这部电影的目标是展示我们治疗卵巢功能障碍患者的新方法的程序。卵巢功能在衰老期间逐渐下降，一些病理生理条件，包括卡约型异常、自身免疫性疾病、化疗和放射治疗以及卵巢手术。卵巢储备低的大多数中年妇女对卵巢刺激产生成熟卵母细胞的反应很差。
此外，蚁泡数量少的年轻患者对卵巢刺激的卵巢反应也很差。生育力保护对于为未来怀孕保存潜在的 OCS 非常重要。为了保持生育能力，建立了卵母细胞冷冻保存。
然而，这些卵巢反应不良的患者即使在适当的卵巢刺激后，也能检索到数量非常有限的卵母细胞，导致需要重复昂贵的手术，以确保有足够的卵母细胞来保证一个婴儿。为了解决这些问题，我们最近开发了体外活化，IVA程序，使我们能够刺激卵巢卵泡的早期阶段发展到前腹卵泡阶段。最初的IVA程序可以通过卵巢皮层分裂促进原始、原发和次生卵泡生长，导致河马信号中断。
然后，用Akt信号刺激器进行两天的培养。此程序适用于残留卵泡较少的 POI 患者。然而，这个程序是一个过度治疗的患者谁有多个继发性毛囊。
对于有一些残留的继发性卵泡的患者，我们建立了称为无药物IVA的方法，并且已经测试了仅仅通过破坏河马信号通路来促进二次卵泡生长的可能性。我们还成功通过无毒品 IVA 交付了一些案例。我们已经发布了无药物IVA的外科手术和遵循卵巢刺激的方案。
在这段视频中，我们介绍了无药物IVA所需的实验室方法的细节。我们根据博洛尼亚标准招募了无药物IVA患者。患者可能有多个继发性毛囊。
起初，部分皮层通过腹腔镜检查从一个或两个卵巢中去除。POR患者是那些有中等大小的卵巢。在大多数患者中，我们只从卵巢的一侧或两侧提取部分皮质组织。
提取的关键组织立即被转移到含有 HEPES 缓冲器培养介质的培养皿中，并将这个小组织解剖成小立方体，以发出河马信号中断。此视频中将显示该过程的详细信息。河马信号通路对于保持最佳器官大小至关重要。
这条途径由几个负增长的调节器组成。一旦河马信号中断，YAP的磷酸化水平就会降低，YAP的核水平就会增加， YAP 是基酶级联中的负增长调节器之一。YAP 与 TEAD 转录因子协同作用，以增加下游 CCN 增长因子。
另一方面，球状作用物G-actin的电感聚合，以细丝形式F-actin，对细胞形状的维持和运动非常重要。先前报道的F-actin形成的诱导会破坏河马信号，并诱发人类 HeLa 细胞的过度生长。我们以前报告卵巢分裂增加F-actin的形成，它导致YYP磷酸化水平的降低。
它导致CCN增长因子的表达增加。切割后，这些立方体被移植到剩余的卵巢中。这个过程可以促进残余的次生卵泡生长，并导致成熟卵母细胞的数量增加。
无毒品 IVA 由四个步骤组成。我们已经发布了无药物IVA的外科手术。请参阅有关卵巢皮层提取和自动移植的文献。
在这里，我们展示了无药物IVA所需的实验室方法的详细程序。在第一步，我们展示了卵巢皮层碎片是如何进行的。在第二步，我们展示如何将卵巢皮质立方体加载到设备中进行移植，在这里，我将显示卵巢皮层碎片。
这项研究得到了我们研究所伦理委员会的批准，所有程序都是按照《世界医学会道德守则》进行的。卵巢皮层碎片。此步骤所需的以下工具:一盘、无菌纱布、细剪刀、细钳和手术刀。
我们通常使用这种类型的菜和无菌纱布，但其他产品，如塑料培养皿，玻璃盘等，可能也适合这个程序，任何类型的无菌纱布也适合。然而，我们强烈建议使用这种形状的钳子和手术刀。此外，使用热板来维持无菌窗帘下含有组织位置的盘子的温度。
皮质组织立即转移到含有 mHTF 的盘中。拍摄与患者姓名相关的照片，以与患者的数据相关联。记录组织的大小、厚度和状况。
去除残留的美杜拉组织。在组织分裂之前，取出梅杜拉组织。将皮层放在无菌纱布上。
如视频中所示，纱布用介质润湿。在此过程中，在皮层表面干燥之前，用一次性移液器涂抹介质。用微剪刀取出残留组织，直到厚度达到一到两毫米。
在 POR 患者中，继发性毛囊位于离皮层表面一毫米以下的地方，因此不会使组织厚度小于一毫米。将每个组织皮层的一侧切成一个乘一个乘以五毫米的条状物，进行组织学分析，以确定残留卵泡的存在。将这条带子放入带培养介质的 1.5 毫升管中，保持在 4 摄氏度，直到固定。
准备卵巢皮质立方体。去除梅杜拉组织后，卵巢皮质因河马信号中断而支离破碎。首先，用手术刀将皮层切成一个接一个的10毫米条。
然后将这些条形切成一毫米立方体小立方体。在介质中，组织很滑，难以切割。为了便于切割，通过按下手术刀而不是拉扯来切割条带。
切割后，数数立方体并准备自动移植。为了避免介质中渗透压力的变化，在组织自动移植之前适度添加介质。对于卵巢自动移植，使用管状设备可以更容易地加载。
此步骤包含两个步骤。以前，卵巢碎片在腹腔镜下使用钳子逐一移植。然而，手术大约需要三到四个小时才能完成。
在此过程中，我们使用由内注射器和外缸制成的罐状装置。这是一个简单的形状和轻量级。此外，此设备的尖端为圆形。
没有可避免移植部位损坏的尖锐点。使用这种类型的设备允许一次将多达 20 到 30 个立方体带到植入站点。这导致有效的移植和减少手术时间。
加载卵巢皮质碎片。IVA坎努拉的准备工作。准备IVA坎努拉，用mHTF清洗此设备。
重复吸气和放电介质几次。通过吸气约100微升的介质来填充罐头。这是为了避免立方体在组织碎片加载过程中拔出。
加载皮质立方体。用细钳挑选一个立方体，并将其放入罐头的尖端。自动移植立方体的数量取决于移植部位的大小。
重复逐个加载立方体，直到您达到目标编号。加载立方体后，小心地将管子传递给外科医生。如果移植部位尚未准备好，则包含卵巢立方体的管状部分将由手指保持，以避免立方体温度降低。
我们已经报告了无药物IVA的临床结果。请参阅已发表的关于临床结果的论文。此实验室协议要求一名患者需要 30 到 50 分钟。
卵巢皮层碎片化的平均时间为10至20分钟，将这些碎片加载到IVA坎努拉的平均时间为20至30分钟。这取决于组织大小，但几乎所有的患者都可以在这个平均时间完成。结论。无药IVA是针对卵巢储备减少的 POR 患者的不孕症治疗新方法。
这些实验室协议可减少手术所需的时间和移植过程中碎片的丢失。无毒IVA的实验室技术可以成为卵巢组织培养未来应用的基础，在不嫁接的情况下获得成熟的卵母细胞。
