يسمح منعكس H بالتحقق من صحة الفيزيولوجيا الكهربية لسلامة الدوائر العصبية. نقدم بروتوكولا طرفيا لتحديد منعكس H مباشرة على أعصاب مقدمة القدم في الفئران. تختلف النتائج عن التسجيلات التقليدية عبر الجلد غير المحددة للأعصاب ، وتكون النتائج أقل تباينا بين الفئران وأيام القياس.
على غرار تسجيلات H-reflex في المرضى ، حيث يسمح القياس الكمي الدقيق بالتوصيف الفيزيولوجي الكهربي في نماذج المرض ، مثل إصابة الحبل الشوكي والسكتة الدماغية. يتطلب البروتوكول مهارات تجريبية قوية في العمل مع معدات الجراحة في الفئران.
إذا لم تكن متأكدا من كيفية فصل الأعصاب عن النسيج الضام والأوعية الدموية ، فتدرب أولا. سيتم توضيح الإجراء من قبل فريدريك ويترز ، طالب دكتوراه من مختبري. للبدء ، ضع ماوس C57 black / 6J المخدر البالغ من العمر 8 إلى 16 أسبوعا على وسادة التدفئة المغطاة وانتظر حتى يهدأ الماوس ، ويكون التنفس مستقرا ، وتغيب ردود الفعل.
أدر الماوس على ظهره. ثم ، إصلاح forepaws مع الشريط. ضع الشريط بحيث يتم إدخال أقطاب القياس بسهولة في المقدمة.
لقياس درجة حرارة الماوس ، أدخل مسبارا مستقيميا وثبته بشريط. ضع مرهم العين لمنع جفاف العينين. قم بإزالة الفراء بعناية باستخدام مقص ناعم مستدير أثناء رفع الجلد بالملاقط.
بعد ذلك ، قم بعمل شق طوله سنتيمتر واحد في الجلد على طول المحور البطني الخلفي للمقدمة باستخدام مقص دقيق مستدير. قم بإزالة النسيج الضام بعناية وكشف الجزء السفلي من العضلات والأعصاب. ثم قم بإزالة العضلة الصدرية العميقة المكشوفة باستخدام ملقط لتقييم العصب المتوسط.
قم بإزالة كميات صغيرة من الدم وسوائل الأنسجة باستخدام المناديل الورقية الرخوة. بعد ذلك ، قم بقطع الثدي أو العضلات الإبطية بعناية من أعلى إلى أسفل لفضح الحزمة العصبية. حرر الحزمة العصبية من النسيج الضام والعضلي على طول 1.5 سم تقريبا.
افصل العصب الزندي والمتوسط للمقدمة بعناية باستخدام ماصة زجاجية منحنية. العصب العلوي هو العصب الزندي والسفلي هو العصب المتوسط. رتب أقطاب خطاف المحفز بالتوازي على مسافة 0.5 إلى ملليمتر واحد واستخدم مناولة دقيقة لوضع الخطاف المزدوج بالقرب من العصب.
استخدم الخطاف الزجاجي لرفع العصب الزندي على أقطاب خطاف التحفيز. ثم اسحب القطب مع العصب وافصله عن الأعصاب الأخرى. ضع الأقطاب الكهربائية على طول المحور الطويل للمخلب لتقليل الحديث المتبادل بين العضلات.
قم بتجفيف خطافات القطب الكهربائي المتصلة بالعصب بشكل سطحي وتطبيق الفازلين باستخدام حقنة لتوفير العزل الكهربائي من الأنسجة المجاورة. لقياس H-reflex ، ضع أقطاب تخطيط كهربية العضل في مقدمة المخلب. ثم ضع القطب المرجعي تحت الجلد في الطرف الخلفي ، ممسكا بمشبك تمساح مصغر.
عند تشغيل المحفز ، لاحظ التحفيز الناجح كتشنجات صغيرة من المقدمة. الحد الأدنى من تيار التحفيز لاستنباط الموجة M والتشنجات المرئية الصغيرة في مقدمة المخلب تتراوح بين 10 إلى 50 ميكروأمبير. قم بإجراء تحفيز العصب 15 مرة بنبضات طولها 0.2 مللي ثانية لكل منها.
مع توقف لمدة دقيقتين بين مجموعات المنبهات ، يزداد التردد من 0.1 ، 0.5 ، 1.0 ، 2.0 ، إلى 5 هرتز. يوضح هنا الرسم التوضيحي للتسجيل الذي تم إعداده في مسارات لقياس منعكس هوفمان واستجابة العضلات. تم تقييم النسبة بين سعة الموجة H و M.
تم ضبط التحفيز وقطعة التحفيز الخاصة به عند صفر مللي ثانية ، تليها الموجة M المباشرة والقمة الأصغر اللاحقة التي تمثل الموجة H. تحدث الموجة M بعد حوالي ميلي ثانية من التحفيز ، والموجة H بعد ستة إلى ثمانية أجزاء من الثانية بسبب وقت العبور الأطول عبر الحبل الشوكي. بجانب فصل الأعصاب ، يعد تطبيق الفازلين على القطب وكذلك بين الخطافين أمرا بالغ الأهمية.
هذه تجربة نهائية. في مختبرنا ، قدمت هذه التقنية مرجعا قياسيا ذهبيا جديدا لتسجيلات H-reflex عبر الجلد.
