小鼠脚垫接种模型，研究病毒引起的神经炎反应

该协议允许在病毒感染期间研究小鼠周围神经系统神经刺激反应的启动和发展。有了这个模型，感染从外围到周围和中枢神经系统的距离更大，从而可以最大限度地评估神经刺激反应的动力学。将五到七周大麻醉的 C57BL/6 小鼠置于手术垫上的 supine 位置后，确认对踏板反射缺乏反应。

并使用 100 到 180 砂砾磨板，用大约 20 次板的通行证轻轻擦擦脚跟和行走垫之间一个后脚垫的厚大皮肤。然后使用细钳慢慢剥下被磨损分离的地层角膜，以暴露地层巴萨勒。轻轻混合后，在磨损的脚垫上涂抹20微升的合适滴度病毒。

仅在控制动物的磨损脚垫中同时进行模拟接种。每次应用后，用针头轴轻轻擦脚垫10次，便于每10分钟吸附一30分钟。当磨擦脚垫干燥时，让小鼠通过监测恢复，直到胸骨卧放，然后将动物放入单独的笼子进行临床随从和取样。

在适当的实验时间点，收集病毒暴露的器官，包括心脏，肺，脾脏，胰腺，肝脏，肾脏和膀胱到单独的1.5毫升微管的冰上。然后收获脚跟和行走垫之间的磨光脚垫，将样品放入单独的1.5毫升微管的冰上。接下来，将鼠标放在易发位置，用70%乙醇将毛皮淋湿。

要露出椎柱，在骨盆区域做一个小切口，将皮肤从后肢剥到头部。要切除前肢和后肢，请使用剪刀与两侧的脊柱平行并靠近脊柱。并移除头骨底部的头部。

用剪刀把头骨从前体巨子打开到前骨。并使用钳子向横向拉开头骨。然后用钳子轻轻地挖出大脑，把大脑放入冰上1.5毫升的微管中。

使用弯曲的剪刀清洁肌肉、脂肪和软组织的脊柱，并切除尾巴。然后将完整的脊柱放入15毫升的无菌冰冷PBS管中，在冰上不超过3小时。解剖后，将脊髓转移到组织培养盘中，以便去除剩余的软组织。

使用剃须刀刀片在 S2、L1 和 T1 椎骨的脊柱上进行三次横向切口。将碎片转移到含有无菌冰冷 PBS 的单个 15 毫米餐具中。跟踪和标记段的原点，供以后分析。

接下来，使用钳子将一个段的侧向上固定，并使用剃须刀刀片将单个纵向切口穿过中线，将柱分成两半。将两半放在一个新的培养皿中，在原始方向上含有新鲜、无菌的冰冷 PBS，以便能够区分脊柱的左右两侧。在解剖显微镜下，使用细钳将脊髓从脊椎的两半中轻轻剥到骨管方向。

然后将两个脊髓的两半放在单独的1.5毫升微管中，在冰上含有500微升的无菌冰冷PBS。要露出背根结节，请轻轻地将脑膜从脊柱的一侧取出到另一侧。将裸露的白色脊柱神经从脊柱中拉出。

从脊椎部分收获圆形、透明的后根结节，成为15毫米的冰冷PBS培养皿。并收集同性与反面的后根结节，正如刚刚证明的。从另外两个脊柱段采集脊髓神经和后根结节后，以高速离心所有组织管。

然后吸进超自然剂，将样品在液氮中闪冻，储存在零下80摄氏度，直到均质。对于组织均质化，在称出每个样品的100毫克之前，先将冷冻组织管解冻在冰上。转移到含有无菌珠子和500微升放射性免疫沉淀测定缓冲液的两毫升微离心管中。

接下来，以20个周期/秒的室温在室温下将组织以20个周期/秒中断两分钟，然后是1分钟的等待期，20个周期/秒，再中断两分钟。在第二轮均质化后，以高速离心组织，然后将每个上经剂的500微升转移到一个新的适当标记的管中。储存在零下20摄氏度，直到下游分析。

在控制脚垫中可以看到磨损的站点。作为愈合过程的一部分，地壳在磨损地点形成是典型的。相比之下，接种假狂犬病的小鼠在人道终点处表现出严重炎症，其特点是肿胀和发红。

对接种的脚垫和后根结节进行组织病理学检查，发现伪狂犬病足部部分内表皮坏死和严重皮肤炎症。在受感染的 DRG 部分也观察到嗜中性粒细胞的渗透。与感染后7小时和82小时的对子相比，在感染的小鼠的脚垫和后根结节中测量了G-CSF蛋白表达显著增加。

与对子相比，在感染伪狂犬病小鼠的脊髓、大脑、心脏和肝脏组织感染后82小时也观察到显著的G-CSF水平。此外，从感染后24小时开始，在所有被检测的伪狂犬病小鼠的组织中检测到相当水平的IL-6。在垂死状态下，在脚垫、后根结节、脊髓和大脑中检测到伪狂犬病。

在伪狂犬病感染小鼠的后根结节神经元中，用高细胞质表达的psuedorabies糖蛋白gB。为了确保成功感染，重要的是，一个列中的病毒液滴不会从磨损的足垫下降。这种动物模型可以起到平台作用，测试抗炎和抗病毒药物的疗效，以防止病毒引起的周围神经病变。