Y-27632 丰富成人皮肤组织中人类黑色素细胞的产量

基于细胞的协议的一般目标是分离和培养人类黑色素细胞，改善传统方法的缺点。从新方法中，我们可以在相对较短的时间内，基于材料和设备获得更多的原发性黑色素细胞。本协议中使用的人体组织是新鲜成人皮肤组织丢弃从割礼手术在医院和处理根据指南的机构的人研究伦理委员会编号2015120401，日期2015年5月12日。

这是所有必需试剂的显示。提前准备无菌工具和材料，将组织放入盘中，用 75%乙醇清洗组织 30 秒，用洗涤溶液将组织切成方便的碎片，并用手术刀片将组织刮掉以去除脂肪层。将真皮侧向下的组织压平，每毫升添加 2.5 毫克的空间溶液到皮肤组织。

一夜之间在四摄氏度的温度下盖住并存放这些碎片。第二天，从真皮中剥离表皮，立即将表皮转移到另外三个盘子中，用洗涤溶液将0.05%的三辛在37摄氏度的水浴中孵育30分钟。添加中和溶液的相等体积。

上下移液 10 到 15 次。通过 100 微米混搭过滤器传递溶液。在200倍g下离心5分钟，将上流液重新悬浮在10毫升的tiva介质中。

加入 10 微米 Y-27632。在显微镜下标记信息，这是视野。它显示了在37摄氏度的培养箱中漂浮在培养基的培养中。

此视图显示第二天单元格开始连接菜底的视图。第九天的观点显示，黑色素细胞存在明显的沉积。取出上一液洗涤细胞用PBS添加两毫米0.05%trypsin孵育细胞两分钟添加两毫升的中和溶液。

在200次g下离心5分钟。用 10 毫米的 tiva 介质慢慢重新悬挂上一提液。每两天更换一次介质。

这些图片显示了一个示意图的通过视图，因此在图中介绍了新方法和传统方法。组织制备和新方法消化的过程与传统方法相同。唯一的区别是，分离的脂肪细胞在她的tiva介质中接种了10分钟，存在10微米Y-27632。

两天后更换介质与 tiva 介质没有补充在 Y-27632.这个面板显示了由传统方法顶排和新方法底部行准备的黑色素细胞的代表性图像，在第三天、第六天和第8天，我们在第三天、第六天和第八天调用黑色素细胞的数量，我们发现新方法使黑色素细胞的产量增加了大约五倍。八天后，我们做了打，并计算每道菜的黑色素细胞的数量。

结果表明，新方法分离的黑色素细胞数量比传统方法多。Ki67站确认，用新方法分离的黑色素细胞通常可以增殖，更重要的是，我们用新方法获得了黑色素细胞的正常功能。我们从隔离区最初通过后检查了黑色素细胞的纯度。

一段黑色素细胞代表MITF表达，只表示在黑色素细胞。我们发现近100%细胞对MITF呈阳性，表明在第一次通过后获得的纯黑色素细胞。测试与新方法隔离的黑色素细胞可以正常工作。

我们在体外用力冷却了超过90个黑色素细胞，并观察到力冷却可以诱导黑色素细胞的色素沉着。将这些数据放在一起表明，从新方法中分离出的黑色素细胞通常会产生色素沉着。如上述皮肤所述，原发性黑色素细胞在培养中扩展，已很容易用于实验室研究和临床应用。

在两天前将ID Y-27632报告为初始培养基后，可显著增加黑色素细胞的外培养。总之，我们成功地建立了一种新的简单和高效的方法，从成人组织中分离纯原发性黑色素细胞。