Этот протокол важен, поскольку он позволяет исследовать глимфатическую систему у крупного млекопитающего, тем самым приближая нас к пониманию глимфатической системы у людей. У этой техники есть два преимущества. Введение следов в цистерну magna позволяет избежать какого-либо прямого повреждения головного мозга, что контрастирует с внутрижелудочковыми инъекциями.
Во-вторых, это прямой подход, который позволяет немедленно визуализировать каннуляцию и знать, была ли она успешной или нет. Начните с того, что поместите свинью в положение лежа. Пальпируйте затылок и шею, чтобы найти и отметить затылочный гребень, позвоночник первых грудных позвонков и основание каждого уха.
Проведите прямую линию между гребнем и позвонками вдоль продольной оси. Затем, следуя за основанием черепа, нарисуйте две линии от гребня до основания каждого уха. Осторожно зажмите хвост животного и следите за рефлексом, чтобы увидеть, находится ли оно в глубоком сне.
Начните с того, что сделайте дермальный разрез вдоль продольной линии вниз до мышцы с помощью скальпеля с лезвием no 21, затем вытяните два перпендикулярных разреза дальше вдоль плеч, каждый от 10 до 15 сантиметров в длину. Начиная с затылочного гребня, делайте дермальные разрезы по линии вплоть до основания каждого уха. Используйте анатомические щипцы, чтобы захватить уголки кожи, образованные на затылочном гребне, затем слегка проведите лезвием скальпеля по фасции, чтобы отделить кожу от нижележащей мышцы.
Резекция кожи вдоль каждого из пяти разрезов для визуализации частей трапециевидной мышцы. Используйте скальпель, чтобы сделать продольный разрез глубиной примерно один сантиметр, где трапеция собирается вместе на средней линии, затем выполните тупое рассечение вдоль продольного разреза в мышцах, используя комбинацию прямых и изогнутых хирургических щипцов, которые разделят живот трапеции и лежащую в основе полуспиналистическую мышцу capitis biventer. Отрежьте скальпелем любые сохранившиеся мышечные волокна и продолжайте выполнять тупое рассечение до тех пор, пока не станет виден полуспиналистический комплекс капита.
Двигайтесь вдоль заднего аспекта черепа и разрывайте истоки трапециевидных и полуспиналисных мышц капита бивентерных мышц. Чтобы разделить две мышцы продольно, используйте хирургические щипцы для выполнения тупого рассечения до тех пор, пока полуспиналисный комплекс капита не будет полностью виден. Затем используйте самоудерживающиеся ретракторы для втягивания трапециевидных и полуспиналисных мышц капита бивентеров.
Используйте скальпель, чтобы сделать продольный разрез глубиной в один сантиметр, где животы полуспиналистического комплекса капита собираются вместе по средней линии. Выполните тупое рассечение с помощью хирургических щипцов, работающих вдоль продольного разреза между мышечными животами до тех пор, пока атлас и ось не станут ощутимыми. Двигайтесь вдоль заднего аспекта черепа, разрывая истоки полуспиналисных мышц capitis complexus.
Используйте скальпель и тупое рассечение, чтобы отделить мышцу продольно от нижележащих позвонков, затем используйте другой набор самоудерживающихся ретракторов для втягивания мышц полуспиналисного комплекса капита. Используйте скальпель, чтобы аккуратно удалить любую оставшуюся ткань, покрывающую область, где атлас встречается с основанием черепа. Поместите одну руку на шею животного и один палец на стыке атласа и черепа, затем одновременно поднимите голову и согните шею, пальпируя пальцем, чтобы открыть cisterna magna.
Убедитесь, что один человек поднимает и сгибает голову и шею животного, в то время как другой пальпирует для cisterna magna, отмечая его анатомическое местоположение. Медленно и осторожно введите канюлю 22 калибра в цистерну magna через твердую мозговую оболочку под углом, наклоненным к продольной оси, затем вытяните иглу из канюли и поместите колпачок на замок. Начните с нанесения суперклея и ускорителя, где канюля попадает в ткани, затем нанесите зубной цемент.
Подождите пять минут, пока цемент затвердеет. Аккуратно снимите колпачок с канюли. Прикрепите канюлю к мужскому концу линии IV с помощью трассера с помощью 10-сантиметрового расширения.
Вводите индикатор медленно со скоростью 100 микролитров в минуту либо вручную, либо с помощью микроинфузионного насоса. Снимите кран линии IV и замените его колпачком. Проверьте, виден ли трассер пульсирующим у основания канюли.
Затем поместите мешки с песком под шею животного, чтобы сохранить некоторое сгибание. Отпустите голову и оставьте животное в положении лежа. Отпустите самоудерживающиеся ретракторы и замените мышцы.
Используйте хирургические зажимы для полотенец, чтобы сблизить кожу над мышцами. Сначала используйте марлю, а затем одеяло, чтобы покрыть зажимы полотенца и разрез, чтобы ограничить потери тепла. Позвольте индикатору циркулировать в течение нужного количества времени.
Сшитые макроскопические изображения спинной поверхности мозга могут дать подробное представление о паттернах распределения индикатора по бороздам и трещинам. Подобные изображения с вентральной и боковой поверхностей мозга могут предоставить информацию о распределении индикатора в височной доле и боковой трещине. Изображения поверхности мозга с более высоким увеличением, полученные с помощью стереоскопа, могут помочь визуализировать индикатор в PVS вдоль артерий.
Макроскопические корональные участки мозга дают представление о глубине проникновения индикаторов в межполушарные трещины и распределение и структуру подкорковых индикаторов, таких как гиппокамп и полосатое тело. Иммуногистохимическое окрашивание для AQP4, глиального фибриллярного кислого белка и актина гладких мышц показало, что индикатор локализуется внутри PVS, а также перемещается в паренхиму головного мозга. Астроцитарные ножные отростки, образующие внешнюю поверхность PVS, идентифицируются с помощью AQP4 и глиального фибриллярного кислого белкового окрашивания.
Эндотелиальные клетки, которые образуют внутреннюю поверхность PVS, окрашиваются с помощью лектина и пятна GLUT-1. Окрашивание СМА идентифицирует артерии и артериолы и может быть использовано, чтобы показать, что приток PVS происходит вдоль артерий, а не вен, что составляет основную физиологию нормальной глимфатической функции. Забегая вперед, мы надеемся исследовать глимфатическую систему с высоким разрешением у крупных млекопитающих в контексте невропатологии, такой как инсульт и черепно-мозговая травма.
