Bu filmin amacı yumurtalık disfonksiyonu olan hastalara yeni yaklaşımımızın prosedürünü göstermektir. Yumurtalık fonksiyonu yaşlanma sırasında ve karyotip anormalliği, oto immün hastalıklar, kemoterapi ve radyasyon tedavileri ve yumurtalık ameliyatları gibi bazı patofizyolojik durumlar sırasında giderek azalır. Yumurtalık rezervi düşük olan orta yaşlı kadınların çoğu, olgun oositler vermek için yumurtalık stimülasyonuna zayıf yumurtalık tepkisi gösterdi.
Ayrıca, antral folikül sayısı düşük olan genç hastalarda da yumurtalık stimülasyonuna karşı zayıf yumurtalık yanıtı gösterildi. Doğurganlık koruması, potansiyel OCS'yi gelecekteki hamilelik için kurtarmak için önemlidir. Doğurganlığın korunması için oosit kriyoprezervasyonu kuruldu.
Bununla birlikte, bu zayıf yumurtalık yanıtı hastaları, uygun yumurtalık stimülasyonundan sonra bile çok sınırlı sayıda oosit alabilir ve bir bebeği garanti etmek için yeterli sayıda oosit sağlamak için tekrarlanan pahalı prosedürlerin gerekliliğine yol açabilir. Bu sorunları çözmek için, yakın zamanda yumurtalık foliküllerinin erken evresini antral folikül öncesi evreye kadar uyarmamızı sağlayan in vitro aktivasyon, IVA prosedürünü geliştirdik. Orijinal IVA prosedürü, yumurtalık korteksi parçalanması ile ilkel, birincil ve ikincil folikül büyümesini teşvik edebilir ve su aygırı sinyal bozulmasına yol açabilir.
Bunu daha sonra Akt sinyal uyarıcısı ile iki günlük kültleme takip ediyor. Bu işlem az sayıda kalıntı folikül içeren poi hastaları için uygundur. Ancak bu işlem birden fazla sekonder folikülleri olan hastalar için aşırı bir tedavidir.
Bazı kalıntı sekonder folikülleri olan hastalar için ilaçsız IVA adı verilen yöntemi kurduk ve sadece suaygırı sinyal yolunu bozarak sekonder folikül büyümesini teşvik etme olasılığını test ettik. Ayrıca ilaçsız IVA ile başarılı teslimat durumlarımız oldu. İlaçsız IVA'nın cerrahi prosedürünü ve yumurtalık stimülasyonunu takip protokolünü zaten yayınladık.
Bu videoda ilaçsız IVA için gerekli laboratuvar yöntemlerinin detaylarını sunuyoruz. Bologna kriterlerine göre hastaları ilaçsız IVA için işe aldık. Hastalarda birden fazla sekonder folikül olabilir.
İlk başta, korteksin bir kısmı laparoskopi ile bir veya her iki yumurtalıktan çıkarıldı. POR hastaları orta boy yumurtalıkları olanlardır. Hastaların çoğunda kortikal dokuların sadece bir kısmını bir veya her iki taraftaki yumurtalıklardan çıkardık.
Çıkarılan kritik dokular hemen HEPES tamponlu kültür ortamı içeren bir kültür çanağine aktarıldı ve bu küçük dokuyu su aygırı sinyal bozulması için küçük küpler halinde parçalara ayrıştırıldı. Prosedürün ayrıntıları bu videoda gösterilecektir. Su aygırı sinyal yolu, optimum organ boyutunu korumak için gereklidir.
Bu yol birkaç negatif büyüme düzenleyiciden oluşur. Suaygırı sinyali bozulduğunda, kinaz çağlayanında hareket eden negatif büyüme düzenleyicilerinden biri olan YAP'ın fosforilasyon seviyeleri azalır ve YAP'ın nükleer seviyeleri artar. YAP, aşağı akış CCN büyüme faktörünü artırmak için TEAD transkripsiyon faktörleri ile birlikte hareket eder.
Öte yandan, globüler etkinin, G-actin'in filamentli forma, F-actin'e aktisin polimerizasyonu hücre şekli bakımı ve hareket için önemlidir. Daha önce bildirilen F-actin oluşumu suaygırı sinyalini bozar ve insan HeLa hücrelerinde aşırı büyüme indükler. Daha önce yumurtalık parçalanmasının F-aktüer oluşumunu artırdığını ve YAP'ın fosforilasyon seviyesinin düşmesine yol açtığını bildirmiştik.
CCN büyüme faktörünün daha fazla ifade etmesine yol açar. Kesildikten sonra, bu küpler kalan yumurtalığa aşılanır. Bu prosedür artık ikincil folikül büyümesini teşvik edebilir ve olgunlaşmış oosit sayısının artmasına neden olabilir.
İlaçsız IVA dört adımdan oluşur. İlaçsız IVA için cerrahi prosedürü zaten yayınladık. Yumurtalık korteksi ekstraksiyonu ve otomatik aşılama için lütfen bu literatüre bakın.
Burada ilaçsız IVA için gerekli laboratuvar yöntemlerinin ayrıntılı prosedürlerini gösteriyoruz. Birinci adımda yumurtalık korteks parçalanmasının nasıl yapıldığını gösteriyoruz. İkinci adımda, yumurtalık kortikal küplerinin nakil için cihaza nasıl yüklendiğini gösteriyoruz, burada yumurtalık korteksi parçalanmasını göstereceğim.
Bu çalışma enstitümüzün etik kurulu tarafından onaylanmış ve tüm prosedürler Dünya Tabipler Birliği Etik Kuralları'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Yumurtalık korteksi parçalanması. Bu adım için aşağıdaki araçlar gereklidir: bir yemek, steril gazlı bez, ince makas, ince forseps ve neşter.
