动态夹紧可以修改或引入任何膜电流到神经元。我们引进并修改钠钾泵和持久性钠电流,使其成为水痘的活心内膜。使用动态灯可以完全控制实时引入神经元的任何电流的动态和振幅的击键。
实时交互系统(如动态夹子)的发展是所有 BMI 研究的基础。细胞研究神经元和网络的电活动的各个方面都可能受益于动态夹具的使用。这项技术的主要挑战是开发神经元的实时模型,并校准选择用于研究的神经元的动态抽筋调整。
要将结石 7 与水痘神经线隔离,请将黑色树脂线解剖盘中填充约一厘米的冰镇盐水,辅以氯化钠、氯化钾、氯化钙、D-葡萄糖和 HEPES,并固定在腔室的冷麻醉水痘背侧。使用20倍放大倍的立体显微镜,采用斜光引导照明和5毫米弹簧剪刀,在身体第三部分的体壁上进行至少三厘米长的纵向切割。使用引脚拉开身体壁组织,暴露内部器官和吸血,以获得更好的视图。
隔离一个个体的中体结队7。使用锋利的五号钳子帮助引导切口和保持鼻窦,使用剪刀打开神经线所在窦,小心地将鼻窦以圆度和发泄方式分裂。将鼻窦连接到结石中产生的两个双边神经根部,切开结肠和结肠结缔神经束,从体内取出结肠,横向切开根部,直线切至从鼻窦中浮出的位置。
使用旧钝五钳,以确保鼻窦条和松散的组织与缩短的米努蒂安昆虫针通风侧在明确的树脂衬里培养皿。将轮状和烧结连接物固定在尽可能远离结石的地方,并牢固地固定根部。将立体显微镜的放大倍数提高到40倍或更高,并调整倾斜照明,使神经元细胞体很容易在腹膜下方的结肠侧观察到。
使用微型剪刀,开始切割结石一侧根部之间的松散腹膜护套,横向向切到另一侧,并确保剪刀刀片表面,而不会伤害护套正下方的神经元细胞体。从中线的横切处进行类似的表面切口,并使用精细的五号钳子将一个烧灼的横向护套皮瓣从结石中拉开,以便每个切口被切除。当两个皮瓣都切除时,两个心脏内周应暴露。
将盘子放在录音设置中,在室温下以每分钟 5 毫升的流量将样品与盐水超融合。要识别记录设置中的内窥镜,请选择一个 50 到 100 倍的放大倍率,下面带有暗场照明,并根据其规范位置在中体结石 7 的后部位置定位双边对的 HN 7 神经元。接下来,使用微型操纵器放置一个尖锐的微电极,里面装满了两个醋酸摩尔钾和20毫摩尔氯化钾微电极,非常接近目标细胞体,并使用神经生理电表持续观察记录的潜力。
将这种电位设置为零毫伏,然后使用微电极穿透神经元,使用操纵器沿着其长轴缓慢驱动电极。使用 100 毫秒的电表嗡嗡声功能,直到观察到膜电位的负变化和剧烈的尖刺活动。在不连续电流夹紧模式下,将电表设置为至少三千赫,以同时记录膜电位,同时将电流传递到神经元。
使用示波器监控电极的设置,并使用稳定的电流喷油器将负0.1纳米的稳电流注入一到两分钟,以稳定记录。HN 7 神经元可以通过其特有的尖峰形状和弱爆裂活动来识别。对于动态夹具传导和当前实现,打开专为数字信号处理板构建的动态夹紧软件程序。
当模型运行时,将最大泵电流设置为 0.1 到 0.2 纳米,并逐渐增加持久钠电流的最大传导率,直到随后出现常规爆裂。系统地以0.1纳米增量对这些电流进行共变,以达到泵电流的最大输出,以一纳米西门子增量为持续钠电流的最大传导率,并评估这些增量对峰值频率、爆裂间隔、爆裂持续时间和爆裂期的影响。以特定的固定值保持钠电流的最大传导率,并在一系列最大泵电流上以一纳米增量扫过,以支持定期爆裂活动,然后再将钠电导的固定值增加一纳米西门子,并扫过第二个最大泵电流范围。
对于每个实施的参数对,收集包含至少 8 次突发的数据,以便对峰值频率、间爆裂间隔、爆发持续时间和爆发周期进行可靠的平均测量。然后从几个额外的神经元收集数据,作为刚刚证明生成复合图。使用此模型,外泵电流在整个爆裂周期中振荡,因为钠的内部浓度围绕基线水平。
此泵电流在爆裂阶段导致爆裂终止。泵流产生的超极化在爆发间歇期间激活向内电流的超极化。实时心脏内脏模型表明,心脏内脏中持续的钠电流导致大量钠进入,严重影响钠的内部浓度,从而影响泵流。
由于持续钠电流在相对负膜电位下活动,因此在爆裂间隔和间歇期间与泵流相对应。如前所述,通过与动态夹子共同添加持久性钠和钠钾泵电流,在具有活力的心脏内膜中恢复了强健的爆裂。初步结果表明,这两个电流之间具有很强的复杂相互作用,可以使用该模型进一步探索。
一个成功的实验取决于结节的良好解冻和精心引导的驱动,穿透和微电极的嗡嗡声。我们通过实施依赖钠的泵电流来增强动态夹,该泵电流通过估计离子的细胞内浓度来计算。这种估计值可用于将任何离子依赖电流注入神经元。