Глаукома является основной причиной необратимой слепоты, характеризующейся гибелью клеток ганглия сетчатки и опто-нейродегенерации. Повышение внутриглазного давления, также называемое глазной гипертензией, является наиболее узнаваемым фактором риска развития глаукомы. Простая, но эффективная модель глазной гипертензии у экспериментальных животных, таких как мыши, имеет важное значение для исследования глаукометров в нейродегенерации и тестирования лечения нейропротектории.
Таким образом, в результате мы разрабатываем модель мышиной глазной гипертензии, которая тесно имитирует вторичную глаукому, наблюдаемую у пациентов с человеком. Эта модель точно реплицировать вторичной глаукомы, вызванной силиконовым маслом индуцированных для зрачка блокировки. Процедура проста IOP высота стабильна, и если нейродегенерации, связанные с глазной гипертензией является серьезным в глазах мыши, что более важно, глазной гипертензии обратима, потому что силиконовое масло может быть легко удалены из глаз мыши.
Демонстрация процедуры будет Dr.Fang Fang, послеоперационный сотрудник из моей лаборатории. Для начала сделайте стеклянный микропипют для инъекций интракамеального силиконового масла, потянув стеклянную капиллярную трубоурядку. Вырезать отверстие на кончике micropipette и заточить кончик с помощью микро-гриндер скошенной машины, чтобы сделать 35 до 40 градусов скошен.
Польский края скошена и мыть его водой, чтобы удалить все мусора. Автоклав микропипета перед использованием. Чтобы подготовить иглу парацентеза для входа роговицы, прикрепите 32-го калибра иглы к пятими миллилитров шприц на замок приманки и далее обеспечить его лентой.
Согните кончик иглы, лицом вверх, при 30 градусах. Для приготовления инжектора силиконового масла прикрепите и закрепите тупую иглу 18-миллиметрового калибра на 10-миллилитровом шприце. Затем прикрепите пластиковую трубку с иглой 18 калибра на одном конце и заполните силиконовым маслом по мере необходимости через другой конец.
После обезболивания от девяти до 10 недель C57 черный 6J мыши, проверить на отсутствие ответа на ногой щепотку с отсутствием движения усов или хвост. Поместите мышь в боковое положение на хирургической платформе. Нанесите одну каплю гидрохлорида 5%пропаракаина на роговицу перед инъекцией, чтобы уменьшить ее чувствительность во время процедуры.
Используйте 32 калибра парацентеза иглы, чтобы сделать разрез входа в супер височный квадрант около 5 миллиметров от лимбуса. Туннель через слои роговицы около 3 миллиметров, прежде чем пронзить в передней камере, будьте осторожны, чтобы не коснуться объектива или радужной оболочки глаза. Свяжите иглу медленно, чтобы освободить около одного-двух микролитров акливого юмора из передней камеры через туннель и ждать около восьми минут, чтобы еще больше уменьшить внутриглазное давление.
Измерьте контралатеральный контрольный глаз, чтобы определить давление. Вставьте стеклянный микропипют, предварительно загруженный силиконовым маслом, через туннель роговицы в переднюю камеру с скошенной лицом вниз в поверхность радужной оболочки глаза. Нажмите шприц поршень медленно вводить силиконовое масло в передней камере, пока капля масла охватывает большую часть поверхности радужной оболочки, примерно от 2,3 до 2,4 миллиметра в диаметре.
Оставьте микропипет в передней камере еще на 10 секунд, прежде чем снять его медленно. Аккуратно нажмите верхнее веко, чтобы закрыть разрез роговицы, чтобы свести к минимуму утечку силиконового масла. А затем нанесите антибиотик мазь на поверхность глаза.
Держите мышь на грелке до полного выздоровления от анестезии. Чтобы удалить силиконовое масло из передней камеры, анестезировать мышь, а затем проверить на отсутствие реакции на щепотку ног, чтобы определить анестезию прочность и отсутствие движения усов или хвоста. Поместите мышь на хирургической платформе и закрекрете ее в боковом положении лентой.
Нанесите одну каплю гидрохлорида 5%пропаракаина на роговицу, чтобы уменьшить ее чувствительность. Используя заранее изготовленную иглу парацентеза 32 калибра, сделайте два разреза в височном квадранте роговицы между примерно двумя и пятью часами на краю капли силиконового масла. Вставьте 33 калибра орошения иглы подключены к орошения раствор через один разрез роговицы на максимальной скорости.
Вставьте еще 33 калибра дренажной иглы прилагается к шприцу без поршеня через другой разрез роговицы, чтобы силиконовые капли масла для выхода из передней камеры при орошении с орошаемым раствором. Свями дренажную иглу затем иглу орошения. Используйте стеклянный микропайп, подключенный к шприцу Гамильтона, чтобы ввести пузырь воздуха в переднюю камеру, чтобы сохранить свою нормальную глубину и нажать, чтобы закрыть разрез роговицы.
Нанесите антибиотик мазь на оба глаза и держать мышь на грелке восстановления до полного восстановления после анестезии. Поместите мышь в индукционной камере. Обезболить его, как описано в рукописи и сохранить его роговицы влажной, применяя искусственные слезы на протяжении всей процедуры.
Подождите около 15 минут, чтобы позволить зрачку полностью расшириться. Измерьте IOP обоих глаз с помощью тонометра в соответствии с инструкциями по продукту. Принесите тонометр рядом с глазом мыши, сохраняя расстояние от кончика зонда до роговицы мыши примерно на три-четыре миллиметра.
Нажмите кнопку измерения шесть раз, чтобы создать одно чтение и получить три машинных показаний от каждого глаза, чтобы приобрести среднее IOP. Выполните иммуногистохимию цельностойкой сетчатки сетчатки клетки подсчета оптических нервных полутонких секций и количественной оценки выживших аксонов на животных, принесенных в жертву через восемь недель после инъекции силиконового масла. Внутриглазное давление глаз мыши с силиконовыми каплями масла, размером более 1,6 миллиметра, измерялось один раз в неделю в течение восьми недель после однократного впрыска силиконового масла.
Давление глаза, получаюющего масло, оставалось высоким, в основном удвоив давление контралатерального контрольного глаза, указывая на эффективную блокировку зрачка. В другой группе мышей, силиконовое масло было смыто из передней камеры через две недели после инъекции. После ожидания в неделю, чтобы роговица восстановиться, внутриглазное давление вернулось в нормальное русло, так же, как контрольный глаз.
Для определения воздействия силиконового масла индуцированной глазной гипотензии на клетки ганглия сетчатки, выживших сомата в периферических областях сетчатки целые крепления была количественно RBPMS окрашивания показаны драматические смерти клеток ганглия сетчатки после инъекции силиконового масла. Уцелевшие аксоны в зрительном нерве полутонкие поперечные сечения были количественно ПБД окрашивания восемь недель после инъекции. Существовал большой аксон дегенерации в силиконовом масле индуцированной глазной гипертензии.
Для определения изменения сетчатки животных можно издать с помощью SLOOCT. Визуальную функцию животных можно посвидеть по рисунку ERG и OKR, а также. Эта модель глазной гипертензии облегчит исследование высокого IOP индуцированных глаукометров нейродегенерации.
Он также может быть использован для тестирования перспективных нейропротекторной терапии преклинически.
