该协议很重要，因为它允许研究大型哺乳动物的淋巴系统，从而使我们更接近于了解人类的淋巴系统。这种技术有两个优点。将痕迹引入大蓄水池可避免对大脑造成任何直接损害，这与脑室内注射形成鲜明对比。
其次，这是一种直接的方法，可以立即可视化插管并知道它是否成功。首先将猪放在俯卧的位置。触诊其头部和颈部的后部，以定位和标记枕嵴，第一胸椎的脊柱以及每只耳朵的底部。
沿着纵轴在波峰和椎骨之间画一条直线。然后沿着头骨的底部，从顶部到每个耳朵的底部画两条线。小心地夹住动物的尾巴，观察反射，看看它是否处于深度睡眠状态。
首先使用带有21号刀片的手术刀沿着纵线向下到肌肉做一个真皮切口，然后沿着肩膀进一步延伸两个垂直切口，每个切口长10至15厘米。从枕嵴开始，沿着线向下做真皮切口，直到每只耳朵的底部。使用解剖学镊子抓住枕嵴处形成的皮肤角，然后将手术刀刀片轻轻地放在筋膜上，将皮肤与下面的肌肉分开。
沿着五个切口中的每个切口切除皮肤，以可视化斜方肌的某些部分。使用手术刀做一个大约一厘米深的纵向切口，其中斜方肌在中线聚集在一起，然后使用直镊子和弯曲的手术镊子的组合沿着肌肉的纵向切口进行钝解剖，这将分离斜方肌的腹部和潜在的半脊柱头炎双发性肌。用手术刀切断任何持续存在的肌纤维，并继续进行钝性解剖，直到半脊柱头肌复合体变得可见。
沿着颅骨的后侧移动，切断斜方肌和半脊柱头炎双发性肌肉的起源。要纵向分离两块肌肉，请使用手术镊子进行钝性解剖，直到半脊柱头炎复合物完全可见。然后使用自保持牵开器收回斜方肌和半脊柱头炎双发性肌肉。
使用手术刀做一个一厘米深的纵向切口，其中半脊柱头状复体的腹部在中线聚集在一起。使用手术钳沿着肌肉腹部之间的纵向切口进行钝性解剖，直到可以触及图谱和轴。沿着颅骨的后侧移动，切断半脊柱头肌复合体的起源。
使用手术刀和钝器解剖将肌肉与下颌骨纵向分开，然后使用另一组自我保留的牵开器来缩回半脊柱头皮炎复合肌。使用手术刀小心地去除图谱与颅底相遇的区域上的任何剩余组织。将一只手臂放在动物的脖子上，一根手指放在地图集和头骨的交界处，然后同时抬起头部并弯曲颈部，同时用手指触诊以露出大水池。
确保一个人抬高并弯曲动物的头部和颈部，而另一个人则触诊大水池，记下其解剖位置。通过硬脑膜以斜向纵轴的角度缓慢而小心地将22号套管引入大蓄水池中，然后将针从套管中缩回并在锁上盖上盖子。首先在套管进入组织的地方涂上超级胶水和加速器，然后涂上牙胶。
等待五分钟，让水泥变硬。小心地从套管上取下盖子。使用10厘米的延伸线将套管连接到IV线抽头的公端，示踪剂。
用手或使用微量输液泵以每分钟100微升的速度缓慢注入示踪剂。取下IV线水龙头并将其替换为盖子。检查示踪剂是否可见套管底部脉动。
然后将沙袋放在动物的脖子下面以保持一些弯曲。松开头部，让动物处于俯卧姿势休息。松开自我保持的牵开器并更换肌肉。
使用手术毛巾夹将皮肤聚集在肌肉上。首先使用纱布，然后用毯子盖住毛巾夹和切口，以限制热量损失。让示踪剂循环所需的时间。
缝合的大脑背表面的宏观图像可以提供对示踪剂在沟和裂缝上的分布模式的详细见解。来自大脑腹侧和侧表面的类似图像可以提供关于颞叶和侧裂中示踪剂分布的信息。使用立体镜产生的更高放大倍率的脑表面图像可以帮助可视化沿动脉PVS中的示踪剂。
宏观冠状脑切片可深入了解示踪剂在半球间裂缝和皮质下示踪剂分布和结构（如海马体和纹状体）中的渗透深度。AQP4、神经胶质纤维酸性蛋白和平滑肌肌肌动蛋白的免疫组织化学染色显示，示踪剂位于PVS内，并移入脑实质。形成PVS外表面的星形胶质细胞足部过程使用AQP4和胶质纤维酸性蛋白染色进行鉴定。
使用凝集素和GLUT-1染色剂对形成PVS内表面的内皮细胞进行染色。SMA染色可识别动脉和小动脉，可用于显示PVS流入沿动脉而不是静脉发生，这构成了正常淋巴功能的基本生理学。展望未来，我们希望在中风和创伤性脑损伤等神经病理学的背景下，以高分辨率探索大型哺乳动物的淋巴系统。
