H反射允许对神经回路的完整性进行电生理验证。我们提出了一种终端协议，用于直接量化小鼠前爪神经的H反射。与传统的相当神经非特异性的经皮记录不同，结果在小鼠和测量日之间的变化较小。
与患者的H反射记录类似，因为精确的定量允许在疾病模型中进行电生理学表征，例如脊髓损伤和中风。该方案需要扎实的实验技能，以便在小鼠中使用手术设备。
如果您不确定如何将神经与结缔组织和血管分开，请先练习。演示该程序将由我实验室的博士生Frederique Wieters进行。首先，将成人麻醉的 8 至 16 周龄 C57 黑色/6J 小鼠放在有盖的加热垫上，等待小鼠平静、呼吸稳定且反射不存在。
将鼠标放在其背面。然后，用胶带固定前爪。放置胶带，使测量电极易于插入前爪。
要测量鼠标的温度，请插入直肠探头并用胶带固定。涂抹眼膏以防止眼睛干燥。用一把细而圆的剪刀小心地去除皮毛，同时用镊子提起皮肤。
随后，用一把细小的圆形剪刀沿着前爪的腹后轴在皮肤上做一个一厘米的切口。小心地去除结缔组织，露出肌肉和神经下方。然后用镊子切除暴露的胸大肌深部肌肉，以评估正中神经。
用软纸巾去除少量血液和组织液。接下来，小心地从上到下切开乳房或腋窝肌肉，露出神经束。将神经束从结缔组织和肌肉组织中释放出来，长度约为 1.5 厘米。
使用弯曲的玻璃移液管小心地分离前爪的尺神经和正中神经。上神经是尺神经，下神经是正中神经。将刺激器钩电极平行排列在0.5至1毫米的距离处，并使用显微操纵器将双钩放置在靠近神经的位置。
使用玻璃钩将尺神经提升到刺激钩电极上。然后，用神经拉回电极并将其与其他神经分开。将电极沿爪子的长轴放置，以减少肌肉之间的串扰。
表面干燥附着在神经上的电极钩，并使用注射器施用凡士林以提供与邻近组织的电绝缘。要测量 H 反射，请将肌电图电极肌内注射在前爪。然后，将参比电极皮下放置在后肢中，由微型鳄鱼夹固定。
当刺激器打开时，观察前爪的微小抽搐等成功的刺激。引发M波和前爪微小可见抽搐的最小刺激电流在10至50微安之间。进行神经刺激15次，每次0.2毫秒长的脉冲。
在两组刺激之间暂停两分钟时，频率从 0.1、0.5、1.0、2.0 增加到 5 赫兹。此处显示了在通路中设置的记录图，用于测量霍夫曼反射和肌肉反应。评估了H波和M波振幅之间的比值。
刺激和各自的刺激伪影设置为零毫秒，然后是直接M波和随后代表H波的较小峰值。M波在刺激后约2毫秒发生，H波在6至8毫秒后发生，因为通过脊髓的传输时间较长。除了神经分离之外，凡士林在电极上以及两个钩子之间的应用至关重要。
这是一个终端实验。在我们的实验室中，这种技术为经皮H反射记录提供了新的金标准参考。