Genellikle bu tür bir tabak ve steril gazlı bez kullanırız, ancak plastik Petri kabı, cam tabak, vesaire gibi diğer ürünler de bu prosedür için uygun olabilir ve her türlü steril gazlı bez de uygundur. Bununla birlikte, bu forseps ve neşter şeklinin kullanılmasını şiddetle tavsiye ediyoruz. Ek olarak, doku içeren yemeklerin sıcaklığını korumak için sıcak plakayı kullanın Steril örtünün altına yerleştirin.
Kortikal dokular hemen mHTF içeren çanağa aktarılır. Hastanın verileriyle ilişkili olarak hastanın adının olduğu bir resim çekin. Dokunun boyutunu, kalınlığını ve durumunu kaydedin.
Kalan medulla dokusunu çıkarın. Doku parçalanmadan önce medulla dokusunu çıkarın. Korteksi steril gazlı bezin üzerine koy.
Videoda gösterildiği gibi, gazlı bez orta ile nemlendirilir. Bu işlem sırasında, korteks yüzeyi kurumadan önce tek kullanımlık pipet ile orta uygulayın. Kalınlık bir ila iki milimetreye ulaşana kadar kalan dokuları mikro makasla çıkarın.
POR hastalarında, sekonder foliküller korteks yüzeyinden bir milimetreden daha derin bulunur, bu nedenle dokuları bir milimetreden daha az kalınlıkta yapmayın. Kalıntı foliküllerin varlığını belirlemek için histolojik analiz için her dokunun korteksinin bir tarafını tek tek beş milimetre ölçen bir şerit halinde kesin. Bu şeridi kültür ortası ile 1,5 mililitre tüpe koyun ve sabitleyene kadar dört santigrat derecede tutun.
Yumurtalık kortikal küplerinin hazırlanması. Medulla dokusunun çıkarılmasından sonra, yumurtalık kortikal su aygırı sinyal bozulması için parçalanır. İlk başta, korteksi neşter kullanarak tek tek 10 milimetrelik şeritler halinde kesin.
Sonra bu şeritleri bir milimetre küp küp küçük küpler halinde kesin. Ortamda, doku kaygandır ve kesilmesi zordur. Kolay kesim için şeritleri üzerine çekmek yerine neşterin üzerine bastırarak kesin.
Kestikten sonra, küp sayısını sayın ve otomatik aşılamayı hazırlayın. Ortamdaki ozmotik basınç değişikliklerini önlemek için, doku otomatik aşılamadan önce ortamı ölçülü olarak ekleyin. Yumurtalık otomatik greftleme için, kolay yükleme için kolay yükleme sağlar, bir cannula şeklinde cihaz kullanımı.
Bu adım iki adım içerir. Daha önce yumurtalık parçaları laparoskopi altında önseçimler kullanılarak tek tek nakledilmiştir. Ancak ameliyatın tamamlanması yaklaşık üç ila dört saat sürdü.
Bu prosedürde, bir iç şırıng ve bir dış silindirden yapılmış cannular şeklinde bir cihaz kullanıyoruz. Bu basit bir şekil ve hafiftir. Ek olarak, bu cihazın ucu yuvarlak bir şekildedir.
Nakil bölgesinin zarar görmesini önleyen keskin bir nokta yok. Bu tür bir cihazın kullanılması, implantasyon bölgesine aynı anda 20 ila 30 küp getirilmesine izin verir. Bu da ameliyat süresinde verimli transplantasyona ve azalmaya yol açar.
Yumurtalık kortikal parçaları yükleniyor. IVA cannula hazırlanması. IVA cannula'yı hazırlayın ve bu cihazı mHTF'de yıkayın.
Aspirat ve deşarj ortamını birkaç kez tekrarlayın. Ortamın yaklaşık 100 mikrolitresini aspire ederek bir cannular'ın ucunu doldurun. Bu, doku parçası yüklemesi sırasında küplerin dışarı çıkmasını önlemektir.
Kortikal küpler yükleniyor. İnce tokalardan bir küp seçin ve cannular'ın ucuna koyun. Otomatik aşılanmış küplerin sayısı nakil bölgesinin büyüklüğüne bağlıdır.
Hedef sayıya ulaşana kadar küpleri tek tek yüklemeyi tekrarlayın. Küpleri yükledikten sonra, damarı cerraha dikkatlice geçirin. Aşılama bölgesi hazır değilse, küplerin sıcaklığının düşmesini önlemek için cannular'ın yumurtalık küpleri içeren kısmı parmakla tutulmalıdır.
İlaçsız IVA'nın klinik sonuçlarını zaten bildirdik. Lütfen klinik sonuçlar hakkında yayınlanan makaleye bakın. Bu laboratuvar protokolü bir hasta için 30 ila 50 dakika gerektiriyor.
Ortalama süre yumurtalık korteksi parçalanması için 10 ila 20 dakika ve bu parçaları IVA kanülüne yüklemek için 20 ila 30 dakikadır. Bu doku büyüklüğüne bağlıdır, ancak hemen hemen tüm hastalar bu ortalama sürede bitirilebilir. Sonuç. İlaçsız IVA, yumurtalık rezervi azalan POR hastaları için kısırlık tedavisinin yeni bir yaklaşımıdır.
Bu laboratuvar protokolü hem ameliyat için gereken sürenin azalmasına hem de nakil sırasında parça kaybına yol açar. İlaçsız IVA'nın laboratuvar tekniği, greftleme olmadan olgun oositler elde etmek için yumurtalık doku kültürünün gelecekteki uygulamasının temeli haline gelebilir.
