在大鼠中准备去细胞化肾脏脚手架

该协议使得在老鼠模型中使用肾脏开发血管化脚手架成为可能。肾脏是最适合分化干细胞脚手架的器官。这是一个非常成功的肾脏去细胞化协议。

它有效地去除核，对 ECM 超结构的破坏最小。该技术可应用于移植医学和组织工程。示范手术的将是金珠孝，一个MD/博士的整形外科副教授从我的实验室。

首先，将八周大的斯普拉格·道利老鼠放在暖垫上，并在直肠中放置直肠温度计探头，以监测核心温度。给老鼠麻醉后，将其置于超原位置，用胶带将四肢固定在桌子上。用杀菌肥皂剃光腹部并清洁腹部。

涂抹2%贝他丁至少一到两分钟，然后用70%乙醇溶液擦除。重复此序列三次。用无菌的、有芬芳的窗帘覆盖手术场。

做一个垂直的腹部切口，并暴露左肾，输尿管，腹主动脉，和劣质静脉卡瓦。在切割脚踏车之前解剖组织。通过将PBS与每毫升肝素约10个单位混合，为每只大鼠准备50毫升的灌注溶液。

将等量 8% PFA 与 PBS 混合，以制作 4% PFA 解决方案。疯狂地伸展垂直腹部切口，在切割时确保剪刀远离器官，以避免损伤。继续切口通过肋骨笼，然后通过抬起胸骨切开隔膜。

用 Allis 夹子将松动的皮肤皮瓣从道路上拉开，并通过用钳子撕裂任何结缔组织来释放心脏。打开 PBS 线，确保针头进入左心室之前，它流动。用钝钳轻轻握住心脏，并用血压器控制针头。

针头的插入不应超过四分之一英寸。在用针头和血浆支撑心脏的同时，找到合适的中庭，用虹膜切除术剪刀穿过心脏。将血化体放在大鼠身上，确保针头仍位于心脏内。

如果肾脏和肝脏中仍有可见的血液，请继续灌注 PBS 四分钟或更长时间。用腹部主动脉和劣质静脉卡瓦收获左肾。利盖特尿管，胸动脉，优越的静脉卡瓦，和腹部主动脉的分支。

将器官在 10 厘米的培养皿中保持 DPBS 中的水分。用23口径导管调节腹部主动脉和劣质静脉卡瓦。要去除残留血液，将管子与围骨泵连接起来，在 5 rpm 和 37 摄氏度下用 500 毫升 DPBS 和每毫升肝素 16 个单位清洗器官 90 分钟。

要去细胞化肾脏，用1%Triton X-100灌注3小时，然后用0.75%SDS溶液6小时，持续压力为40毫升汞。要去除残留的 SDS，在蒸馏水中用 1% 青霉素将样品灌注 18 小时，然后用无菌 DPBS 和每毫升肝素 16 个单位 90 分钟。老鼠肾的总形态是深红色。

去细胞化后，肾脏变得苍白和半透明。残余基因组DNA在去细胞化的肾脏脚手架中被量化，与原生肾脏相比，证实组织基因组DNA在去细胞化后几乎被消除。在14个病例中，控制的平均DNA含量为每微升115.05毫微克，去细胞化脚手架的平均DNA含量为每微升1.96纳米。

总共有98.3%的DNA被去除。维持了三维结构，在皮质帕奇马中保留了细胞球状体。将针插入左心室时，应插入不超过四分之一英寸。

任何进一步的插入可能会从另一边出来。我们相信，这项技术将在组织工程领域开辟新的前景。