。使用连接到汉密尔顿注射器的玻璃微管将气泡注入前室，以保持其正常深度，并按下以关闭角膜切口。

在两只眼睛上涂抹抗生素软膏，将鼠标放在加热恢复垫上，直到完全从麻醉中恢复。将鼠标放入感应室。麻醉它如手稿中描述的，并在整个过程中应用人工眼泪来保持角膜湿润。

等待约15分钟，让瞳孔完全扩张。根据产品说明使用吨位计测量双眼的 IOP。将测速表靠近鼠标眼，将探头尖端到小鼠角膜的距离保持约三到四毫米。

按下测量按钮六次可生成一个读数，然后从每只眼睛获取三个机器生成的读数，以获得平均 IOP。对全座视网膜视网膜神经神经半薄部分进行免疫组织化学，对在硅油注射后八周内牺牲的动物进行存活轴的定量。在一次硅油注注后，每周测量一次，对大于1.6毫米的硅油滴的小鼠眼睛的眼内压力进行一次测量，为期八周。

眼睛接受油的压力仍然很高，大部分是反面控制眼的两倍，表明有效的瞳孔阻塞。在另一组小鼠中，硅胶油在注射两周后从前室冲洗。等待一周后，让角膜恢复，眼内压力恢复正常，与控制眼相同。

为了确定硅油引起的眼部低血压对视网膜结节细胞的影响，RBPMS染色对视网膜整体坐管周围区域中幸存的索马塔进行量化，显示硅油注射后视网膜结节细胞死亡剧烈。注射后八周的多溴二苯醚染色，对视神经半薄横截面中幸存的轴子进行量化。硅油引起的眼部高血压中轴松退化很大。

动物可以使用SLOOCT成像，以确定视网膜的变化。动物的视觉功能也可以通过模式ERG和OKR进行检测。这种眼部高血压模型将有助于研究高 IOP 诱导的冰川计神经退化。

它也可以用来测试有希望的神经保护疗法临床前。