H-refleksi, nöro devrelerin bütünlüğünün elektrofizyolojik olarak doğrulanmasını sağlar. Farelerde H-refleksini doğrudan ön pençenin sinirlerinde ölçmek için bir terminal protokolü sunuyoruz. Geleneksel oldukça sinir-spesifik olmayan transkutanöz kayıtlardan farklı olarak, sonuçlar fareler ve ölçüm günleri arasında daha az değişkendir.
Hastalardaki H-refleks kayıtlarına benzer şekilde, hassas nicelleştirme, omurilik yaralanması ve inme gibi hastalık modellerinde elektrofizyolojik karakterizasyona izin verdiği için. Protokol, farelerde cerrahi ekipmanlarla çalışmada sağlam deneysel beceriler gerektirir.
Sinirleri bağ dokusundan ve kan damarlarından nasıl ayıracağınızdan emin değilseniz, önce pratik yapın. Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan doktora öğrencisi Frederique Wieters tarafından yapılacak. Başlamak için, yetişkin anestezi uygulanan 8 ila 16 haftalık C57 siyah / 6J fareyi kapalı ısıtma yastığına yerleştirin ve fare sakinleşene, nefes almaya kararlı olana ve refleksler yok olana kadar bekleyin.
Fareyi sırt üstü çevirin. Ardından, ön pençeleri bantla sabitleyin. Bandı, ölçüm elektrotları ön ayaklara kolayca yerleştirilecek şekilde konumlandırın.
Bir farenin sıcaklığını ölçmek için bir rektal prob yerleştirin ve bantla sabitleyin. Gözlerin kurumasını önlemek için göz merhemi uygulayın. Cildi cımbızla kaldırırken kürkü bir çift ince, yuvarlak makasla dikkatlice çıkarın.
Daha sonra, bir çift ince, yuvarlak makasla ön pençenin ventroposterior ekseni boyunca deride bir santimetrelik bir kesi yapın. Bağ dokusunu dikkatlice çıkarın ve altındaki kas ve siniri açığa çıkarın. Daha sonra medyan siniri değerlendirmek için forseps kullanarak maruz kalan pektoralis profundus kasını çıkarın.
Az miktarda kan ve doku sıvısını yumuşak doku kağıdı ile çıkarın. Daha sonra, sinir demetini ortaya çıkarmak için meme veya aksiller kası yukarıdan aşağıya doğru dikkatlice kesin. Sinir demetini bağ ve kas dokusundan yaklaşık 1,5 santimetre uzunluğunda serbest bırakın.
Ön pençenin ulnar ve median sinirini bükülmüş bir cam pipet kullanarak dikkatlice ayırın. Üst sinir ulnar sinir, alt sinir ise median sinirdir. Uyarıcı kanca elektrotlarını paralel olarak 0,5 ila bir milimetre mesafede düzenleyin ve çift kancayı sinire yakın konumlandırmak için bir mikromanipülatör kullanın.
Ulnar siniri stimülasyon kancası elektrotlarına kaldırmak için cam kancayı kullanın. Ardından, elektrodu sinirle geri çekin ve diğer sinirlerden ayırın. Kaslar arasındaki karışmayı azaltmak için elektrotları pençenin uzun ekseni boyunca yerleştirin.
Sinire bağlı elektrot kancalarını yüzeysel olarak kurutun ve bitişik dokudan elektrik yalıtımı sağlamak için bir şırınga kullanarak petrol jölesi uygulayın. H-refleksini ölçmek için, elektromiyografi elektrotlarını kas içine doğru ön pençeye yerleştirin. Ardından, referans elektrotunu minyatür bir timsah klipsi tarafından tutulan arka bacakta deri altından yerleştirin.
Stimülatör açıldığında, ön pençenin küçük seğirmeleri olarak başarılı bir stimülasyon gözlemleyin. M-dalgasını ortaya çıkarmak için minimum stimülasyon akımı ve ön pençedeki küçük görünür seğirmeler 10 ila 50 mikroamper arasındadır. Sinir stimülasyonunu her biri 0.2 milisaniye uzunluğundaki darbelerle 15 kez gerçekleştirin.
Uyaran kümeleri arasında iki dakikalık duraklamalarla, frekans 0.1, 0.5, 1.0, 2.0'dan 5 hertz'e yükseltilir. Hoffman refleksini ve kas tepkisini ölçmek için yollarda kurulan kaydın bir örneği burada gösterilmiştir. H-ve M-dalgası genlikleri arasındaki oran değerlendirildi.
Uyaran ve ilgili stimülasyon artefaktı sıfır milisaniyeye ayarlandı, bunu doğrudan M-dalgası ve ardından H-dalgasını temsil eden daha küçük tepe noktası izledi. M-dalgası stimülasyondan yaklaşık iki milisaniye sonra ve H dalgası omurilikten daha uzun geçiş süresi nedeniyle altı ila sekiz milisaniye sonra meydana gelir. Sinirlerin ayrılmasının yanı sıra, elektrota ve ayrıca iki kanca arasına petrol jölesi uygulanması kritik öneme sahiptir.
Bu bir terminal deneyidir. Laboratuvarımızda bu teknik, transkutanöz H-refleks kayıtlarına yeni bir altın standart referans sağlamıştır.
