Bu protokol, büyük bir memelide glimfik sistemin araştırılmasına izin verdiği için önemlidir, böylece bizi insanlardaki glimfik sistemi anlamaya yaklaştırır. Bu tekniğin iki avantajı vardır. Sarnıç magnasına izlerin girmesi, beyinde intraventriküler enjeksiyonların aksine doğrudan herhangi bir hasar görmesini önler.
İkincisi, bu, canülasyonun hemen görselleştirilmesine ve başarılı olup olmadığının bilgilendirilmesine izin veren doğrudan bir yaklaşımdır. Domuzu eğilimli bir konuma getirerek başlayın. Oksipital kreti, ilk torasik omurun omurgasını ve her kulağın tabanını bulmak ve işaretlemek için başının ve boynunun arkasını palpate edin.
Uzunlamasına eksen boyunca tepe ve omurlar arasında düz bir çizgi çizin. Daha sonra kafatasının tabanını takip ederek, tepenin içinden her kulağın tabanına iki çizgi çizin. Hayvanın kuyruğunu dikkatlice kenetleyin ve derin bir uykuda olup olmadığını görmek için bir refleks izleyin.
21 numaralı bir bıçak ile neşter kullanarak uzunlamasına çizgi boyunca kaslara kadar dermal bir kesi yaparak başlayın, ardından omuzlar boyunca her biri 10 ila 15 santimetre uzunluğunda iki dik kesi uzatın. Oksipital kretten başlayarak, her kulağın tabanına kadar olan çizgi boyunca dermal kesiler yapın. Oksipital krette oluşan cilt köşelerini kavramak için anatomik forseps kullanın, ardından cildi alttaki kastan ayırmak için neşter bıçağını fasya üzerinde hafifçe çalıştırın.
Yamuk kasının parçalarını görselleştirmek için beş kesi boyunca cildi resect. Neşteri kullanarak yamuk orta hatta bir araya geldiği yaklaşık bir santimetre derinliğinde uzunlamasına bir kesi yapın, ardından yamuk ve alttaki semispinalis kapit biventer kasının karınlarını ayıracak düz ve kavisli cerrahi tokparlamaların bir kombinasyonunu kullanarak kaslardaki boyuna kesim boyunca künt bir diseksiyon yapın. Kalıcı kas liflerini neşterle kesin ve semispinalis capitis complexus görünene kadar künt diseksiyon yapmaya devam edin.
Kafatasının arka yönü boyunca hareket edin ve yamuk ve semispinalis capitis biventer kaslarının kökenlerini ayırın. İki kası boyuna ayırmak için, semispinalis capitis complexus tamamen görünene kadar künt diseksiyon yapmak için cerrahi tokmakları kullanın. Daha sonra trapezius ve semispinalis capitis biventer kaslarını geri çekmek için kendi kendini koruyan retraktörleri kullanın.
Semispinalis capitis complexus'un karınlarının orta çizgide bir araya geldiği bir santimetre derinliğinde uzunlamasına kesi yapmak için neşteri kullanın. Hem atlas hem de eksen hissedilene kadar kas karınları arasındaki boyuna kesik boyunca çalışan cerrahi önkseçimleri kullanarak künt bir diseksiyon gerçekleştirin. Kafatasının arka yönü boyunca hareket edin, semispinalis capitis complexus kaslarının kökenlerini kesin.
Kası uzunlamasına alttaki omurlardan ayırmak için neşter ve künt diseksiyonu kullanın, ardından semispinalis capitis complexus kaslarını geri çekmek için başka bir kendi kendini koruyan retraktör seti kullanın. Atlasın kafatası tabanıyla buluştuğu bölgenin üzerinde kalan herhangi bir dokuyu dikkatlice çıkarmak için bir neşter kullanın. Bir kolunun hayvanın boynuna, bir parmağınızı da atlasın ve kafatasının ucuna yerleştirin, ardından aynı anda başı yükseltin ve sarnıç magnasını ortaya çıkarmak için parmakla palpe olurken boynu esnetin.
Bir kişinin hayvanın başını ve boynunu yükselttiği ve esnettiğinden emin olun, diğeri ise sarnıç magna için palpe olur ve anatomik konumunu not eder. 22 kalibrelik bir kanül yavaşça ve dikkatlice sarnıç magnasına uzunlamasına eksene eğik bir açıyla takın, ardından iğneyi kanülden geri çekin ve kilidin üzerine bir kapak yerleştirin. Süper tutkal ve damarın dokuya girdiği bir hızlandırıcı uygulayarak başlayın, ardından diş çimentosuz eti uygulayın.
Çimentonun sertleşmesi için beş dakika bekleyin. Kapağı iyice damardan çıkarın. 10 santimetrelik bir uzatma kullanarak damarı IV hattına dokunun.
İzleyiciyi dakikada 100 mikrolitre hızında elle veya mikro infüzyon pompası kullanarak yavaşça enjekte edin. IV hattı musluğunu çıkarın ve kapakla değiştirin. İzleyicinin canül tabanında titreşen görünür olup olmadığını kontrol edin.
Daha sonra biraz esnemeyi sürdürmek için hayvanın boynunun altına kum torbaları yerleştirin. Başı serbest bırakın ve hayvanı dinlenmeye eğilimli bir pozisyonda bırakın. Kendini koruyan retraktörleri serbest bırakın ve kasları değiştirin.
Cildi kasların üzerinde bir araya getirmek için cerrahi havlu kelepçelerini kullanın. Önce gazlı bez ve ardından ısı kaybını sınırlamak için havlu kelepçelerini ve kesiyi örtmek için bir battaniye kullanın. İzleyicinin istenen süre boyunca dolaşmasına izin verin.
Beynin sırt yüzeyinin dikişli makroskopik görüntüleri, izleyicinin sülücü ve çatlaklar boyunca dağılım kalıpları hakkında ayrıntılı içgörüler sağlayabilir. Beynin ventral ve lateral yüzeylerinden elde edilen benzer görüntüler temporal lobdaki izleyici dağılımı ve lateral çatlak hakkında bilgi sağlayabilir. Stereoskop kullanılarak üretilen daha yüksek büyütmenin beyin yüzeyinin görüntüleri, PVS'deki izleyicinin arterler boyunca görselleştirilmesine yardımcı olabilir.
Makroskopik koronal beyin bölümleri, hipokampus ve striatum gibi interhemisferik fissür ve subkortikal izleyici dağılımı ve yapısında izleyici penetrasyonunun derinliği hakkında fikir sağlar. AQP4 için immünohistokimyasal lekeleme, glial fibril asidik protein ve düz kas aktinin, izleyicinin PVS içinde lokalize olduğunu ve beyin parenkimine taşındığını gösterdi. PVS'nin dış yüzeyini oluşturan astrosit ayak prosesleri AQP4 ve glial fibril asidik protein boyama kullanılarak tanımlanır.
PVS'nin iç yüzeyini oluşturan endotel hücreleri lektin ve GLUT-1 lekesi kullanılarak boyanır. SMA lekeleme arterleri ve arteriyolleri tanımlar ve normal glimfik fonksiyonun temel fizyolojisini oluşturan damarlar yerine arterler boyunca PVS akınının meydana geldiğini göstermek için kullanılabilir. İleride, glimfik sistemi inme ve travmatik beyin hasarı gibi nöropatoloji bağlamında büyük memelilerde yüksek çözünürlükte keşfetmeyi umuyoruz.
